天麻钩藤饮对高血压前期大鼠...及miRNA表达影响的研究_周巍.pdf
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1、山 西 中 医山 西 中 医2023 年 8 月第 39 卷第 8 期2023 年 8 月第 39 卷第 8 期SHANXI J OF TCM Aug.2023Vol.39No.857天麻钩藤饮对高血压前期大鼠血管内皮功能及miRNA 表达影响的研究周巍赵英强李甜蔡晓月摘要:目的:观察天麻钩藤饮干预高血压前期SHR大鼠对血压、血管内皮功能及相关miRNA的影响。方法:4周SHR大鼠40只分为模型组及中药高中低剂量组各10只,并予以同龄WKY大鼠10只进行对照,模型组和对照组不进行药物干预,每日灌胃与实验组相同体积的生理盐水;中药组分别予以不同剂量天麻钩藤饮灌胃,1个疗程8周,检测大鼠鼠尾血压、
2、ELISA法检测血管内皮炎性因子TNF-、VEGF,Western blot检测大鼠肾脏组织AT1受体及AngII,RT-PCR检测大鼠肾脏miR155-5P及miR122-5P的表达。结果:给药8周后给药组大鼠与模型组大鼠比较,血压升高幅度更小。各中药给药组大鼠内皮功能障碍相关指标TNF-和VEGF降低,RAAS系统AT1和AngII的表达下降。SHR大鼠肾脏组织miRNA122-5p和miRNA155-5p的表达升高,而中药天麻钩藤饮的干预后miRNA122-5p表达降低,miRNA155-5p的表达有降低趋势。结论:在高血压前期予以天麻钩藤饮,可以有效减低高血压进程中血管内皮损伤,可能有
3、延缓高血压进展、保护靶器官等作用。关键词:高血压前期;微小RNA;天麻钩藤饮;实验研究中图分类号:R544.1文献标识码:A文章编号:1000-7156(2023)08-0057-04DOI:10.20002/j.issn.1000-7156.2023.08.023基金项目:天津市教委科研计划项目(编号:2018KJ033)。作者简介:周巍,女,硕士,副主任医师,天津中医药大学第二附属医院(天津300150);赵英强、李甜、蔡晓月,单位同第一作者。通讯作者:周巍,E-mail:高血压前期是血压高于正常水平、但尚未达到高血压诊断标准的一个阶段,收缩压120139mmHg和(或)舒张压8089mm
4、Hg定义为“高血压前期”或“正常高值血压”1。高血压前期极易发展为临床高血压。2017年美国ACC/AHA高血压指南将高血压的定义界定在大于等于130/80mmHg,实验研究Effect of Tianma Gouteng yin on vascular endothelial function and miRNA expression of prehypertensive ratsZHOUWei,ZHAOYing-qiang,LITian,etal.(TheSecondAffiliatedHospitalofTianjinUniversityofTraditionalChineseMedic
5、ine,Tianjin300150,China)Abstract:Objective:ToobservetheeffectofTianmaGoutengyinonbloodpressure,vascularendothelialfunctionandrelatedmiRNAofSHRratsintervenedbyprehypertension.Methods:SHRratsoffourweeksoldweredividedintomodelgroupandTCMhigh-,medium-andlow-dosegroup,andcontrolledwithWKYofthesameage.TCM
6、groupswereadministereddifferentdosesofTianmaGoutengyinrespectivelybygavage,thecourseoftreatmentwas8weeks.Thebloodpressureofratstailwasdetected.VascularendotheliainflammatoryfactorsTNF-andVEGFweredetectedbyELISA.AT1receptorandAngIIinratskidneytissueweredetectedbyWesternblot.TheexpressionsofmiR155-5Pa
7、ndmiR122-5PinratskidneyweredetectedbyRT-PCR.Results:After8weeksofadministration,thebloodpressureofratsinadministrationgroupincreasedlessthanthatinmodelgroup.TherelatedindexessuchasTNF-andVEGFofratsendothelialdysfunctionineachTCMadministrationgroupdecreased.TheexpressionsofAT1andAngIIinRAASsystemdecr
8、eased.TheexpressionsofmiRNA122-5pandmiRNA155-5pinrenaltissueofSHRratsincreased,whiletheexpressionofmiRNA122-5pdecreasedaftertheinterventionbyTianmaGoutengyinofTCM,andtheexpressionofmiRNA155-5pshowedadecreasingtrend.Conclusion:ToadministerTianmaGoutengyinduringprehypertensioncaneffectivelyreducevascu
9、larendothelialinjuryintheprocessofhypertension,maydelaytheprogressionofhypertension,andprotecttargetorgans,etc.Keywords:prehypertension,miRNA,TianmaGoutengyin,experimentalresearch58山 西 中 医山 西 中 医2023 年 8 月第 39 卷第 8 期2023 年 8 月第 39 卷第 8 期SHANXI J OF TCM Aug.2023Vol.39No.8该诊断标准的前移,说明学界对于早期干预高血压非常的重视。高
10、血压机体持续处于促炎状态,RAAS系统过度激活,最终导致高血压靶器官的损害。高血压前期即存在慢性炎性反应及内皮损伤。微小RNA(microRNA,miRNA)是一种非编码的小RNA,能够在转录后水平调控靶mRNA的表达,研究表明miRNA参与高血压的发生、发展和结局2。经典方剂天麻钩藤饮治疗高血压具有良好的效果,对于血管炎性及内皮损伤具有保护作用。但在高血压前期进行中药的干预对高血压的进展及血管内皮损害是否有治疗作用尚未见报道。该研究进行了动物实验观察在高血压前期应用天麻钩藤饮对高血压相关miRNA及内皮功能的影响。1材料与方法1.1实验动物:SPF级4周龄健康雄性SHR大鼠(其为自发性高血压
11、大鼠,无需造模)40只,同源、同周龄、同性别且血压正常的京都维斯特大鼠(Wistar-kyotorats,WKY)10只,体重平均(10010),购自北京维通利华实验动物技术有限公司,许可证号:SCXK(京)2016-0011。所有动物均饲养于中国医学科学院放射医学研究所清洁级动物房,每笼10只,分笼喂养。饲养于室内通风橱内,恒温自然昼夜,自由取食及饮水。实验严格遵循 关于善待实验动物的指导性意见 (2006年)及国家机构关于实验动物卫生指导使用等相关规定。1.2实验药物:天麻钩藤饮颗粒剂,药用:石决明(先煎)20g,钩藤(后下)15g,川牛膝、杜仲、益母草、桑寄生、夜交藤、茯苓各12g,天麻
12、10g,山栀、黄芩各6g。所有药物均经天津中医药大学第二附属医院中药房鉴定为正品。4保存备用。1.3实验仪器及试剂1.3.1实验试剂:内皮细胞生长因子(vascularendo-thelialgrowthfactor,VEGF)酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒(北京索莱宝,SEKM0032),肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor-,TNF-)ELISA试剂盒(北京索莱宝,SEKM-0009),miRNA提取试剂盒(Omega,R6842);miRNA定量试剂盒(Genecopoeia,QP011),AT1抗体(SAB,#40620),AngII抗体(ABCAM,ab1551
13、06)miR-155-5PPrimer(Genecopoeia,RmiRQP0890),miR-122-5PPrimer(Genecopoeia,RmiRQP0056),DEPC水,无水乙醇,异丙醇,RIPA裂解液(碧云天,P0013B),-Tubulin(中杉金桥(TA-10),GoatAnti-RabbitIgG(二抗)(中杉金桥(ZB-2301),GoatAnti-MOUSEIgG(二抗)(中杉金桥(ZB-2305)等。1.3.2实验仪器:智能无创血压计BP-98A(北京软隆生物技术有限公司),酶标检测仪,全自动化学/荧光/凝胶成像分析系统(Champchemi610plus),实时定量
14、PCR仪(ThermoFisherScientific,型号QuantStudio1),低温高速离心机,高速低温组织研磨仪,电泳仪等。1.4实验方法1.4.1实验分组及给药方法:该研究采用随机、对照设计开展动物实验。将40只4周龄SHR大鼠随机分为模型组、中药低剂量组、中药中剂量组和中药高剂量组,每组10只,同时将10只WKY作为对照组,共5组。连续给药8周。模型组和对照组不进行药物干预,每日灌胃与实验组相同体积的生理盐水;中药低剂量组、中剂量组、高剂量组分别予天麻钩藤饮颗粒剂6.45g/(100g d)、12.9g/(100g d)、25.8g/(100g d)水化开灌胃给药。1.4.2血压
15、测量:选择与大鼠大小合适的筒形固定器,固定大鼠,鼠尾露出,稳定情绪并保持室内环境处于安静状态下,将加压感应器放置于大鼠鼠尾根部,大鼠在清醒与安静状态下,无创血压计在脉搏波波型稳定5秒后自动测量。每只大鼠测量5次血压值,取平均值作为最终结果。测压分别在实验前,治疗4周后,末次灌药后。1.4.3血管内皮相关指标检测:VEGF和TNF-均采用ELISA检测,每项指标取血清50L,按相关试剂盒说明书进行测定。1.4.4肾脏组织miRNA测定:取大鼠肾脏组织,置于1mL无RNA酶液离心管中,每管加11mLRNA-SolvReagent,充分研磨组织后,按说明书提供的方法提取microRNA。用逆转录试剂
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