李比利氏灰粉蚧的分子鉴定方法及截获分析.pdf
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1、International Journal of Ecology 世界生态学世界生态学,2023,12(3),247-252 Published Online August 2023 in Hans.https:/www.hanspub.org/journal/ije https:/doi.org/10.12677/ije.2023.123030 文章引用文章引用:刘若思,陶可欣,马福欢,张丽杰,种焱,杨倩倩.李比利氏灰粉蚧的分子鉴定方法及截获分析J.世界生态学,2023,12(3):247-252.DOI:10.12677/ije.2023.123030 李比利氏灰粉蚧的分子鉴定方法及截获分
2、析李比利氏灰粉蚧的分子鉴定方法及截获分析 刘若思刘若思1*,陶可欣陶可欣2,马福欢马福欢3,张丽杰张丽杰1#,种种 焱焱1,杨倩倩杨倩倩2 1中国海关科学技术研究中心,北京 2中国计量大学生命科学学院,浙江 杭州 3凭祥海关,广西 凭祥 收稿日期:2023年6月23日;录用日期:2023年7月24日;发布日期:2023年7月31日 摘摘 要要 本文对来自于印度尼西亚截获的山竹果上的粉蚧进行了分子和形态学鉴定,其结果确定为李比利氏灰粉本文对来自于印度尼西亚截获的山竹果上的粉蚧进行了分子和形态学鉴定,其结果确定为李比利氏灰粉蚧蚧Dysmicoccus lepelleyi(Betrem)。介绍了其分
3、子生物学鉴定方法,通过分子比对可准确鉴定其种类,。介绍了其分子生物学鉴定方法,通过分子比对可准确鉴定其种类,并通过构建系统发育树确定了其与几个近缘种的关系,拍摄了本次截获粉蚧的生态照及玻片标本照。对并通过构建系统发育树确定了其与几个近缘种的关系,拍摄了本次截获粉蚧的生态照及玻片标本照。对海关检疫系统截获的李比利氏灰粉蚧进行了查询,分析了该虫的截获规律。海关检疫系统截获的李比利氏灰粉蚧进行了查询,分析了该虫的截获规律。关键词关键词 李比利氏灰粉蚧李比利氏灰粉蚧,分子鉴定分子鉴定,截获分析截获分析 Molecular Identification and Interception Analysis
4、 of Dysmicoccus lepelleyi(Betrem)Ruosi Liu1*,Kexin Tao2,Fuhuan Ma3,Lijie Zhang1#,Yan Chong1,Qianqian Yang2 1Science and Technology Research Center of China Customs,Beijing 2College of Life and Sciences,China Jiliang University,Hangzhou Zhejiang 3Pingxiang Customs,Pingxiang Guangxi Received:Jun.23rd,
5、2023;accepted:Jul.24th,2023;published:Jul.31st,2023 Abstract Both morphological characteristics and DNA barcoding were used to compare and identify the mealybug in mangostens intercepted from Indonesia in this study.The mealybug is identified as *第一作者。#通信作者。刘若思 等 DOI:10.12677/ije.2023.123030 248 世界生
6、态学 Dysmicoccus lepelleyi.The species can be accurately identified by molecular comparison,and the relationship between the species and several related species can be determined by constructing phylogenetic tree.Habitus photos and slide specimen photos of the mealybug were taken.The pattern of Dysmic
7、occus lepelleyi intercepted by customs quarantine system was analyzed.Keywords Dysmicoccus lepelleyi,Molecular Identification,Interception Analysis Copyright 2023 by author(s)and Hans Publishers Inc.This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License(CC BY 4.0).http:/c
8、reativecommons.org/licenses/by/4.0/1.引言引言 李比利氏灰粉蚧 Dysmicoccus lepelleyi(Betrem)是海关检疫经常截获的一种有害生物,英文名 Le Pelley Mealybug。此有害生物寄主广,已知有 15 个科 30 余种,包括山竹、红毛丹、椰子、香蕉等热带水果,主要分布于印度尼西亚、柬埔寨、马来西亚、菲律宾、新加坡、泰国、越南等与我国有水果贸易往来的东南亚国家,但该虫在我国尚无分布。本文通过对来自印度尼西亚进行分子生物学和形态学鉴定,并对我国截获的李比利氏灰粉蚧进行分析,确定了口岸鉴定该虫的分子生物学鉴定方法较适合常规鉴定,并就
9、该虫的截获特点进行了分析,明确了货检、山竹寄主、来源国为泰国是截获该虫的重要途径。2.分子鉴定分子鉴定 2.1.供试虫源供试虫源 印度尼西亚山竹上的粉蚧雌成虫 2 头。2.2.提取提取 DNA 及扩增方法及扩增方法 取 2 头雌成虫(样品编号为 2-F-ZLJ_B05 和 3-F-ZLJ_C05)用于 DNA 提取,提取方法参考廖力等1的研究。扩增 CO 片段引物序列分别为 PcoF1 和 LepR1,PCR 扩增条件参考 Park 等2的研究。PCR 反应中的引物来自安升达生物科技有限公司,试剂来自天根生化科技(北京)有限公司,扩增产物经电泳检测有目标扩增片段后送安升达生物科技有限公司进行正
10、反向测序。测序结果采用 MEGA 7 软件进行校对和拼接3,除去两端引物序列,获得长度分别为 658 bp 和 659 bp 的 DNA 条形码序列。2.3.分子分子序列序列的比对的比对 将收到的 2 条序列 2-F-ZLJ_B05 和 3-F-ZLJ_C05 分别在 NCB I 中进行 BLAST 比对,2-F-ZLJ_B05 与Dysmicoccus lepelleyi的CO 基因序列KY372997相似度为99.68%;3-F-ZLJ_C05与Dysmicoccus lepelleyi的 CO 基因序列 KX015111 相似度为 99.84%。结果显示 2-F-ZLJ_B05 和 3-
11、F-ZLJ_C05 都是李比利氏灰粉蚧 Dysmicoccus lepelleyi 的 CO 基因序列。2.4.系统发育树的构建系统发育树的构建 从 GenBank 下载 6 条已公布的灰粉蚧属 Dysmicoccus 线粒体 CO 基因序列和大洋臀纹粉蚧Open AccessOpen Access刘若思 等 DOI:10.12677/ije.2023.123030 249 世界生态学 Planococcus minor CO 基因序列,结合已有 2 条 CO 基因序列(2-F-ZLJ_B05 和 3-F-ZLJ_C05),利用MEGA X 软件比对并剪切得到 615 bp 核心序列集(表 1
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