核酸扩增检测技术检测梅毒螺旋体的进展.pdf
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1、http:/综Apr.2023.Vol.40.No.2Dermatology Bulletin皮肤科学通报2023年4月264第40 卷第2 期核酸扩增检测技术检测梅毒螺旋体的进展符梯,孙鹏,王妍,陈江汉摘要 梅毒是全球传染病防治的重点,近年来其发病率逐年上升。由于梅毒临床表现多样且缺乏特异性,因此诊断较为依赖实验室检查。梅毒的血清学检测是现今诊断梅毒的主要方法,但有局限性。核酸扩增检测技术作为病原学检测之一,特异性高,发展空间大,技术更新快,日后有望成为梅毒诊断的“金标准”,本文就近年来梅毒核酸检测的研究成果和进展做一综述。关键词梅毒;核酸扩增检测厂中图分米号1R759.文献标识码厂文音编号
2、2096-4382(2023002-0264中图分类号R759.1文献标识码A文章编号2096-4382(2023)02-0264-05Advances in Detection of Treponema Pallidum by UsingNucleic Acid Amplification TestFU Ti,SUN Peng,WANG Yan,CHEN Jianghan(Department of Dermatology,Changzheng Hospital,Naval Medical University,Shanghai 200003,China)Corresponding auth
3、orCHENJianghan.E-mail.cheniianghan Corresponding author CHEN Jianghan,E-mail:chenjianghan AbstractSyphilis is the focus of the prevention and control of infectious disease worldwide andits incidence rate has been constantly increasing in recent years.Due to its diverse andnonspecific clinical manife
4、stations,the diagnosis of syphilis depends on laboratorytests.Serological testing is the main method for clinical diagnose nowadays,but it haslimitations.As one of the of etiological testing,the nucleic acid amplification test(NAAT)has high specificity,large development space and rapid technological
5、updates,and it is expected to become the gold standard for the diagnosis ofsyphilis in the future.This article reviewed the latest research findings and progress ofthe NAAT for syphilis.Key wordsSyphilis;NAAT基金项目长城医院人才建设三年行动计划“金字塔人才工程”(czjzt2020021)作者单位海军军医大学附属上海长征医院皮肤病与性病科,上海2 0 0 0 0 3通信作者陈江汉,E-ma
6、il:chenjianghan http:/X7265皮肤科学通报2 0 2 3年4月第40 卷第2 期梅毒是由苍白密螺旋体(Treponemapallidum,T.pallidum)感染引起的慢性、累及全身的性传播疾病。WHO疫情数据显示2 0 16 年全球新增梅毒患者超过6 30 万 1。近年来,国内外梅毒发病率也是逐年上升 2 3。一直以来,梅毒是性病防治的重点,早期、准确的诊断是控制传染源的关键目前对梅毒的诊断高度依赖实验室检查,实验室检查包括血清学检测和病原学检测。血清学检测由于取材方便、成本低、敏感性和特异性较高,是目前诊断梅毒的主要实验室检查方法。血清学检测分为螺旋体试验和非螺旋
7、体试验,其局限性主要有:均有假阳性可能(如妊娠、恶性肿瘤及自身免疫疾病等),导致误诊;在感染的早期阶段,或出现“前带现象 时,检测可能呈阴性,导致漏诊 4-5;螺旋体试验和非螺旋体试验结果不一致时,造成诊断困难 6-7 ;评估治疗反应时,抗体滴度下降缓慢,无法在短时间内评估治疗效果 8 ;无法评估梅毒患者的传染性 9-10 ;诊断血清抗体持续阳性患者再感染困难病原学检测方法是梅毒感染的直接证据。检测方法一:形态学检查,即经典的暗视野显微镜检查、直接荧光抗体测试、镀银染色方法,它们被认为是梅毒诊断的“金标准”,但是此方法对取材制片以及检查者要求高,有的临床标本中可能没有取到梅毒螺旋体或者没有被观
8、察到;方法二:分子生物学检查,主要通过检测各种样本中的梅毒螺旋体以及相关物质,来确定梅毒的感染。聚合酶链式反应(polymer-asechainreaction,PCR)是分子诊断中的一项关键技术,是诊断早期梅毒的有利补充手段,此方法特异性高,今后用于诊断的潜力巨大,本文就梅毒螺旋体的核酸检测技术做一综述。1梅毒核酸检测技术进展核酸扩增技术(nucleic acid amplification tes-ting,NAAT)是检测不同来源和疾病阶段样本中梅毒螺旋体核酸物质的最常用方法,主要的技术为PCR检测,扩增涉及的梅毒靶基因包括螺旋体膜蛋白A(t mp A)、亚表面脂蛋白质4D(4D)、碱性
9、膜蛋白(b mp)和梅毒螺旋体内47 kDa脂蛋白(tpp47)以及DNA聚合酶I(polA)等编码基因 ,其中又以tpp47和polA基因为最常检测的基因,二者在敏感性与特异性方面无差别,Romain等 12 的研究表明,相较于检测单个基因,同时检测两种基因可提高敏感性。PCR检测涉及到的技术主要包括常规PCR、巢式PCR、实时定量PCR和多重PCR。不同PCR技术有各自的优缺点。Shields等 13的研究表明,常规PCR检测一期梅毒皮肤黏膜溃疡拭子的敏感性为8 4.6%8 9.1%,特异性为9 3.1%100%,但对二期梅毒的敏感性下降到50%,目前普遍认为,常规PCR仅适用于梅毒的早期
10、诊断。相较于常规PCR,巢式PCR具有更高的准确性,能将总体特异性提高至9 5%,而敏感性大约为7 0%4-15实时定量PCR是目前最常用的技术手段,它的优势在于能对样本内梅毒螺旋体进行定量,且检测时间更短。多重PCR可以同时检测多种病原体而不会相互干扰,因此经常应用于疑似合并其他病原体感染的患者 16-18 。根据需求不同,也可以将两种技术进行组合,来达到更高的诊断效率。Chen等 19 最近有研究将预扩增的tpp47基因与CRISPR-Lw-Cas13a进行配对,开发了一种将PCR和CRISPR-Cas13a结合的梅毒螺旋体的检测方法,在对一组216个生物样本进行检测,敏感性达9 3.3%
11、,特异性达10 0%。与实时PCR相比,灵敏度显著提高,此外,该方法还可以用于梅毒螺旋体的谱系鉴定和耐药基因分型鉴定2梅毒螺旋体核酸扩增试验对不同样本的检测能力评估诊断方法最重要的指标就是敏感性和特异性。总体来看,核酸扩增技术检测梅毒有极高的特异性,达9 8%10 0%,而敏感性在很大程度上取决于所测试的样本来源,不同来源的样本有着不同的敏感性,另外还取决于疾病所处阶段,对大部分标本而言,早期梅毒的敏感性较高,晚期梅毒的敏感性较低。2.1皮肤黏膜溃疡渗出液该标本中含较多的梅毒螺旋体,是较为理想的标本,用于诊断一期梅毒敏感性高达7 2%9 5%,用于诊断二期梅毒敏感性在各研究中不尽相同,为20%
12、88%6,11,14,20-28。皮肤黏膜溃疡多出现在一期梅毒,而血清抗体最早在溃疡发生5 15d后(大约感染3 6 周后),才能被检测到 2 9 ,故在此窗口期对患者皮肤黏膜溃疡分泌物进行PCR检测对早期确诊有着重要意义 4.6.30 ,同时也是血清抗体的http:/.266.皮肤科学通报2 0 2 3年4月第40 卷第2 期持续阳性的患者再感染的重要诊断依据,此外还是非梅毒螺旋体抗体检测与梅毒特异性抗体检测结果不一致时进一步确诊的依据 2 8 。由于其在梅毒的早期诊断方面有着显著优势,在许多高收人的国家,PCR已经成为一期梅毒的首选诊断方法。但是,由于抗生素滥用,出现典型皮肤黏膜溃疡的患者
13、越来越少,此类标本也越来越难以获取,表1梅毒螺旋体核酸扩增试验对不同样本的检测能力Sensitivity(%)Specificity(%)Specimen typeSyphilis stageReferencesTpp47PolATpp47PoLASwabPrimary759572-8798-100986,11,14,20-28Secondary20-86448899Ulcer biopsySecondary26-756710031-33Cerebrospinal fluidNeurosyphilis50-7640-9166-10061 9222,27,35-40Blood/Plasma/Se
14、rumPrimary12-5538-57100100Secondary15-63448710010014,15,22,24-27,33,35,4345Latent0-440-72100SalivaPrimary2821Secondary858844Latent1824Urine sedimentPrimary4147Secondary434648Latent542.2病理活检组织皮肤溃疡活检组织PCR检测也有报道 3133,但福尔马林固定可能会导致DNA降解,故敏感性较低 34,加上取材程序相对复杂且有创,较少用于临床。2.3脑脊液在所有相关研究中,PCR诊断神经梅毒的敏感性为40%9 1%,
15、特异性为 6 1%10 0%2 2,2 7,3540 与脑脊液VDRL、FT A-A BS 等相比,脑脊液PCR检测的敏感性较低 41,因此临床上仍不将其作为神经梅毒的常规检测手段,可作为一种可能的补充诊断手段 42 。但由于神经梅毒的诊断缺乏金标准,因此对各诊断方法的评价存在困难,敏感性与特异性指标参考价值有限2.4血液标本包括全血、血浆、血清的PCR检测,血液标本PCR检测表现欠佳,无论疾病阶段如何,敏感性均不高,故不能用于排除感染,诊断价值有限1.1.2.4-7.3.3.45。但值得一提的是,,耳垂血标本检测有着较高的敏感性,有报道称对隐性梅毒及神经梅毒患者耳垂采血行PCR检测,阳性率最
16、高可达9 2%2 7 ,这可能跟梅毒螺旋杆菌在潜伏感染期间存在于毛细血管床有关,但由于样本量太小,未将其列人下表中,但其在将来的研究中很可能会得到重视。2.5睡液Wang等 44 近期研究表明,对二期梅毒及潜伏梅毒患者的唾液进行PCR检测,敏感性较血浆而言有较大优势,在二期梅毒患者中,对唾液进行PCR检测敏感性高达8 5%8 8%,远高于血浆的50%61%,在潜伏梅毒患者中这一敏感性达18%24%,也显著高于血浆的4%7%。这种新的、无创、且便于取材的标本类型用于梅毒诊断具有较大潜力。2.6尿液尿液作为另一非侵人的标本类型,收集较为方便,此前研究对梅毒或疑似梅毒患者的尿液进行PCR检测,但检出
17、率偏低 2.46.47 ,故一直以来较少用于临床。Wang等 48 对梅毒患者尿液上清和沉淀分别进行PCR检测,发现尿液沉淀的检出率显著高于上清,一期梅毒及二期梅毒患者尿液沉淀物敏感性均超过40%,此外,通过定量PCR发现尿液沉积物中的梅毒螺旋杆菌DNA含量明显高于血浆中的含量,可能是大量获取梅毒螺旋体的理想来源http:/267.皮肤科学通报2 0 2 3年4月第40 卷第2 期3总结与展望在感染性疾病的诊断方面,在患者组织样本中检测病原体核酸的方法越来越受到关注 49-50 ,梅毒患者各类标本中均有可能发现其核酸物质 51。尽管血清学检测是目前梅毒诊断的主流方法,但此方法有着诸多的局限性,
18、核酸扩增技术很好地弥补了血清学检测的局限,并在感染初期的诊断有着其独特的优势,随着技术的进步,相信今后会有更多的应用场景,更高的诊断效率。一些易于获取的标本例如血液、尿液、粪便、唾液等,有望成为今后梅毒检测的潜在理想标本,其他标本如精液、宫颈脱落细胞、羊水、胃液、房水、毛囊也能成为一种可能除了寻找新的标本类型外,从标本提取更多的DNA、寻找更高敏感性和特异性的靶基因检测位点或许是今后研究的另一方向 52 。此外,对同一临床分期的同一类型标本在不同的研究中所得的结论差别较大,因此,今后需要标准化的采样、储存、运输、检测方法来指导研究者或者临床医生,以尽量减少人为造成的误差。参考文献1 Rowle
19、y J,Vander Hoorn S,Korenromp E,et al.Chlamydia,gonorrhoea,trichomoniasis and syphilis:global prevalence andincidence estimates,2016J.Bull World Health Organ,2019,97(8):548-562.2 Chen XS.Syphilis trends in China:biased by screening and re-porting?J.Lancet Infect Dis,2017,17(8):804.3 Stamm LV.Syphilis
20、:Re-emergence of an old foeJ.Microb Cell,2016,3(9):363-370.4 Junejo MH,Collery M,Whitlock G,et al.Treponema pallidumPCR testing for diagnosis of mucocutaneous ulcers suspicious forsyphilisJ.Sex Transm Infect,2022,98(5):380-382.5 Queiroz J,Correa ME,Ferreira TDS,et al.Detection of Trepone-ma pallidum
21、 in whole blood samples of patients with syphilis bythe polymerase chain reaction J.Rev Inst Med Trop Sao Paulo,2022,64:75.6 Vrbova E,Mikalova L,Grllova L,et al.A retrospective study onnested PCR detection of syphilis treponemes in clinical samples:PCR detection contributes to the diagnosis of syphi
22、lis in patientswith seronegative and serodiscrepant results J.PLos One,2020,15(8);e0237949.7 Ortiz DA,Shukla MR,Loeffelholz MJ.The traditional or reverse al-gorithm for diagnosis of syphilis:pros and consJ.Clin InfectDis,2020,71(Suppl 1):S43-S51.8 Hook EW.The need for new tools for syphilis diagnosi
23、s and man-agementJ.Clin Infect Dis,2021,73(9):e3259-e3260.9 Workowski KA,Bolan GA.Sexually transmitted diseases treat-ment guidelines,2015J.MMWR Recomm Rep,2015,64(RR-03):1 137.10 Kersh EN,Workowski KA.Evidence review for centers for dis-ease control and prevention guidance development on labora-tor
24、y testing to detect treponema pallidum infection(syphilis)J.Clin Infect Dis,2020,71(Suppl 1):S1-S3.11 Theel ES,Katz SS,and Pillay A.Molecular and direct detectiontests for treponema pallidum subspecies pallidum:a review ofthe literature,1964-2017J.Clin Infect Dis,2020,71(Suppl1):S4=S12.12 Salle R,Ma
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