慢性肾脏病患者治疗前后血清miR-30a-5p和miR-196a水平变化及价值.pdf
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1、:临床实验研究慢性肾脏病患者治疗前后血清 和 水平变化及价值朱媛媛,徐天,于茜,孙伟,顾万建(江苏省中医院,科技处,肾内科,检验科,南京)摘要:目的 检测并分析慢性肾脏病(,)患者治疗前、连续治疗不同随访时间点血清 和 水平动态变化,探讨其作为 患者辅助诊断及疗效监测分子标志物的价值。方法 收集江苏省中医院肾内科 年 月至 年 月就诊的 例 患者治疗前以及连续治疗并随访 个月的血清标本,记录患者血生化及尿液指标,同时收集 例体检健康者血清标本作为对照。采用实时荧光定量 检测各组血清 和 水平。采用非参数检验、秩相关分析血清 和 的水平变化及临床应用价值。结果 与健康人对照相比,患者治疗前血清(
2、,)(,),和(,)(,),水平显著升高。与 患者治疗前相比,患者血清和 水平从治疗后第 个月开始呈持续降低趋势,至第 个月,其(,)(,),(,)(,),水平与治疗前比较差异有统计学意义。相关性分析显示,血清 和 水平与估算的肾小球滤过率()呈显著负相关(,;,)。结论 患者血清 和 水平检测有助于反映肾脏功能,具备成为 患者辅助诊断及疗效监测分子标志物的潜能。关键词:慢性肾脏病;辅助诊断;分子标志物中图分类号:文献标志码:,(;,):(),(,)(,),(,)(,),(,)(,),(,)(,),(;,;,),:;临床检验杂志 年 月第 卷第 期 ,基金项目:江苏省中医院院级创新发展基金(,
3、);国家自然科学基金()。作者简介:朱媛媛,年生,女,助理研究员,硕士研究生,主要从事疾病分子标志物研究。通信作者:顾万建,主任技师,:。微小核糖核酸()是一类表达具组织特异性的非编码小分子,参与多种生理病理过程。研究显示,和 在肾小球中高表达,并与肾脏足细胞损伤和肾纤维化密切相关,在慢性肾脏病(,)的发生、发展中发挥重要作用。患者血清中特定变化的 可作为患者潜在的分子指标。然而,目前有关 患者血清 的研究主要集中在辅助诊断、病理分型等方向,尚缺乏患者治疗前后血清 水平的动态变化及其作为 疗效监测标志物的研究报道。本研究针对在 发 生、发 展 过 程 中 发 挥 重 要 功 能 的和,通过检测
4、和分析 患者治疗前及连续治疗不同随访时间点血清和 水平的动态变化并分析其与肾功能指标的相关性,探讨其作为 患者辅助诊断及疗效监测分子标志物的价值。资料与方法 研究对象收集 年 月至 年 月江苏省中医院肾内科收治的 例 患者血清标本,男 例,女 例,年龄()岁,纳入标准:()经美国国家肾脏基金会 指南标准确诊为;()年龄 岁;()肾小球滤过率()为 ;()血压收缩压,舒张压;()尿蛋白定量 。排除标准:()伴随急性肾功能衰竭者;()肾移植术后或原发病为糖尿病肾病或多囊肾者;()合并急性肾损伤、心、脑、肺、肝、造血系统等严重原发性疾病;()精神类疾病史;()个月内透析患者及使用激素和 或免疫抑制剂
5、治疗;()妊娠或准备妊娠、哺乳期的妇女。患者进行西医基础治疗和 或中药配方颗粒治疗,入组时肾脏病史均超过 个月。收集患者治疗前以及连续治疗随访 个月(每月随访 次,其中 例患者分别在治疗第 个月和第 个月失访,另外 例患者无失访)的临床资料。另收集同期就诊的 例体检健康者作为健康人对照组,男 例,女 例,年龄()岁,健康人对照与 患者年龄(,)、性别(,)差异无统计学意义。本研究经江苏省中医院伦理委员会批准(伦理文号:),所有入选患者均获得本人知情并签署知情同意书。仪器和试剂 型高速冷冻离心机(德国 公司),型 扩增仪(美国 公司),实时荧光定量 仪(西安天隆科技公司),型全自动生化仪(美国
6、公司)。血肌酐检测试剂盒(日本梅那丽斯医疗株式会社),尿素测定试剂盒(四川迈克公司),血钾检测电极和电解质参比液(美国 公司),血清蛋白测定试剂盒(北京莱帮生物技术公司),尿蛋白检测试剂盒(浙江美康生物科技股份公司),酸性水饱和酚(美国 公司),分析纯级别氯仿、异丙醇、无水乙醇(上海国药集团试剂公司),醋酸钠溶液(、,美国 公 司),水(美 国 公 司),逆转录引物、上、下游引物及 探针试剂盒(美国 公司),逆转录体系和 体系所用试剂 逆转录酶、酶、及等(大连 公司)。方法标本采集与处理采用含分离胶的真空生化采集管收集 患者治疗前、连续治疗 个月不同随访时间点(每月随访 次)以及健康人对照者体
7、检时的空腹静脉血标本 ,室温下 离心 ,收集离心后的血清标本,置于 保存。尿蛋白和血清学指标测定采用 型全自动生化仪及相应的配套试剂盒检测血肌酐(肌氨酸氧化酶法,参考区间为 )、血尿素氮(尿素酶谷氨酸脱氨酶法,参考区间为 ),血钾(电极法,参考区间为 ),血清蛋白(溴甲酚绿法,参考区间为 );用焦焙酚红法检测尿蛋白含量(参考值 )。所有检测项目在测定前均先进行室内质控检测,待室内质控合格后再进行样本测定,检验结果均以报告定量数据为准。采用 方程式计算。血清 提取及 测定血清总 提取、逆转录及 检测步骤及方法见参考文献。将 血清提取的 用 水完全溶解后置于 保存,另取 用于 逆转录。逆转录采用大
8、连 公司逆转录反应体系,包括:,逆转录引物 ,逆转录酶 ,临床检验杂志 年 月第 卷第 期 ,水 。逆转录反应循环参数:,样本置于 保存。另取 用于 检测。序列为(引物及 探针由美国 公 司 设 计 和 提 供,货 号 为 ),序列为(引物及 探针由美国 公司合成,货号为)。反应体系:,酶 ,上、下游引物和探针 ,水 。循环参数:;,个循环。血清 的含量采用 法计算,在 提取过程中加入 浓度为 外源性(序列为,引物及 探针由美国 公司设计和提供,货号为)作为外参照,将待测 与 同时检测,采用仪器自带的软件收集荧光信号并进行数据分析,根据每份样本目的 与 检测的 值(每个 管内的荧光信号到达设定
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