西黄胶囊调控IL-6_JAK2_STAT3信号通路促进非哺乳期乳腺炎大鼠模型创面愈合的作用机制研究.pdf
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1、2023年7 月第43卷第7 期Jul.2023Vol.43 No.7本文引用:王月,刘丽芳,周亮,胡金辉。西黄胶囊调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路促进非哺乳期乳腺炎大鼠模型创面愈合的作用机制研究 .湖南中医药大学学报,2 0 2 3,43(7):117 3-117 9.湖南中医药大学学报Journal of Hunan University of Chinese Medicine1173西黄胶囊调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路促进非哺乳期乳腺炎大鼠模型创面愈合的作用机制研究王月,刘丽芳,周亮,胡金辉*湖南中医药大学第一附属医院,湖南长沙410 0 0 7【摘要】目的观察西
2、黄胶囊对非哺乳期乳腺炎大鼠模型创面愈合及白细胞介素-6(interleukin-6,I L-6)/非受体型酪氨酸蛋白激酶2(Januskinase2,JA K 2)/信号转导及转录激活蛋白3(signal transducerand activatorof transcription3,ST A T 3)信号通路的影响。方法复制非哺乳期乳腺炎大鼠模型,随机分为模型对照组、阳性药物组、中药治疗组、联合用药组,每组10 只,另选取10 只同批次SPF级健康SD大鼠作为假手术组。干预后观察并评估各组大鼠的创面愈合情况及乳腺炎症指数,HE染色法观察各组大鼠乳腺组织的病理改变;免疫组织化学法检测各组大鼠
3、乳腺组织B淋巴细胞瘤-2 基因关联X蛋白(B-cell lymphoma-2-associatedX,BAX)、B淋巴细胞瘤-2 基因(B-celllymphoma-2,Bcl-2)的平均光密度值;Western blot法及RT-PCR法检测各组大鼠乳腺组织IL-6、JAK2、ST A T 3、人胱天蛋白酶9(Caspase-9)蛋白及mRNA的表达水平。结果与假手术组大鼠比较,模型对照组大鼠的创面愈合率明显降低(P0.05),而乳腺炎症指数,乳腺组织BAX、Bc l-2 平均光密度值,IL-6JAK2、ST A T 3、Ca s p a s e-9蛋白及mRNA的表达水平显著升高(P0.0
4、5)。H E 染色可见模型对照组大鼠乳腺腺叶存在明显的肉芽肿变性,周围充斥大量炎症细胞,阳性药物组、中药治疗组、联合用药组大鼠的病理情况存在不同程度的缓解,炎性细胞浸润及肉芽肿组织明显减少,“空泡样”坏死存在不同程度的愈合。与模型对照组比较,阳性药物组、中药治疗组、联合用药组的创面愈合率、Bcl-2光密度值均明显升高(P0.05);其中联合用药组的创面愈合率、Bcl-2光密度值明显高于阳性药物组及中药治疗组(P0.05);阳性药物组的创面愈合率高于中药治疗组(P0.05)。与模型对照组比较,阳性药物组、中药治疗组、联合用药组的BAX光密度值、乳腺炎症指数均明显下降(P0.05);其中联合用药组
5、的BAX光密度值、乳腺炎症指数明显低于阳性药物组及中药治疗组(P0.05);阳性药物组的乳腺炎症指数低于中药治疗组(P0.05)。与模型对照组比较,阳性药物组、中药治疗组、联合用药组的IL-6、JA K 2、ST A T 3、Ca s p a s e-9蛋白及mRNA的表达水平均明显降低(P0.05);其中联合用药组上述蛋白及mRNA表达水平明显低于阳性药物组及中药治疗组(P0.05),而阳性药物组的上述蛋白及mR-NA表达水平均明显高于中药治疗组(P0.05)。结论西黄胶囊能有效促进非哺乳期乳腺炎大鼠模型的乳腺组织创面愈合,抑制乳腺组织细胞凋亡及炎症反应,其作用机制可能与西黄胶囊抑制IL-6
6、/JAK2/STAT3信号通路相关。【关键词】非哺乳期乳腺炎;西黄胶囊;IL-6/JAK2/STAT3信号通路;创面修复;作用机制【中图分类号 R285Mechanism of action for Xihuang Capsule in promoting wound healing innon-lactational mastitis rat model by regulating IL-6/JAK2/STAT3【文献标志码 Asignaling pathway【文章编号 doi:10.3969/j.issn.1674-070X.2023.07.004WANG Yue,LIU Lifang,
7、ZHOU Liang,HU Jinhui*The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410007,China【收稿日期 2 0 2 2-0 8-0 2【基金项目】湖南省中医药科研项目重点课题(2 0 2 10 0 9);湖南省教育厅课题(19C1390)。【第一作者 王月,女,讲师,主治医师,硕士,研究方向:乳腺疾病的中西医诊疗。【通信作者*胡金辉,女,博士,教授,主任医师,E-mail:。1174Abstract Objective To observe the effects of X
8、ihuang Capsule on wound healing and the signaling pathway ofinterleukin-6(L-6)Janus kinase 2(JAK2)/signal transducer and activator of transcription 3(STAT3)in non-lactational mastitis ratmodel.Methods The non-lactational mastitis rat model was duplicated and randomly divided into model control group
9、,positivedrug group,Chinese medicines group,and drug combination group,with 10 rats in each group.Another 10 SPF grade healthy SDrats in the same batch were selected as sham-operated group.After intervention,the wound healing condition and breastinflammation index of rats were observed and evaluated
10、 in each group,and histopathological changes of breast tissue of rats ineach group were observed by HE staining.Immunohistochemical method was used to determine the average optical density of B-cell lymphoma-2 gene associated X protein(BAX)and B-cell lymphoma-2 gene(Bcl-2)in breast tissues of rats i
11、n each group.Westernblot and RT-PCR were used to examine the expression levels of IL-6,JAK2,STAT3,human Caspase-9 protein,and mRNA inbreast tissue of rats in each group.Results Compared with the rats in sham-operated group,the wound healing rate of rats inmodel control group was significantly lower(
12、P0.05),while the breast inflammation index,the average optical density of BAX andBcl-2 in the breast tissue,and the expression levels of IL-6,JAK2,STAT3,Caspase-9 protein,and mRNA were significantly higher(P0.05).HE staining showed that there was obvious granuloma degeneration in the mammary gland l
13、obes of rats in model controlgroup,surrounded by numerous inflammatory cells.The pathological condition of rats in positive drug group,Chinese medicinesgroup,and drug combination group were alleviated to varying degrees.There was a significant decrease in inflammatory cellinfiltration and granuloma
14、tissue and the vacuolar necrosis was healed to varying degrees.Compared with model control group,thewound healing rate and Bcl-2 optical density of positive drug group,Chinese medicines treatment group,and drug combinationgroup increased significantly(P0.05).The wound healing rate and Bcl-2 optical
15、density of drug combination group were significantlyhigher than those of positive drug group and Chinese medicines group(P0.05).The wound healing rate of positive drug group washigher than that of Chinese medicines group(P0.05).Compared with model control group,the BAX optical density and breastinfl
16、ammation index of positive drug group,Chinese medicines group,and drug combination group decreased significantly(P0.05).The BAX optical density and breast inflammation index of drug combination group were significantly lower than those of positivedrug group and Chinese medicines group(P0.05);the bre
17、ast inflammation index of positive drug group was lower than that of Chinesemedicines group(P0.05).Compared with model control group,the expression levels of IL-6,JAK2,STAT3,Caspase-9 protein,and mRNA inpositive drug group,Chinese medicines group,and drug combination group reduced significantly(P0.0
18、5).The expression levels ofthe aforementioned proteins and mRNA in drug combination group were significantly lower than those in positive drug group andChinese medicines group(P0.05),while the expression levels of the aforementioned proteins and mRNA in positive drug groupwere significantly higher t
19、han those in Chinese medicines group(P0.05).Conclusion Xihuang Capsule can effectively promote thewound healing of breast tissue in non-lactational mastitis rat model,and inhibit the apoptosis and inflammatory response of breasthistiocyte.Its mechanism of action may be related to the inhibition of I
20、L-6/JAK2/STAT3 signaling pathway by Xihuang Capsule.Keywords non-lactational mastitis;Xihuang Capsule;IL-6/JAK2/STAT3 signaling pathway;wound healing;mechanismof action非哺乳期乳腺炎(non-puerperal mastitis,NPM)多指女性在非妊娠期、哺乳期发病的乳房慢性炎症 1-2 。肉芽肿性乳腺炎(granulomatous lobular mas-titis,G LM)是NPM中最常见的临床类型。NPM往往反复发作,
21、迁延不愈,并在乳房皮肤形成大量瘘管窦道,严重破坏患者的乳房外观3。目前,医学界治疗NPM仍无标准的临床指南和治疗方案,NPM在酿脓期后进行手术切开排脓治疗往往会造成更多的病湖南中医药大学学报http:/2023年第43卷理性窦道及瘘管,手术治疗带来的创伤、恐惧心理、乳房外形损伤、术后瘢痕形成严重降低了患者的生活质量 4。现阶段,NPM是医学界颇为棘手的难题,是研究者呕须攻克的临床重点,查阅现有文献总结本病的治疗关键,包括调控乳腺局部炎性反应、改善局部症状、提升免疫功能 5-。在NPM发病机制的相关研究上,有学者提出了研究结论,但仍存在较大争议,临床疗效欠佳 7。因此,寻求有效治疗2023年第4
22、3卷NPM、保护乳房外形、减少患者身心痛苦的治疗手段意义重大。NPM相当于中医学“粉刺性乳痈”8 ,诸多医家对本病的病因病机及发展预后多有论述,一般认为痰瘀郁结、热盛肉腐是NPM的病机。西黄胶囊由牛黄、麝香、乳香、没药等药物组成,方简力专,具有清热结、通瘀滞、消肿止痛的功效9。目前,西黄胶囊治疗NPM的临床研究较多,但其治疗NPM的基础研究鲜见报道。本实验研究以前期预实验为基础,通过构建NPM大鼠模型,探讨西黄胶囊对NPM大鼠模型创面愈合的影响及作用机制。1材料与方法1.1动物50只SPF级雌性SD大鼠,6 7 周龄,体质量18 0 200,购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司,动物许可证号:S
23、CXK(湘)2 0 19-0 0 0 4,合格证号:43072663411384024。适应性喂养1周,自由摄食,环境温度2 4 2 6,相对湿度50%6 0%,实验全程按照动物伦理学标准进行(伦理批准号:LL2021009)。1.2主要药物与试剂西黄胶囊(石家庄东方药业股份有限公司,批号:2 0 2 2 0 317);醋酸泼尼松龙片(天津信谊津津药业有限公司,批号:2 0 2 2 0 6 2 30 4);白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、非受体型酪氨酸蛋白激酶2(Januskinase2,JA K 2)、信号转导及转录激活蛋白3(signal transducer an
24、d activator of transcription 3,STAT3)、B淋巴细胞瘤-2 基因关联X蛋白(B-celllymphoma-2-associated X,BA X)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、人胱天蛋白酶9(Caspase-9)抗体(美国proteintech公司,批号分别为 2 18 6 5-1-AP、6 6 46 6-1-Ig、10 2 53-2-A P、10 38 0-1-AP、50 599-2-I g、12 7 8 9-1-A P);H R P山羊抗小鼠IgG二抗(美国Proteintech公司,批号SA00001-1);P
25、BS缓冲液(美国Hyclone公司,批号:8 0 33440 98)。1.3主要仪器电镜(德国徕卡公司,型号:8 344-I);荧光PCR板、荧光定量RCP仪(美国Thermo公司,型号分别为6 6 347-A、PI K 0 R E A L9 6);电动摇床(海门市其林贝尔仪器制造有限公司,型号:TS-92);水平琼脂糖电泳槽、电泳仪、转膜仪(北京六一仪器厂,型号分别为JK3056、D YY-2 C、D YCZ-40 D);其余实验试剂及仪器均由实验室提供。湖南中医药大学学报http:/大鼠作为假手术组。假手术组与模型对照组均予2 mL的生理盐水灌胃1次/d;中药治疗组大鼠予西黄胶囊人等效剂量
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