致犊牛腹泻大肠杆菌的分离培养与药敏试验_思汗.pdf
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1、通信作者,:收稿日期:;修回日期:作者简介:思汗(),男(蒙古族),内蒙古呼伦贝尔市人,硕士,副研究员,研究方向为动物疫病防控,:文章编号:()致犊牛腹泻大肠杆菌的分离培养与药敏试验思汗,哈日巴拉,郝剑峰,(内蒙古呼伦贝尔市动物疫病预防控制中心,内蒙古呼伦贝尔 ;内蒙古自治区动物疫病预防控制中心,内蒙古呼和浩特 )摘要:为进一步探讨防止犊牛顽固性腹泻的防治方案,根据某养殖场的发病案例,采用细菌分离法分离病料中的大肠杆菌,明确大肠杆菌的致病性,并采用纸片扩散法进行了大肠杆菌的药敏试验,筛选敏感药物。结果表明,案例中共分离到 株致病性大肠杆菌;不同的大肠杆菌菌株对药物的敏感性存在一定差异;以上的菌
2、株对头孢噻吩、环丙沙星、恩诺沙星、左氧氟沙星高敏,左右的菌株对氨苄西林、庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素高敏,左右的菌株对复方新诺明和红霉素中敏,的菌株对四环素、链霉素耐药。因此,在控制疫病的过程中,必须对病因进行准确诊断,并进行严格的药敏实验,以确定敏感性的药品,再进行有针对性的治疗。关键词:犊牛;顽固性腹泻;病原鉴定;防治方案中图分类号:;文献标志码:目前,我国奶牛养殖规模持续扩大,促进了很多地区经济的发展,但各种传染病也日趋复杂化。腹泻是牛养殖期间比较常见的传染病,其病因复杂,主要致病性因素包括养殖管理因素、营养因素和传染性因素等。犊牛出生后,胃肠道的消化功能相对较差,自身抵御多种病原的能力
3、不足,如养殖环境差或饲料营养价值较差,不能够及时吃上和吃足初乳,造成牛群的胃肠道消化功能异常,就会给各种病原微生物的入侵提供条件,最终引发严重的腹泻现象。从现阶段犊牛腹泻的发生及流行情况来看,顽固性腹泻的发生流行率逐年升高,犊牛的发病周期延长,药物的治疗效果变差,病情不稳定,治疗周期较长,经济损失巨大,且很难彻底根除病情,经常会周期性的传播流行。要想更好地防治犊牛顽固性腹泻,必须对发病原因进行有效探讨,并加强致病原的分离鉴定,掌握引发顽固性腹泻的原因,从病原鉴定、药敏试验入手,在最短的时间内有效控制病情,可防止出现更大的危害。试验材料与方法发病现状某肉牛养殖场共养殖肉牛 头,年 月下旬开始养殖
4、场的犊牛群体中陆续出现以腹泻症状为主的传染性疾病,不同年龄的犊牛发病严重程度存在一定的差异性,年龄越小的牛群发病症状越严重。发病后,养殖户将患病牛单独隔离,使用青霉素、链霉素等抗生素联合用药,初期有一定效果,但病情不能够彻底根治,一旦停药病情就会加重,犊牛的发病周期较长,普遍在周。兽医进行了病料采集,收集了 只牛只的排泄物,并将其送到实验室进行病原学分析。试验方法大肠杆菌分离鉴定将采集到的患病牛新鲜粪便进行病原鉴定,使用革兰氏染色剂进行涂片染色检查并观察。将收集的粪样分别用常规琼脂平板、麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板进行接种试验,放置在培养箱中 培养 ,观察培养平板细菌的生长情况。将分离到的
5、疑似菌落接种到肉汤当中,持续培养 观察肉汤的变化情况。生化鉴定将分离菌株的纯培养物接种到生化鉴定管中,放置在 恒温箱中持续培养 ,观察各生化管的反应。致病性试验选择只小白鼠,根据随机性的原理,将其分为实验组和对照组。试验组的小白鼠每只腹腔注射分离到的纯 培 养 物 ,对 照组 小 白鼠 腹腔注射 的无菌生理盐水,观察注射后试验组和对照组小白鼠的生存情况,进一步判定分离菌的致病性。药敏试验将有大肠杆菌生长的营养肉汤用灭菌生理盐水 年月第期兽医导刊 稀释,使稀释液的浑浊度在比浊管范围中。将消毒棉棒插进一种经过稀释的常规肉汤中,用棉花棒顺管子的边缘滚动,去掉多余的液体,涂布于烘干好的营养琼脂平板上,
6、接着将其转 ,将整个板涂上一层大肠埃希氏菌,然后用灭菌镊子将含有抗生素片的药敏片放置在平板中轻轻按压,每个平板上贴个纸片,放置在 恒温箱中持续培养 ,观察抑菌圈的直径。本药敏试验的抗生素为氨苄青霉素、氧氟沙星、妥布霉素、头孢噻吩、链霉素、恩诺沙星、先锋必、先锋噻肟、庆大霉素、环丙沙星、先锋、苯唑青霉素、氯霉素、阿米卡星、头孢拉定、复方新诺明、氧哌嗪青霉素、卡纳霉素、万古霉素、四环素、氟哌酸、红霉素。抗原血清鉴定选取纯培养物将其制作成浓稠的菌悬液,放置在 高温环境下高压 破坏抗原。使用接种环蘸取菌悬液和稀释 倍的 型抗原血清,在玻璃板上混合菌液,如果在 内出现了明显的凝集,可以判定为阳性。结果病
7、原分离鉴定结果采集到的粪便可以在一般的营养琼脂板上发育出中等的、大的、圆的、中心凸出的,边缘较为平整,潮湿而平滑,灰色的病原菌,一般为,半透明。病原菌能够在血液琼脂平板上良好生长,菌落大小中等;在麦康凯琼脂平板上会产生中等大小、粉红色的致病菌,菌落边缘整齐,呈现露珠状(图);在伊红美蓝琼脂平板上能够形成黑色带有金属光泽的致病菌菌落。将分离到细菌注入到正常的肉汤培养基中,可以让肉汤变得混沌,并且会有一些细小的白色的沉淀。经染色镜观察可见革兰氏阴性染色的中等大小短棒杆菌,两端钝圆型,成对或单独出现,无芽胞,有小的包膜,两极性染色较为显著(图)。综合以上临床特点,尤其是各个培养平板上的典型菌落特征,
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