松花粉提取物皮肤修护功效研究.pdf
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1、 口 腔 护 理 用 品 工 业 第三十三卷第四册 年 月松花粉提取物皮肤修护功效研究杜可欣丁波(烟台新时代健康产业日化有限公司 烟台市食品药品检验检测中心)摘要:日晒、气候变化、年龄增长等多种因素可能导致皮肤发生不同程度的损伤,皮肤变得敏感脆弱的同时伴随干燥泛红等症状,越来越多的人希望皮肤可以通过修护的方式恢复原本健康的状态。为了探索解决方案,通过体外功效研究对松花粉提取物进行 胶原蛋白()表达、纤连蛋白()表达以及细胞增殖试验。结果表明松花粉提取物具有良好的皮肤修护作用,可应用于具有修护功效的护肤品。关键词:松花粉提取物;胶原蛋白;纤连蛋白;细胞增殖中图分类号:文献标识码:文章编号:()日
2、晒与气候变化是我们日常生活中避免不了的因素,随着年龄的增长皮肤水分与胶原蛋白等物质也在不断流失,这些因素都会造成皮肤发生不同程度的损伤,比如长期紫外线照射会导致皮肤日光性角化,可能引起红斑、脱皮等现象同时还会引起真皮层胶原纤维老化,造成色斑与皱纹;近年来由于工业经济活动的发展、土地侵蚀沙化等因素导致极端天气频繁,皮肤经常处于冷暖交替的状态,从而引起皮肤敏感。因此本研究旨在对植物提取物进行修护功效研究,为修护护肤品的开发提供试验依据。胶原蛋白普遍分布于细胞外基质中,胶原纤维是一种由成熟的胶原分子自发组装形成的超分子高级结构。型胶原蛋白分子可透过跨膜受体如整合素、盘蛋白结构域受体及糖蛋白,将变化的
3、外源刺激讯号传送至细胞内,发挥讯号分子的功能。胶原蛋白还可以截留、储存和运输生长因子,具有在器官发育、伤口愈合和组织修复过程中起重要作用的信号“中转站”功能,因此可通过对胶原蛋白表达的研究判断植物原料是否具有修护的功能。纤连蛋白(,)是细胞外糖蛋白的一种,在体液和细胞外基质中分别以可溶和不可溶的形式存在。上的多个结构域具有黏附特性,可与胶原、纤维蛋白、肝素和特异性细胞膜受体相结合,是主要的细胞黏附分子之一。参与各种细胞间吸附与迁移、细胞骨架组装、酪氨酸磷酸化、创伤修复与愈合等体内众多生理作用和功能,因此研究植物原料对纤连蛋白表达的影响可反应出该原料是否具有修护功效。细胞增殖是生物体的重要生命特
4、征,细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物,新的个体以细胞分裂的方式产生。多细胞生物(),以细胞分裂的方式产生新的细胞,用来补充身体内正在老化或死亡的细胞。成年生物仍需细胞增殖,以维持个体细胞数量和机体正常功能的相对平衡,取代衰老死亡的细胞;身体的创伤愈合、组织再生、病理组织修复等都要依赖细胞增殖,所以植物原料是否具有修护皮肤的功效,可以从细胞增值的角度来进行研究。松花粉收录于 本草纲目 中,由于其富含多糖、酚类与大量活性成分,在保健食品中应用广泛,但在化妆品领域应用较少,本研究以松花粉提取物为原料,开展 胶原蛋白()、纤连蛋白()表达研究以及细胞增殖()试验,探索松花粉提取物是否具有皮肤修护的
5、功效,为修护类护肤品提供试验依据。材料与方法 实验材料与仪器松花粉提取物(烟台新时代健康产业日化有限公司,批号:,称取 样品,溶解到 超纯水中,微孔滤膜过滤除菌。)细胞、人 胶原蛋白 试剂盒(武汉华美生物工程有限公司)、人纤连蛋白 试剂盒(武汉华美生物工程有限公司)、缓冲液、培养液、年第 期杜可欣,等:松花粉提取物皮肤修护功效研究 胰蛋白酶、胎牛血清、(试验用试剂均为国产。)样品制备 样品前处理 细胞外基质表达检测样品:配制工作浓度(万分之一)的待检原料溶液:取上述配制好的 浓度的待检原料溶液 ,加入到 培养液中,微孔滤膜过滤除菌。检测样品的准备用无血清培养液配制工作浓度(万分之一)的药品溶液
6、:每种药品取 浓度的药品溶液 ,加到 无血清培养液中。试剂配制与药物处理 细胞培养及药物处理后上清液的收集在培养皿中于 、条件下培养人永生化上皮细胞,待细胞量增长至 左右时加入上述检测原料,继续培养 小时,取上清液于 管中,离心 分钟,于 冰箱中保存。对细胞外基质表达检测试剂配制 洗液工作液的配制:将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(),保存。生物素标记抗体工作液的配制:用生物素标记抗体稀释液稀释浓缩生物素标记抗体(),现用现配。辣根过氧化物酶标记亲和素工作液的配制:用酶结合物稀释液稀释浓缩酶结合物(),现用现配。胶原蛋白()表达检测标准品的配制:加入标准品稀释液 至冻干标准品管中,充分溶解,静置 后充
7、分混匀(浓度为 ),然后逐级稀释为 、浓度的标准品。纤连蛋白()表达检测试标准品的配制:加入标准品稀释液 至冻干标准品管中,充分溶解,静置 后充分混匀(浓度为 ),然后逐级稀释为 、浓度的标准品。实验药物处理 细胞铺板:弃去原培养液,加入无血清培养液冲洗一次,加入胰酶消化,弃去胰酶,加入含血清培养液终止消化,将细胞冲下后转入离心管中,离心 ,弃去液体,加入 含血清培养液充分吹打均匀,取 进行血球计数板计数。根据细胞数量用含血清培养液分别制备 个 细胞浓度的细胞悬液各 ,按要求接种到 孔板中,每孔 ,条件下孵育 小时。药物处理:处理前,弃去 孔板中的培养液,对照组加入无血清培养液,药物处理组加入
8、工作浓度药品溶液,设置空白对照组(不加细胞,只加无血清培养液)。每孔加量为 ,、条件下孵育 小时。检测方法 细胞外基质表达的检测 准备好所有需要的试剂,将不需要的板条拆卸下来,放回装有干燥剂的铝箔袋,重新封好封口。每孔分别加入标准品或待测样品 ,轻轻晃动混匀,覆上板贴,温育 。弃去液体,甩干;每孔加生物素标记抗体工作液 ,覆上新的板贴,温育 。弃去孔内液体,甩干;每孔洗液洗板 次,每次浸泡 ,甩干。每孔加入辣根过氧化物酶标记亲和素工作液 ,覆上新的板贴,温育 小时。弃去孔内液体,甩干;每孔洗液洗板 次,每次浸泡 ,甩干。依序每孔加入底物溶液 ,避光显色 。依序每孔加入终止液 ,终止反应;终止反
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