动物组织中吩噻嗪类药物残留检测研究进展.pdf
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1、86养殖与饲料2 0 2 3 年第9 期动物组织中吩噻嗪类药物残留检测研究进展侯蔷,李明阳,崔亚楠,雷舒涵,刘宇奇,宋旺,潘艳慧,康俊杰*河北省唐山市食品药品综合检验检测中心农业农村部农产品品质评价与营养健康重点实验室,河北唐山 0 6 3 0 0 0摘要盼噻嗪类药物有促进畜禽生长和增重催肥的作用,但是在体内代谢缓慢,易产生药物残留,有副作用,多国规定畜禽产品在人市场前不得检出吩噻嗪类药物。笔者通过查阅文献资料,梳理吩噻嗪药物残留测定方法发现:液相色谱一串联质谱法、高效液相色谱法、气相及联用技术和酶联免疫法是目前在噻嗪类药物残留测定的主流研究方法,但是仍存在灵敏度低、过程复杂、耗时长等缺点。在
2、今后的研究中,应开发绿色环保的前处理技术和高通量的快速筛查方法。关键词吩噻嗪;药物残留;检测技术吩噻嗪类药物(phenothiazines)是一类以硫氮硫杂葱的三环状结构的镇静安定类药物,按侧链结构的不同分为脂肪族类、哌啶类和哌嗪类。临床上常用氯丙嗪(Chlorpromazine,CPZ)异丙嗪(Prome-thazine,PTZ)、乙酰丙嗪(Acepromazine,APZ)、氟奋乃静(Fluphenazine,FPZ)奋乃静(Perphenazine,PPZ)、甲硫哒嗪(Trifluonerazine,TDZ)等十几种药物,结构式见图1。该类药物通过抑制中枢神经系统的多巴胺受体和D2受体发
3、挥催眠镇静作用,同时它也会造成过敏性毒性,引起口干、便秘、体位性低血压等副作用!。在畜禽、渔业饲养过程中添加盼噻嗪类药物可起到限制动物运动、减少营养素消耗,以达到促进生长和增重催肥的作用。同时,它还可作为抗应激药物应用于食品动物的运输,减少途中失重、死亡率 2-3 。吩噻嗪类药物在体内代谢缓慢,易蓄积于脂肪,在动物体内产生药物残留,并且经食物链进入人体后,能造成白细胞减少、粒细胞缺乏症、肝功能障碍和皮疹等副作用 46。因此,日本、美国和欧盟等多个国家规定噻盼嗪类镇静剂及其代谢物不得在动物源食品中检出。GB31650一20197规定,氯丙嗪仅允许治疗使用,但进人市场前不得检出。国内外对吩噻嗪类药
4、物残留检测方法的研究较少,主要检测方法有酶联免疫(ELISA)法、高效液相色谱(HPLC)法、气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)法和液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法等。ELISA操作简单,但方法的重现性和定量稳定性差,易出现假阳性;HPLC法易受基质干扰,灵敏度低;GC-MS 法前处理过程复杂、需要除水,耗时长;LC-MS/MS法灵敏度高、特异性强,已成为目前收稿日期:2 0 2 2-1 0-0 8项目资助:河北省重点研发计划项目(2 0 3 2 7 5 0 5 D);唐山市人才资助项目(A202110025)作者简介:侯蔷,女,1 9 8 7 年生,博士,高级畜牧师。*通信作者:
5、康俊杰,女,1 9 8 5 年生,硕士,高级兽医师。养殖与饲料2 0 2 3 年第9 期87:氯丙嗪(Chlorpromazine)OH异丙嗪(Fromethazine)乙酰丙嗪(Acepromazine))丙酰丙嗪(Fropionylpromazine)奋乃静(Perphenazine)三氟拉嗪(Trifluoperazine)甲硫哒嗪(Thioridazine)癸氟奋乃静(Fluphenazinedepot)图1 常见盼噻嗪类药物化学结构测定盼噻嗪类药物残留测定的首选方法。1液相色谱一串联质谱法动物组织中吩噻嗪类药物残留的检测以研究氯丙嗪较多,异丙嗪次之。采用液相色谱质谱法进行检测,样品多
6、采用乙腈或乙酸乙酯作为提取液,经固相萃取柱或分散固相萃取柱进行进化,三重四极杆、飞行时间和静电场轨道阱高分辨质谱等不同质谱检测器检测,均获得了较好的试验结果。齐士林等8 以猪肉、鱼肉、牛蛙和牛奶为研究对象,经弱碱性乙酸乙酯为提取液,OasisHLB柱富集净化,建立了氯丙嗪、异丙嗪及其代谢物氯丙嗪亚和异丙嗪亚矾同时测定的超高效液相色谱电喷雾电离串联四极杆质谱(UPLC-ESI-MS/MS)方法。氯丙嗪、氯丙嗪亚、异丙嗪和异丙嗪亚矾的检出限分别为1、1、5、1 g/kg;定量限分别为0.3、0.3、1.5、0.3 g/kg;回收率为7 6%9 6%。于慧娟等 9 利用HPLC-MS/MS分析了鳗、
7、和大口黑鲈中氯丙嗪残留量。样品用乙腈提取,MCX固相萃取柱净化,5%氨化甲醇洗脱,在正离子模式下以电喷雾串联质谱仪进行测定,内标法定量。方法平均回收率为9 0.1%9 5.1%,相对标准偏差为2.5%5.7%,检出限和定量限分别为0.5、1.0 g/kg。王京等1 0 利用超高效液相色谱四级杆飞行时间质谱(Q-TOF/MS)快速测定了畜禽产品中氯丙嗪、异丙嗪和奋乃静3 种吩噻嗪类药物及其代谢物残留量。该方法采用了增强型脂质去除剂(EMR)结合氧化修饰的多壁碳纳米管(MWC-NTs)进行净化,此方法节省了固相萃取活化、平衡和洗脱时间,将纳米管直接放入提取液中振摇即可,不足在于多壁碳纳米管需要自行
8、进行修饰,并无商品化产品,方法的检出限和定量限范围分别为0.52.0、1.5 6.0 g/kg,灵敏度与其他进化方式比较,并没有明显的提高。李春凤等 1 建立了水产品中氯丙嗪、乙酰丙嗪、丙酰丙嗪、异丙嗪、甲苯噻嗪5种盼噻嗪类药物多残留的液质联用确证方法。用碱性乙腈萃取样品中的5 种盼噻嗪类药物,用HLB固相萃取柱净化,以YMC-PackProC18色谱柱分离,在正离子模式下以电喷雾电离串联质谱仪进行测定。方法的线性范围为0.5 5.0 ng/g,总体平均回收率为7 5.7%8 7.7%,相对标准偏差为9.0%1 5.2%。程建桥等 1 2 使用添加1%乙酸的乙提取和去除蛋白质等杂质,经低温高速
9、离心后达到净化样品的目的。选用Thermo accucore RP-MS色谱柱对待测物进行分离,在QExactive高分辨质谱FullMS/dd-MS2扫描模式下采集数据进行定性定量分析,建立适用于猪肉中氯丙嗪及代谢物7-羟基氯丙88嗪残留的超高效液相色谱四极杆静电场轨道阱高分辨质谱法。2 种目标物在1 2 0 0 g/L浓度范围内线性良好,平均回收率8 0.2%9 4.2%,精密度均小于2%。QuEChERS方法是近年来发展起来的具有快速、简单、高效、环保等优点的前处理技术。邹游等 3建立了QuEChERS-高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)同时测定猪肉、鱼肉、肝脏和肾脏中氯丙嗪、
10、地西泮和安眠酮残留量的分析方法。样品用无水NaSO4脱水、乙酸乙酯提取和C18、N-丙基乙二胺(PSA)和氨基填料(NH,填料)净化,使用Atlantis T3 C18 色谱柱分离,以5 mmol/L甲酸溶液和乙溶液为流动相进行梯度洗脱。在正离子电离多反应监测(MRM)模式下,采用同位素内标法进行定量分析。3种镇静剂在0.2 5.0 g/L范围内线性关系良好,在4类基质的加标回收率为9 2.5%117.8%,相对标准偏差(RSD)为0.7%11.6%(n=6)。该法高效快捷,灵敏度高,基质适应范围广,适用于大批量样品的快速分析。张文等 13 比较QuECHERS法、MCX固相萃取法和叔丁基甲醚
11、直接提取法对猪肉、猪肝、鸡肉、鱼肉中CPZ残留检测效果的影响,研究结果表明,3种进化方式的回收率和相对偏差均满足检测方法学要求。但MCX固相萃取法净化效果和回收率优于QuECHERS法和叔丁基甲醚直接提取法,利用QuECHERS法分析动物组织中的吩噻嗪类药物残留还有进一步优化的空间。吩噻嗪类药物在禽蛋中残留量的研究相对较少。高倩 14 建立了禽蛋中氯丙嗪和异丙嗪的检测方法,样品以乙睛作为提取溶剂,超声提取15min,选择PSA+无水硫酸镁的分散固相萃取进行净化。异丙嗪和氯丙嗪的检出限分别为0.0 5、0.10 g/kg,定量限分别为0.17、0.2 3g/kg,平均回收率为80.23%102.
12、02%,相对标准偏差为1.9 2%8.0 7%,满足检测需求。液相色谱串联质谱法分析吩噻嗪类在动物组织中的药物残留在灵敏度、回收率和精密度上均满足要求,但仪器价格昂贵、使用和维护成本高、体积大,对检测人员的检测技能要求高,如飞行时间和静电场轨道阱这些高分辨质谱,在基层的推广存在一定的困难。已报道的可同时测定的吩噻嗪类最多为5种,可在增加同时测定吩噻嗪类药物的种类上做进一步研究。养殖与饲料2 0 2 3年第9 期2液相色谱法液相色谱法是目前食品安全检测领域中主要的分析技术手段,仪器操作相对简便,具有灵敏度和精密度高等特点,在基层食品检验机构中得到广泛应用,但其定性能力不如质谱法。液相色谱法在吩噻
13、嗪类检测上的研究多集中于组成成分简单的血浆、尿液和饲料,动物组织中残留量分析相对较少,所使用的检测器为紫外检测器。洪月玲等 15 以猪肉、鸡肉和虾肉为研究对象,试样用乙腈提取2 次,提取液经旋转蒸发蒸干后,加甲醇复溶,碱性氧化铝柱纯化,采用 Shim-pack III O D S 色谱柱分离,以乙腈-0.1%磷酸溶液(7:3)为流动相,检测波长为254nm,外标法定量。方法检出限为4g/kg,回收率8 0%10 1%。范盛先等 16 用乙腈提取,再依次用酸化乙腈和正已烷净化,氮气吹干,外标定量。氯丙嗪和异丙嗪在猪肾脏中的最低检测限均为10 g/kg,,回收率分别为8 3%和8 4%,批间变异系
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