过硫酸氢钾复合物对三种常见猪病毒病原消毒效果的实验室评价.pdf
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1、过硫酸氢钾复合物对三种常见猪病毒病原消毒效果的实验室评价赵凤利(辽宁省台安县农业发展服务中心(动物疫病预防控制中心),辽宁 台安 )摘要:为分析过硫酸氢钾复合物对种常见的猪重要病毒病病原体的消毒效果,试验采用定量灭活试验分别检测过硫酸氢钾复合物作为消毒剂对猪呼吸与繁殖综合征病毒、猪瘟病毒和猪圆环病毒型的杀灭效果.结果显示,在室温条件下,过硫酸氢钾复合物消毒剂浓度大于和等于 g/L(稀释)时,分别与猪呼吸与繁殖综合征病毒、猪瘟病毒和猪圆环病毒型作用 m i n对这些病毒的杀灭率均大于 .试验的结果表明,过硫酸氢钾复合物对于种猪病毒病病原体具有很好的杀灭效果,可作为生猪养殖场防控猪病毒病的有效消毒
2、剂.关键词:过硫酸氢钾复合物;猪呼吸与繁殖综合征病毒;猪瘟病毒;猪圆环病毒型;消毒效果引言近年来,我国生猪养殖业的发展正经历由传统农户散养向集约化、规模化饲养的转变,在人类对生猪需求量不断增加的背景下,我国生猪养殖事业也迎来了全新的发展机会.但疫病感染仍是威胁生猪行业发展最重要的因素,临床中多种重要的猪病毒病病原体具有高度的传染性,感染后疫病的暴发频次较高,这些疫病的病原体常发生变异并出现混合或继发感染,给养殖业造成重大损失,所以必须严格做好防范.猪繁殖与呼吸系统综合征是由猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(p o r c i n er e p r o d u c t i v ea n dr e s
3、p i r a t o r ys y n d r o m ev i r u s,P R R S V)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸系统疾病为主要临床症状的疾病.猪瘟是由猪瘟病毒(c l a s s i c a l s w i n e f e v e rv i r u s,C S F V)引起的一种高度传染性、致死性疾病.猪圆环病毒病是由猪圆环病毒(p o r c i n e c i r c o v i r u s,P C V)引起的多种病症的总称,其中猪圆环病毒型(P C V)流行最广泛.上述种猪病遍及全世界,给各个国家的养猪业造成极大的经济损失,也是当前严重危害养殖业的最主要的猪病毒病.
4、过硫酸氢钾复合物是一种平衡稳定的表面活性剂、有机酸、过氧化物及无机缓冲系统组成的混合物,其主要成分是过硫酸氢钾三盐复合物.具有低毒、高效和广谱的特点,常被用作机场出入境的消毒剂来预防外来病原的入侵,是美国环保局批准注册的第一个也是唯一一个用于预防口蹄疫的兽用消毒剂.该试验在实验室水平评价了过硫酸氢钾复合物对猪呼吸与繁殖综合征病毒、猪瘟病毒和猪圆环病毒型这种常见的猪病毒病病原体的杀灭效果,以期为各种猪传染病的防控提供依据.材料与方法 试验材料过硫酸氢钾复合物消毒剂为市售商品,其母液按照 的比例(g/L)配制.猪呼吸与繁殖综合征病毒、猪瘟病毒和猪圆环病毒型,M a r c 细胞和P K 细胞均由本
5、实验室保存,M a r c 细胞用于猪呼吸与繁殖综合征病毒的增殖,P K 细胞用于猪瘟病毒和猪圆环病毒型的增殖.本试验用含硫代硫酸钠(按照 即 g/L配制成母液)和胎牛血清的DMEM溶液为中和剂.主要试剂基础培养基DMEM和胎牛血清均为G i b c o公司产品、胰酶和F I T C荧光标记山羊抗猪I g G抗体购自S i g m a A l d r i c h公司,P B S缓冲液和 孔细胞培养板均购自北京鼎国昌盛生物技术有限公司.病毒滴度的测定采用细胞培养半数感染量法(T C I D)测定种病毒的滴度.分别将生长成单层的M a r c 细胞和P K 细胞传代于 孔细胞培养板上,培养 h,待
6、其融合度达 左右时弃掉培养液,以无菌的P B S洗次,除去细胞孔中的血清后用于病毒增殖实验.将待测样品分别用无血清的培养基进行 倍系列稀释,将各稀释度的病毒稀释液接种到 孔板中,每孔接种 L,每一个稀释度重复孔细胞,置于、C O培养箱中培养.参照文献的方法,利用间接免疫荧光试验检测细胞培养物内的病毒含量,用R e e d M u e n c h收稿日期:现代化农业 年第期(总第 期)法计算各样本病毒的细胞半数感染量(T C I D).消毒剂、中和剂、反应产物对细胞的影响将过硫酸氢钾复合物消毒剂母液用培养液稀释成 、和 ,各取 L分别加入在 孔板内生长成单层的M a r c 细胞和P K 细胞,
7、每一浓度加孔;用培养液将硫代硫酸钠母液稀释成 、和 ,加入胎牛血清至终浓度为作为中和剂,各取 L分别加入在 孔板内生长成单层的M a r c 细胞和P K 细胞,每一浓度加孔.作用 h后用P B S洗涤细胞次,加入含胎牛血清的培养液,观察细胞生长状态.过硫酸氢钾复合物消毒剂对种病毒的杀灭作用在只离心管中各加入 L病毒液,各加入过硫酸氢钾复合物消毒剂母液 、L,各管补加培养液至 m L,各管过硫酸氢钾复合物消毒剂浓度分别为 、g/L,每一梯度加只试管,过硫酸氢钾复合物消毒剂每一浓度梯度分别作用 m i n和 m i n后加入 L中和液,振摇混匀,作用 m i n,然后接种细胞测定病毒滴度,同时设
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