![点击分享此内容可以赚币 分享](/master/images/share_but.png)
玉米肽_胶原蛋白肽解酒作用的研究.pdf
《玉米肽_胶原蛋白肽解酒作用的研究.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《玉米肽_胶原蛋白肽解酒作用的研究.pdf(13页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、酒精的大量摄人会引起酒精性肝炎、肝硬化等疾病的发生,并且在酒精代谢过程中产生的过量自由基会进一步造成酒精性疾病的加剧。玉米肽具有解酒保肝功能,能够有效解决饮酒对人体造成的不良影响。本文通过将玉米肽和牛骨胶原蛋白肽进行复合,进一步探究了复合肽对乙醇脱氢酶活性和模拟胃中乙醇渗透吸收的影响,并对复合肽的羟自由基清除能力和模拟消化稳定性进行了研究。结果表明,复合肽表现出较两种肽更好的乙醇脱氢酶活性促进作用,有效降低了模拟胃液中乙醇的吸收速率,并对羟自由基具有明显的清除能力。同时,复合肽能够在模拟消化过程中保持良好的乙醇脱氢酶活性和羟自由基清除能力,表明所制备的复合肽能够应用在解酒功能食品中,发挥其解酒
2、潜力。关键词:玉米肽;牛骨胶原蛋白肽;复合肽;解酒1引言据统计,饮酒是导致6 0 多类疾病的主要因素,在全球的各类疾病风险因素中排名第三 1长期酗酒会对人体肝脏以及胃等器官造成难以逆转的损伤,全球5.1%的疾病归因于饮酒。酒精性肝病(ALD),包括良性脂肪变性、肝炎、肝硬化和肝细胞癌,已经成为困扰全世界的难题 2 。脂质合成过多、炎症、氧化应激的发生,并且它们之间复杂的相互作用也会*E-mail:导致ALD风险增加 3。同时,一次性摄较多的酒精会对人体的肝脏功能造成极大的影响。摄入人体中的酒精有超过9 0%在肝脏中代谢,长期饮酒过度会导致肝功能的损伤。肝脏中有三个系统参与乙醇的代谢,分别是乙醇
3、脱氢酶(ADH)系统、过氧化氢酶系统和微粒体乙醇氧化系统,而其中最为主要的是乙醇脱氢酶系统 4.5。在这一系统中,乙醇首先在ADH的作用下代谢为乙醛,然后在乙醛脱氢酶(ALDH)的作用下代谢生成无毒的乙酸,最后乙酸进人三羧酸循环最终分解为水和二氧化碳排出体外 6 。在这一代谢途径中,ADH的活性水平是人体内乙醇代谢快慢的关键因素。因此,可通过提高ADH活性达到解酒的目的。玉米肽是从玉米蛋白中提取得到的小分子多肽,相较于玉米蛋白,其赖氨酸、色氨酸等人体必须氨基酸含量更高,营养价值更高 7 而且玉米肽分子量较小,具有良好的水溶性、乳化性和发泡性,还具有诸多的生物活性功能,其生理活性功能丰富体现在降
4、低血压 8 养肝护胃 9-1、抑制血管紧张素1转换酶 12-14、抗炎和抗氧化作用 15.16 以及促进人体酒精代谢 9 等功能。其中,促进人体酒精代谢功能最早是由YamaguchiM9等人于19 9 7年发现,他们发现玉米肽的摄人能显著提高血浆中丙氨酸和亮氨酸,尤其是亮氨酸的含量,从而降低饮酒后人体血液中乙醇水平以达到解酒的功能。更有研究发现,玉米肽能够通过187江贤超等:玉米肽/胶原蛋白肽解酒作用的研究第42 卷第4期提高肝脏中ADH的活性来促进酒精代谢,同样起到了降低血液中乙醇浓度的作用 17 乙醇在人体组织代谢过程中会产生活性氧自由基,会导致酒精性疾病的进一步发展与恶化 18 。因此,
5、可通过对活性自由基的清除缓解酒精在人体中所造成的伤害。胶原蛋白肽是由胶原水解制备得到的一种具有诸多的生理活性的功能性物质,已证明部分胶原蛋白肽能够抑制血管紧张素转换酶的活性 19 ,从而起到降低血压的功能;胶原蛋白肽还具有抗菌的功能,能对金黄色葡萄球菌 2 0 和大肠杆菌 2 1 起到良好的抑制效果。此外,研究学者已经从多种动物组织中提取得到胶原蛋白肽并发现具有优良的抗氧化活性。Sherff等 2 2 通过木瓜蛋白酶和胃蛋白酶酶解得到的鱼骨胶原蛋白肽对DPPH自由基和超氧自由基具有良好的清除效果。谭洪亮等 2 3 对金枪鱼骨进行酶解,并利用超滤和凝胶色谱等技术对水解物进一步提纯,发现所制备的金
6、枪鱼骨胶原蛋白肽能够对羟自由基、DPPH自由基、超氧自由基和ABTS自由基均起到优异的清除效果。目前,市场上已经有许多玉米肽解酒产品,并且玉米肽解酒已成为了目前解酒领域的研究热点。而有关胶原蛋白肽养肝、护胃、抗菌、降血压等生理功能的研究不在少数,其在解酒领域也具有一定的应用潜力,由于胶原蛋白肽具有丰富的生理功能,其在解酒领域也有着优良的应用前景。因此,本研究基于玉米肽所具有的促进酒精代谢功能,对玉米肽的乙醇脱氢酶活性激活率进行了测定,并试验了牛骨胶原蛋白肽的乙醇脱氢酶活性激活效果,并对两者进行复合,以寻求一个解酒效果更好的复合方案,为解酒提供可行方案2材料与方法2.1主要试剂玉米低聚肽、牛骨胶
7、原蛋白肽(吉林添正医药有限公司);氧化型辅酶I、乙醇脱氢酶(上海源叶生物科技有限公司);氢氧化钠、无水乙醇、浓盐酸、过氧化氢(北京化工厂);磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、焦磷酸钠十水合物、重铬酸钾、硫酸亚铁、邻二氮菲(上海麦克林生化科技有限公司)。所有试剂均为分析纯。2.2实验仪器分析天平(MS104S);移液枪(大龙医疗设备(上海)有限公司);全波长酶标仪(Spectra-MaxM2,美国MOLECULARDEVICES);氨基酸自动分析仪(L8900,日立)2.3实验方法2.3.1氨基酸组成分析将一定量的玉米肽和牛骨胶原蛋白肽分别放人含有6 mM的盐酸的水解管当中,对其充气并封管水解,并用日立L
8、-8900型高速氨基酸分析仪对两种多肽进行氨基酸组成分析。2.3.2复合肽的制备将玉米肽与牛骨胶原蛋白肽用去离子水分别配制成所需浓度梯度溶液,按玉米肽与牛骨胶原蛋白肽质量比即两种肽溶液的体积比为1:3、1:6、1:9、3:1、6:1和9:1进行复合,再转人恒温水浴反应器中,于2 5下恒温并搅拌反应10 min,得到6 种不同的复合肽溶液2.3.3乙醇脱氢酶活性测定酒精在肝脏中在乙醇脱氢酶的作用下进行分解代谢是酒精在人体中代谢的最主要途径。为探究玉米肽、牛骨胶原蛋白肽及其复合肽对肝脏的保护作用,进行了乙醇脱氢酶的体外活性测定。实验参考李萌 2 4 等的方法进行测定,探究了玉米肽:牛骨胶原蛋白肽复
9、合比例为1:3、1:6、1:9、3:1、6:1和9:1时对乙醇脱氢酶活性的影响。在10 mL离心管中加人1.5mLpH为8.8 的焦磷酸钠缓冲液,1.0 mL的NAD*,0.5mL11.52%的乙醇溶液及0.1mL的样品溶液,对照组则用水代替样品。将10mL离心管于2 5恒温保温5min后加人0.1mL的ADH溶液(0.2 5U/mL),混合均匀后立即转入9 6 孔板中于340 nm波长处每隔30s读数一次,连续测定5min。乙醇脱氢酶活性的计算公式如下:胶2022年12 月术学明188科技E 3403.2ADH 的活性E(U/mL)E.6.22其中,E34o为340 nm处吸光度值的变化量;
10、3.2 为反应总体积(mL);E,为每毫升酶液中含酶量(mg/mL);6.22为NADH在340 nm处的摩尔消光系数。乙醇脱氢酶活性激活率的计算公式如下:E样品-E对照激活率H(%)=100%E对照其中,H为ADH酶活性激活率(%);E样品为样品反应液的酶活(U/mL);E对照为对照反应液的酶活(U/mL)2.3.4体外模拟胃部乙醇渗透吸收玉米肽与牛骨胶原蛋白肽除了具有养肝的功能外,还具有护胃的效果。为探究玉米肽、牛骨胶原蛋白肽及其复合肽对乙醇在胃中吸收速率的影响,进行体外模拟胃中乙醇渗透吸收实验。分别对玉米肽、牛骨胶原蛋白肽以及两者比例为6:1和9:1复合比例的复合肽(复合肽-6 和复合肽
11、-9)进行乙醇渗透实验,实验参考左婧驰 2 5 等的方法进行测定。在透析袋中加人10 mL人工胃液及5mL测试样品(5mg/mL),置于2 50 mL的生理盐水中37 恒温30 min,然后在透析袋中继续加入5mL的10%乙醇,以此时为0 时刻开始记录,分别取0、5、10、15、2 0、2 5、30、35、40、45、50、6 0 mi n 时刻透析袋外溶液各1mL,通过重铬酸钾酸性还原法 2 6 测定溶液中的乙醇含量。2.3.5羟自由基清除能力测定研究表明 2 7 ,乙醇会通过不同途径诱导产生自由基。乙醇会首先转化为自由基代谢物1-羟乙基自由基(CH,HCOH),然后进一步代谢为有害的羟基自
12、由基(OH)。为探究复合后得到的复合肽能够清除乙醇代谢过程中产生的过剩羟自由基,从而有效降低饮酒对肝脏等器官造成的损伤,故进行体外羟自由基清除实验。分别配制1.8 6 5mmol/L邻二氮菲溶液、1.865mmol/L的FeS047H,0溶液及0.0 3%(v/v)的H,0,溶液。在9 6 孔板中分别加入加人40 L邻二氮菲溶液、40 LFeSO47H,O、80L样品溶液和40 LH,0,溶液,于37 恒温反应6 0 min后,用全波长酶标仪于536nm处测定吸光度。对照组中以去离子水代替测试样品溶液;空白组中以去离子水代替测试样品溶液和H,O,溶液;样品空白组中以去离子水代替H,O,溶液,计
13、算羟自由基清除率,计算公式如下:羟自由基清除率(%):(对照组-空白组)-(样品组-样品空白组)X100%对照组-空白组2.3.6复合肽稳定性及安全性分析为探究复合肽进人人体后能否稳定并安全地发挥其对乙醇脱氢酶活性优良的促进效果和自由基清除能力,采用体外模拟人工胃肠消化的方法对复合肽进行处理,并测定了消化后产物的活性,以分析复合肽的稳定性;采用HepG2细胞作为实验细胞对复合肽进行细胞毒性实验,以分析复合肽的安全性。2.3.6.1体外模拟胃液消化按照国家药典标准,配制好人工胃液,具体配制方法如下:取1.6 mL的浓度为1M的标准稀盐酸溶液于9 0 mL去离子水中,再加人1g胃蛋白酶(2 50
14、U/mg),混匀后用去离子水定容至10 0 mL。将测试样品(5mg/mL)分别溶于配置好的人工胃液当中,然后置于37 恒温摇床中水浴震荡2 h,震荡幅度设置为130 r/min。反应结束后在10 0 水中灭酶处理15min,待样品冷却后以9 0 0 0 r/min的转速离心5min,取上层清液进行活性测定2.3.6.2体外模拟肠液消化按照国家药典标准,配制好人工肠液,具体配制方法如下:取0.6 8 g的KH,PO4,并加人40 mL去离子水溶解,之后用0.1M的NaOH溶液调pH至6.8,再加入1g胰蛋白酶(2 50U/mg),混匀后用去离子水定容至10 0 mL。将测试样品(5mg/mL)
15、分别溶于配置好江贤超等:玉米肽/胶原蛋白肽解酒作用的研究189第42 卷第4期的人工肠液中,然后置于37 恒温摇床中水浴震荡2 h,震荡幅度设置为130 r/min。反应结束后在10 0 水中灭酶处理15min,待样品冷却后以9 0 0 0 r/min的转速离心5min,取上层清液进行活性测定。2.3.6.3体外模拟胃肠消化将测试样品(5mg/mL)分别溶于配置好的人工肠液中,然后置于37 恒温摇床中水浴震荡2 h,震荡幅度设置为130 r/min。反应结束后调节pH至6.8,再添加同体积的人工肠液,放置于37 恒温摇床中水浴震荡2 h,震荡幅度设置为45r/min。反应结束后在10 0 水中
16、灭酶处理15min,待样品冷却后以9 0 0 0 r/min的转速离心5min,取上层清液进行活性测定。2.3.6.4复合肽的细胞毒性测试为了探究两种复合肽的生物安全性,对制备得到的两种复合肽进行了细胞毒性实验测试。将一定量DMEM培养基、胎牛血清以及双抗溶液(青霉素一链霉素)混合,配制成含有5%胎牛血清以及0.5%双抗溶液的完全培养基。用该培养基对HepG2细胞进行复苏并培养。当细胞生长至对数生长期,对细胞进行计数,按每孔510 3个细胞数接种至9 6 孔板中,于5%CO2,37恒温培养箱中培养2 4h过夜。将复合肽以完全培养基为溶剂,配置成浓度为 10 0 g/mL、40 0 g/mL、6
17、 0 0 g/mL、800g/mL以及10 0 0 g/mL的溶液,并用滤膜过滤以除去细菌等杂质。用复合肽溶液对培养过夜的细胞进行处理,于5%CO2,37恒温培养箱中培养2 4h过夜。最后采用CCK-8法对细胞存活率进行测试以评价复合肽的细胞毒性大小。每组设置6 个复孔。3结果与讨论3.1牛骨胶原蛋白肽和玉米肽的氨基酸组成分析多肽中活性氨基酸的含量决定其活性的关键性因素。通过对玉米与牛骨胶原蛋白肽中氨基酸组成分析发现,牛骨胶原蛋白肽中含有丰富的甘氨酸、谷氨酸和丙氨酸。其中甘氨酸已被证明能够对肠、胃、肾、肝脏等器官和心血管系统起到保护作用 2 8 。谷氨酸与天冬氨酸能够通过与金属离子形成螯合物,
18、抑制脂质氧化的发生。同时还可以发现,牛骨胶原蛋白肽中还含有较为丰富的疏水性氨基酸,如亮氨酸、异亮氨酸和蛋氨酸等,这类氨基酸能够通过增加水/油相界面肽的存在量,使其更易接触自由基而发挥清除作用 2 9 。此外,胶原蛋白肽中还含有大量的脯氨酸。研究表明,脯氨酸的存在对抗氧化肽的活性具有重要贡献 30 。通过对玉米肽的氨基酸组成分析发现,玉米肽中含有丰富的芳香性氨基酸,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸含量占据氨基酸总的44.55%。表1牛骨胶原蛋白肽和玉米肽主要氨基酸组成分析Tab.1Analysis of main amino acid composition of bovine bone collage
19、n peptide and zein peptide含量(%)含量(%))氨基酸名称氨基酸名称牛骨胶原蛋白肽玉米肽牛骨胶原蛋白肽玉米肽天冬氨酸5.801.21蛋氨酸5.161.58苏氨酸2.190.20异亮氨酸5.8330.95丝氨酸3.130.60亮氨酸5.440.68谷氨酸10.041.60酪氨酸0.327.77甘氨酸13.220.23苯丙氨酸1.9912.56丙氨酸8.242.23组氨酸0.730.60胱氨酸/2.75赖氨酸4.946.45缬氨酸4.093.37精氨酸7.970.35脯氨酸20.102.66色氨酸/24.22190:2022年12 月术胶明技学科(a)(b)160160玉
20、米肽玉米肽牛骨胶原肽牛骨胶原肽复配肽-1/3复配肽-1/61201208080404023452345浓度(mg/mL)浓度(mg/mL)(c)(d)160160玉米肽玉米肽牛骨胶原肽牛骨胶原肽复配肽-1/9复配肽-312012080804040234512345浓度(mg/mL)浓度(mg/mL)(e)(f)160160玉米肽玉米肽牛骨胶原肽牛骨胶原肽%复配肽-6复配肽-9120120808040401234512345浓度(mg/mL)浓度(mg/mL)图1不同比例复合肽对乙醇脱氢酶活性的促进效果玉米肽与牛骨胶原蛋白肽的质量比:(a)1:3;(b)1:6;(c)1:9;(d)3:1;(e)
21、6:1;(f)9:1Fig.1 Promoting effects of different proportions of compound peptideon the activity of alcohol dehydrogenaseMass ratio of zein to bovine bone collagen peptide:(a)1:3;(b)1:6;(c)1:9;(d)3:1;(e)6:1;(f)9:1191江贤超等:玉米肽/胶原蛋白肽解酒作用的研究第42 卷第4期芳香族氨基酸可供氢和电子,减慢或终止自由基链式反应 31。同时,色氨酸还具有缓解头痛,保护肝脏和促进酒精分解的功能,
22、能够有效帮助人体分解酒精,保护肝脏 32 。异亮氨酸在玉米肽中含量为30.9 5%。异亮氨酸作为人体必须氨基酸的一种,具有修复肌肉、控制血糖等功能,有研究表明,高含量的支链氨基酸对酒精的代谢具有积极影响 33。正是由于玉米肽和牛骨胶原蛋白肽中丰富的活性氨基酸,并且呈现出互补性特征,因此,推测上述两种肽的复合肽可能具有更好的解酒和抗氧化活性。3.2复合肽对乙醇脱氢酶活性的影响从图1中可知,玉米肽与牛骨胶原蛋白肽对乙醇脱氢酶活性均有促进效果,并且其促进效果呈现浓度依赖性,玉米肽的促进效果要优于牛骨胶原蛋白肽。通过复合肽对乙醇脱氢酶活性测定结果发现,在不同复合质量比的复合肽中,复合质量比为6:1(复
23、合肽-6)的复合肽表现出了最好的乙醇脱氢酶活性促进效果,该复合比例下的复合肽在浓度为3mg/mL时表现出的对乙醇脱氢酶活性的促进率已高达124.69%,显著高于此浓度下单独玉米肽(7 4.0 7%)和牛骨胶原蛋白肽(59.2 6%)。当复合肽浓度为5mg/mL时,其乙醇脱氢酶活性促进率更是达到了132.10%。同时,可以从图中看出,复合肽的乙醇脱氢酶活性促进率呈现出随玉米肽所占比例的先增加后减小的趋势,在玉米肽:牛骨胶原蛋白肽复合比例为6:1时,其乙醇脱氢酶活性促进率达到最大值。以上实验结果表明,复合肽-6 表现出了极好的乙醇脱氢酶活性促进效果,并且玉米肽与牛骨胶原蛋白肽之间可能存在协同作用,
24、使得两者在此比例下复合表现出比它们单独作用时更好的效果,因而复合肽-6 具有优异的解酒作用。其次,比例为9:1的复合肽(复合肽-9)表现出了仅次于复合肽-6 的乙醇脱氢酶活性促进效果,在其浓度为4mg/mL时,其乙醇脱氢酶活性促进率已达到了114.8 1%,浓度为5mg/mL时更是达到了12 0.9 9%的乙醇脱氢酶活性促进率,同样具有不错的解酒作用,故后续实验重点探究复合肽-6 和复合肽-9 这两种比例下的复合肽。(a)(b)1.60.30一对照组1.4玉米肽0.25牛骨胶原肽1.2复配肽-60.20一复配肽-91.00.80.150.60.100.40.20.050.08.b00.04 0
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 玉米 胶原 蛋白 解酒 作用 研究
![提示](https://www.zixin.com.cn/images/bang_tan.gif)
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。