放射性125I粒子对人肺癌移植瘤小鼠的抑瘤作用及对细胞凋亡的作用研究.pdf
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1、探讨放射性 粒子对人肺癌移植瘤小鼠肿瘤的抑制作用及对细胞凋亡的影响 方法将肺癌 细胞种植入 只小鼠背部皮下接种成功后将 只小鼠随机分为模型组、空白对照组和观察组 天后将 枚空白粒子植入空白对照组小鼠移植瘤内观察组小鼠移植瘤内植入 粒子 枚模型组小鼠移植瘤内不植入任何粒子 后测定移植瘤体积并计算抑瘤率、染色观察瘤组织病理学变化、免疫组织化学法检测细胞增殖核抗原()表达计算细胞增殖指数、染色检测细胞凋亡情况以及蛋白印迹法(法)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶()、淋巴细胞瘤()和 相关 蛋白()相对表达量 结果 模型组和空白对照组细胞结构完整、无坏死或少量坏死观察组细胞结构被破坏、出现大量坏死、坏死区周
2、围细胞分布不均匀且细胞间隙增宽 与模型组和空白对照组比较观察组小鼠肿瘤体积减小、细胞凋亡指数及 和 表达升高细胞增殖指数及 表达降低(.)与空白对照组比较观察组抑瘤率升高(.)结论 粒子可抑制肺移植瘤生长诱导瘤细胞凋亡可能是通过调控/凋亡相关蛋白发挥作用 【关键词】肺移植瘤细胞凋亡放射性 粒子抑瘤 :./.中图分类号:.文献标识码:文章编号:().【】.()()()()().(.).(.).【】(:)实用癌症杂志 年 月第 卷第 期 .肺癌是一种全球范围内常见的恶性肿瘤随着生活环境的恶化肺癌发病率呈持续上升趋势已发展成为世界公共卫生问题 放射性 粒子是一种人工同位素通过持续释放射线杀伤肿瘤细胞
3、植入 粒子可有效提高早期小细胞肺癌患者生存率 基础研究发现 粒子植入可抑制乳腺癌移植瘤小鼠肿瘤生长另有研究表明 放射性粒子可提高人肺鳞癌 细胞荷瘤鼠移植瘤生长抑制率 本研究通过将人肺腺癌 细胞植入小鼠背部皮下并将 粒子种植于肿瘤内探讨 粒子对肺腺癌荷瘤鼠肿瘤生长状况的影响及对癌细胞凋亡的作用 材材料料与与方方法法.细胞系和动物 肺癌细胞株 购自美国 细胞库健康清洁级/雄性小鼠 只 周龄 购自北京北生研生物制品有限公司许可证号:(京).试剂和仪器 购自上海欣科医药有限公司 试剂盒、试剂盒购自南京建成生物有限公司兔抗人半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 ()、淋巴细胞瘤()、相关 蛋白()以及 抗体购自美国
4、公司兔抗人细胞增殖核抗原()抗体购自美国 公司电泳仪购自美国赛默飞公司.模型制备及实验分组 /离心 收集 细胞培养基将细胞制成密度为 个/的悬液将.悬液注入小鼠背部皮下每天用游标卡尺测量肿瘤直径达到 即为肺癌小鼠造模成功 只小鼠随机分为模型组、空白对照组以及观察组一组 只 天后碘伏擦拭肿瘤边缘 号植入针从肿瘤边缘 的位置进入皮下将针推进至肿瘤内观察组小鼠植入 粒子一枚空白对照组小鼠植入空白粒子一枚模型组小鼠仅刺破皮肤不植入任何粒子 后各组小鼠断颈处死进行实验.肿瘤生长情况 分别在植入粒子前和植入粒子第 天游标卡尺测量肿瘤长径和短径计算肿瘤体积肿瘤体积 (长径 短径)/植入粒子第 天各组小鼠断颈
5、处死后取出移植瘤称重计算抑瘤率 (模型组肿瘤质量观察组肿瘤质量)/模型组肿瘤质量.免疫组织化学法检测 蛋白表达 肿瘤体积和质量测量完成后取部分肿瘤组织置于 多聚甲醛中固定行常规切片切片厚度为 经脱水、透明后滴加 于组织切片上阻断内源性过氧化物酶活性胰蛋白酶进行组织抗原修复 室温封闭 滴加 抗体()孵育过夜 复温 冲洗二抗室温孵育 冲洗 显色液显色 苏木精复染 常规脱水透明中性树胶封片显微镜下观察表达 的细胞表现为棕黄色 .分析 表达的细胞数计算增殖指数 表达的细胞数/总细胞数.染色观察肿瘤组织变化 取肿瘤组织切片经常规脱水透明后滴加伊红染液染色 双蒸水将多余染液冲洗干净滴加苏木精染液染色 双蒸
6、水冲洗干净后中性树胶封片显微镜下观察.染色检测细胞凋亡 取石蜡切片经脱水透明后 蛋白酶 滴加于组织切片上静置 溶液滴于组织切片上避光静置 终止液反应 滴于组织上避光静置 滴加 显色液于组织上室温反应 苏木精复染乙醇梯度脱水二甲苯透明中性树胶封片显微镜下观察 细胞凋亡指数()凋亡细胞数/肿瘤细胞总数.蛋白印迹法检测瘤组织中 、和 蛋白相对表达量 取 瘤组织液氮中研磨 裂解液裂解 /离心 (离心半径)吸取上清液 试剂盒测定蛋白浓度 煮沸 使蛋白变性 电泳 .湿转 室温封闭 、和 蛋白一抗()孵育过夜二抗()孵育 法显影 分析条带灰度值、和 相对表达量 、和 条带灰度值/条带灰度值.统计学方法 采用
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