槲皮素对阿霉素所致肾病综合征大鼠的保护作用及机制.pdf
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1、山 东 科 学 第 卷 第 期 年 月出版.:./.【药理与毒理】收稿日期:作者简介:宋泽宇()男硕士研究生研究方向为创新药物的开发研究:.通信作者范华英()女博士教授研究方向为创新药物的开发研究:.槲皮素对阿霉素所致肾病综合征大鼠的保护作用及机制宋泽宇李振元潘涛孟祥婷李淞董海轮范华英(烟台大学 药学院 分子药理和药物评价教育部重点实验室山东 烟台)摘要:探讨槲皮素对肾病综合征模型大鼠的保护作用 选用 级雄性大鼠单次尾静脉注射阿霉素./诱导肾病综合征大鼠模型收集尿液测定 尿蛋白检测血液生化血清总蛋白和白蛋白、总胆固醇、甘油三酯以及肾功能尿素氮和血肌酐的含量 染色观察肾组织病理变化透射电镜观察肾
2、足细胞超微结构变化 检测肾组织、和 的表达 结果表明:槲皮素能有效缓解肾病综合征模型大鼠的 尿蛋白明显改善各项血液生化指标和肾功能损伤减轻肾组织病理变化和肾足细胞的足突融合同时槲皮素可以降低 的表达并提高 和 的表达 槲皮素可有效治疗阿霉素诱导的肾病综合征模型大鼠其可能通过稳定足细胞正常结构和功能发挥保护作用关键词:槲皮素肾病综合征阿霉素蛋白尿足细胞中图分类号:.文献标志码:文章编号:()开放科学(资源服务)标志码():().()./.().山 东 科 学 年 .肾病综合征()是肾内科最常见的慢性肾病()临床上主要表现为大量尿蛋白、低白蛋白血症、高脂血症和水肿 有研究表明 患病率逐年上升全球总
3、患病率为.而中国患者高达.根据改善全球肾脏病预后组织(:)实践临床指南目前主要采用糖皮质激素类药物进行治疗 但在长期和大剂量使用此类药物治疗的过程中往往会伴随着严重的不良反应且还有部分患者存在对药物治疗无效的问题严重影响了患者的生活质量 因此寻找新的治疗药物和策略以期提高治疗 的疗效和减少治疗过程中的不良反应对于临床治疗 具有重要意义槲皮素是一种植物天然黄酮醇类化合物广泛存在于各种中草药中具有广泛的药理活性包括抗氧化、抗炎、抗凋亡和抗纤维化等 近些年的研究表明槲皮素可用于抗糖尿病、抗高血压病和抗微生物感染等疾病的治疗当中且可以通过减轻多种肾脏疾病中的肾毒性、细胞凋亡、纤维化和炎症来保护肾脏其在
4、多种 的防治中有着广泛的应用 但槲皮素对 是否有保护作用及其作用机制尚不清楚因此本研究以与临床 相似的阿霉素肾病大鼠模型为研究对象探讨槲皮素在 中的有益作用及潜在机制为槲皮素的临床用药和 治疗的新方法、新策略提供理论依据 实验部分.实验材料.实验动物雄性的 大鼠()只()购自济南朋悦实验动物繁育公司合格证编号(鲁)实验大鼠均在()湿度 的条件下饲养给予足够的饲料和饮水适应性饲养 后进行实验 本研究经过烟台大学动物伦理委员会批准()实验方案严格按照烟台大学动物伦理委员会的相关规定设计.实验仪器全自动血生化分析仪(美国雅培公司)型离心机(赛默飞世尔科技有限公司)型超灵敏化学发光成像分析仪(美国通用
5、医疗有限公司)电子天平(上海舜宇恒平科技有限公司)低温型研磨仪(武汉赛维尔生物科技有限公司)型酶标仪(美国 公司)透射电子显微镜(日本电子株式会社)大鼠代谢笼(上海玉研科学仪器有限公司).实验试剂槲皮素(纯度)购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司阿霉素(注射用盐酸多柔比星)购自深圳万乐药业有限公司批号 规格 /支醋酸泼尼松片购自浙江仙琚制药股份有限公司批号规格 /片(二辛可宁酸测定)蛋白定量试剂盒购自碧云天生物技术有限公司、和 多克隆抗体购自 .实验方法.动物分组适应性饲养一周的 大鼠 只采用随机对照表按照大鼠的体质量随机分为 组:正常对照组、模型第 期宋泽宇等:槲皮素对阿霉素所致肾病综合征大鼠
6、的保护作用及机制组、./泼尼松组、/槲皮素组、/槲皮素组和 /槲皮素组每组 只 以上分组实验用的剂量均以药物成分含量进行计算设计.实验造模及给药通过单次尾静脉注射阿霉素./正常对照组注射等体积生理盐水 注射阿霉素当日记为实验第 第 时开始给予泼尼松和不同剂量槲皮素灌胃()正常对照组:以等体积.羧甲基纤维素钠水溶液灌胃()模型组:以等体积.羧甲基纤维素钠水溶液灌胃()泼尼松组:将醋酸泼尼松片溶于.羧甲基纤维素钠溶液中配制成醋酸泼尼松混悬液按照./的剂量灌胃()/槲皮素组、/槲皮素组和 /槲皮素组:将槲皮素溶于.羧甲基纤维素钠水溶液中配制成 /的槲皮素混悬液按照大鼠的体重调整相应的剂量灌胃.检测指
7、标.尿蛋白含量测定用大鼠代谢笼收集第、的 尿液 收集尿液后记录尿量并在 的条件下离心 留取上清液使用 蛋白定量试剂盒对尿蛋白进行定量.血液生化和肾功能检测实验结束后各组大鼠称重后麻醉取大鼠腹主动脉血液静置 在 的条件下离心 取上清液用全自动血生化检测仪检测血清总蛋白、白蛋白、总胆固醇、甘油三酯、尿素氮和血肌酐的含量.肾组织病理学检查用动脉夹将肾动脉夹住后摘取大鼠双侧肾脏将右侧肾脏纵向切开一部分固定在 多聚甲醛溶液中梯度脱水透明浸蜡包埋制成组织蜡块 经苏木精伊红()染色后观察肾组织病理学形态变化.肾组织超微结构检查另一部分肾组织切取多个约 的立方体块状固定在预冷的.固定液()中 在.戊二醛溶液、
8、四氧化锇溶液中依次固定然后梯度脱水、包埋、切片 柠檬酸铅和双氧铀对切片进行染色后置于透射电镜下观察.、和 蛋白含量测定取 肾组织加入 裂解液超声破碎后于 、/条件下离心 取上清液 法进行蛋白定量 每组蛋白样品在 进行电泳分离蛋白并转移至 膜室温封闭 一抗于 过夜孵育 洗膜 次二抗于室温孵育 洗膜 次最后超敏 化学发光显影.统计学方法本实验使用统计学软件 .对数据进行处理计量资料以均值标准差()来表示 采用 进行组间比较分析.为差异有统计学意义 结果.槲皮素对大鼠 尿液中尿蛋白定量的影响槲皮素对大鼠尿蛋白定量的影响如表 所示 单次尾静脉注射肾上腺素后大鼠尿蛋白定量逐渐增加实验第 模型组和各给药组
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