DB2201∕T 20-2022 梅花鹿胚胎移植技术规范(长春市).pdf
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1、ICS65.020.30CCS B 442201长春市地方标准DB 2201/T 202022梅花鹿胚胎移植技术规范Technical specification for embryo transfer of sika deer 2022 - 01 - 14 发布2022 - 01 - 30 实施长春市市场监督管理局发 布DB 2201/T 202022I前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件的某些内容可能涉及专利,本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由长春市农业农村局提出并归口。本文件起草单位: 长春市农业科学院、
2、长春市乾艺生物科技研究院、 长春市颂祥牧业科技有限公司。本文件主要起草人:田来明、崔鹤馨、权心娇、付晓霞、李男、陈琦、叶飞、吕文发、魏海军、刘磊、张鸿、祝春玲、张事铭、吕铁峰、沈金龙。DB 2201/T 2020222梅花鹿胚胎移植技术规范1范围本文件规定了胚胎移植的基本要求、前期准备、胚胎移植、妊娠检查和记录的要求。本文件适用于梅花鹿胚胎生产和移植技术操作。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中, 注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。DB 22/T 2611-2017
3、梅花鹿冷冻精液3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1胚胎移植embryo transfer将良种母鹿体内早期胚胎或体外受精及其他方式获得的早期胚胎, 移植到同种生理状态相同的受体母鹿体内,使之继续发育成个体的技术。3.2供体鹿donor在胚胎移植过程中提供胚胎的母鹿。3.3受体鹿recipient在胚胎移植过程中接受胚胎的母鹿。3.4同期发情synchronization of estrus利用某些激素制剂人为地控制并调整母鹿在预定时间内集中发情。3.5阴道栓vaginal suppository一种内含孕酮、用特制的放置器将其放入阴道穹隆的同期发情装置。3.6超数排卵multiple
4、 ovulation在母鹿发情周期的适当时间, 应用外源促性腺激素处理, 使卵巢比自然发情时有更多的卵泡发育并排卵,简称为“超排”。3.7人工授精 artificial inseminationDB 2201/T 2020223用人工方法适时将精液输入发情母鹿宫颈内达到受孕, 以代替公母鹿交配而繁衍后代的一种繁殖方法。3.8冷冻精液frozen semen鲜精液经人工处理后在液氮中(-196 )冷冻保存的精液。4基本要求4.1供体和受体母鹿应为同一属种。4.2供体鹿和受体鹿发情时间相差不应超过 24 h。4.3从供体鹿输卵管内收集到的胚胎应移植到受体鹿的输卵管内,从供体鹿子宫角内收集到的胚胎应
5、移植到受体鹿的子宫角内。4.4胚胎发育应处于周期黄体期内。4.5供体鹿和受体鹿的比例应为 1:5 1:6。5前期准备5.1供体鹿和受体鹿选择5.1.1供体鹿选择5.1.1.1品种优良,生产性能好。5.1.1.2遗传性能稳定,谱系完整。5.1.1.3体质健壮,无遗传疾病、生殖疾病和传染性疾病。5.1.1.4产历清楚,无流产史,性周期正常,繁殖机能好的适龄成年母鹿。5.1.2受体鹿选择5.1.2.1健康、营养状况良好,无遗传疾病、生殖疾病和传染性疾病。5.1.2.2繁殖性能良好,发情周期正常,母性和哺乳能力良好,无流产史,产后 60 d 以上的经产母鹿。5.2同期发情5.2.1供体鹿空怀母鹿在任意
6、一天放入含有孕激素的阴道栓,12 d 后撤掉,同时肌肉注射孕马血清促性腺激素(PMSG)300 IU 350 IU。5.2.2受体鹿5.2.2.1空怀母鹿同期处理之前应进行直肠触摸或超声波检查,检查卵巢是否有周期性黄体。5.2.2.2操作步骤同 5.2.1。5.2.2.3同期发情处理后,密切观察,通过直肠触摸或超声波检查卵泡发育状态,观察发情。DB 2201/T 20202245.2.3发情鉴定阴道栓取出后 12 h 开始用试情公鹿每隔 2 h 4 h 试情一次,每次持续 0.5 h 1 h。母鹿稳定接受爬跨即为发情。记录母鹿接受爬跨的时间。5.3供体鹿超数排卵放置阴道栓当天记为第 0 d,放
7、阴道栓第 9 d 开始注射促卵泡素(FSH),每天注射两次间隔 12 h,早晚各 1 次, 4 天 8 次减量注射。到第 12 d 13 d 结束,共注射 320 mg FSH。第 7 次注射 FSH时取出阴道栓。5.4人工授精5.4.1冷冻精液品质应符合 DB 22/T 2611 的规定。5.4.2操作步骤5.4.2.1精液准备:细管冻精空气浴后,应用 38 2 温水直接浸泡解冻,不超过 10 min;5.4.2.2确认母鹿发情接受爬跨后,进行输精;5.4.2.3保定母鹿,外阴应清洗消毒;5.4.2.4把精液装入无胶塞注射器,并连接输精管,排出空气,冻精的剂量为 2 支/头;5.4.2.5抹
8、无菌润滑剂,手持输精管缓慢插入母鹿阴道内,小心通过子宫颈插入子宫体,推入精液,将输精管缓慢退出,完成输精。6胚胎移植6.1手术冲胚6.1.1时间应在供体母鹿第一次配种后 6 d 7 d。6.1.2器材冲胚管及内芯、钝性9 # 或12 # 针头、止血钳、注射器、培养皿、量筒、毛剪、镊子、手术刀、手术缝合针和缝合线、创布、止血纱布、体式显微镜、恒温板等。6.1.3药品新洁尔灭、0.9%生理盐水、胚胎保存液( Holding液)、酒精、碘伏、青霉素、链霉素、石蜡油、麻醉药、解麻药等。6.1.4冲胚液的配置杜氏磷酸盐缓冲液( PBS),配方参见附录 A 。或者使用商品冲胚液。6.1.5步骤DB 220
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