鲜食欧李组培高效快繁体系的建立_顾美影.pdf
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1、技术研究 T e c h n i c a lR e s e a r c hF O R E S TS C I ENC EANDT E CHNO L O G Y8 5 二二三年第五期 林业科技通讯鲜食欧李组培高效快繁体系的建立*顾美影,刘保东,刘天牧,李振洲,初广武,苏 琳(白城市林业科学研究院,吉林 白城 1 3 7 0 0 0)摘要:以鲜食欧李(C e r a s u sh u m i l i s)茎段为外植体,通过茎段腋芽诱导培养、壮苗培养、生根培养,建立其高效快繁体系。结果表明:腋芽诱导的最适培养基为M S+6-B A0.5m g/L,2 5d左右平均诱导腋芽数达5 8以上;壮苗最适培养基
2、为M S+6-B A0.1m g/L+N A A0.2m g/L,2 5d左右可长至5.1c m以上;生根培养的最适培养基为1/4 M S(大量元素)+I A A1.0m g/L+I B A0.1m g/L,生根率达9 0%左右,6 7d开始生根,3周即可移栽炼苗。成功建立了鲜食欧李组培高效快繁体系。关键词:欧李;C e r a s u sh u m i l i s;组织培养;均匀设计;快繁中图分类号:S 6 6 2.5 文献标识号:A文章编号:2 0 9 70 2 8 5(2 0 2 3)0 50 0 8 50 3D O I:1 0.1 3 4 5 6/j.c n k i.l y k t.2
3、 0 2 2.0 9.2 6.0 0 0 2*吉林省科学技术厅项目:吉林西部欧李鲜食新品种选育技术研究(项目编号:2 0 2 1 0 2 0 2 0 8 3 N C)。第一作者:顾美影(1 9 8 6-),硕士研究生,助理研究员,研究领域为森林培育。通讯作者:苏琳(1 9 8 5-),硕士研究生,助理研究员,研究领域为药物化学、林木育种、荒漠化。欧李(C e r a s u sh u m i l i s),蔷薇科(R o s a c e a e)樱桃属(C e r a s u s)落叶小灌木,自然分布于吉林、黑龙江、辽宁、内蒙古、河北、河南、山东等地,根系庞大,耐涝、耐寒、耐 旱、耐 盐 碱,
4、保 持 水 土、抗 旱 固 沙 的 能 力 较强1-2。白城市林业科学研究院于2 0 0 1年开始了野生欧李的选育工作,经过多年驯化和播种繁育,从成熟期、果实形状、颜色、口感、丰产性状几个方面筛选出了多种鲜食欧李新类型1。为了保持欧李植株原有性状,须采用无性繁殖。而在吉林西部地区进行欧李扦插的成活率在3 0%左右,很难在短期内获得大量植株,所以利用组织培养快速繁殖,可在短期内获得大量的脱毒优质苗。1 材料与方法1.1 外植体处理2 0 2 1年5月,于白城市林业科学研究院采取鲜食欧李嫩绿枝条。将采回的外植体用无菌水洗净,在洗衣粉水中浸泡1 5m i n,再用无菌水冲洗干净,在超净工作台上用7
5、5%的酒精消毒4 5s,无菌水冲洗6次,每次1m i n。然后用滤纸吸干外植体表面的水分,切除被消毒液损伤的部分3。消毒过程中需不停地边震动边摇晃冲洗液,以保证消毒液触及到外植体的各个部位。备用外植体切割时,保证每个茎段保留1 2个腋芽。1.2 腋芽诱导培养经查阅文献和大量预试验,欧李茎段腋芽诱导激素选择6-B A,分设3个梯度0.1、0.5、1.0m g/L,以M S为基本培养基,添加蔗糖3 0g/L,琼脂粉6.0g/L,p H值5.8。每处理1 5个外植体,重复3次。筛选出最快速、最大量、最适合欧李腋芽诱导的培养基。1.3 壮苗培养在本试验中以M S为基本培养基,添加蔗糖2 5g/L,琼脂
6、粉6.0g/L,p H值5.86.0,再附加不同浓度的细胞分裂素6-B A和生长素(NAA、I B A、I AA)进行壮苗培养,每处理2 0个外植体,重复3次。1.4 生根培养待经过壮苗的欧李幼苗长至35c m左右,将其取出,切掉底部略膨大部分,接种到生根培养基中进行生根培养。采用均匀设计4的方法,以1/4 M S(大量元素)为 基 本 培 养 基,添 加 蔗 糖1 0g/L,琼 脂 粉6.0g/L,p H值5.86.0,并添加不同浓度的I AA和I B A,每处理2 0个外植体,重复3次,计算生根率,同时统计根长、横径和苗高。选用U1 0(1 08)均匀表进行试验设计因素水平安排,同时探索I
7、 B A和I AA浓度交叉配比对生根诱导率的影响,进而筛选出最适合欧李生根的培养基。1.5 培养环境试验所需培养环境为温度(2 52),空气相对湿度5 0%6 0%,光照时间1 6h/d,光强为15 0 020 0 0l x,试验所用药品均为分析纯。1.6 数据分析本次试验过程中生根培养采用的均匀设计(U n i-f o r mD e s i g n)是我国数学家方开泰结合数论及多元统计,以正交试验设计为基础,设计出的一种适用于多因素、多水平试验的新方法。由于均匀设计表不存在整齐可比性,对试验结果不采用方差分析法,直接采用直观分析法和回归分析方法进行分析5。利用专业统计软件S P S SS t
8、 a t i s t i c s2 0.0进行数据处理,采用技术研究 T e c h n i c a lR e s e a r c h8 6 F O R E S TS C I ENC EANDT E CHNO L O G Y二二三年第五期 林业科技通讯回归分析方法对变量观测数据进行分析,探究各因素对试验的影响并建立有效的模型,以寻求最优化的试验设计方案6。其他试验数据均使用E x c e l和S P S S2 0.0进行分析。2 结果与分析2.1 不同浓度激素对腋芽诱导的影响3个浓度的6-B A均能诱导出欧李腋芽芽苗,结果见表1。A 1处理的欧李外植体在诱导过程中产生的愈伤组织较少,芽苗生长势
9、较好,但分化能力相对较弱,腋芽诱导数在2 1左个左右。A 2处理的芽苗长势较好,但有轻微的玻璃化产生,不能将此种芽苗直接进行生根诱导,但诱导芽苗分化的能力很强,可在短时间内获得大量幼苗,如图1 a。A 3处理的诱导能力最强,但会产生较多愈伤组织,且玻璃化严重,芽苗生长势差,不能进行下一步的试验,如图1中b和c。表1 不同浓度激素对欧李茎段腋芽诱导的影响处理6-B A浓度/(m g/L)诱导率/%萌发腋芽平均数芽苗生长状况A 10.11 0 02 1愈伤组织较少,芽苗翠绿,无玻璃化,长势良好A 20.51 0 05 8愈伤组织较少,芽苗翠绿,玻璃化较轻,长势较好A 31.01 0 09 2愈伤组
10、织较多,玻璃化严重,芽苗短小图1 不同浓度激素对欧李茎段腋芽诱导的影响2.2 不同浓度激素对欧李壮苗培养的影响选用上述A 2培养基进行欧李幼苗的大量增殖,在短时间内可以获得大量试管苗,但幼苗有轻微玻璃化产生,不能直接用于生根培养,需要进行壮苗。欧李壮苗试验在茎段腋芽诱导增殖培养基的基础上,降低细胞分裂素的浓度,使其不再大量分化,附加不同生长素,促使其生长。结果见表2,由试验结果可知,B 1处理下苗高可达5.1c m左右,且幼苗颜色呈深绿色,产生的愈伤组织极少或者不产生,是欧李壮苗的最佳培养基,即6-B A0.1 m g/L+NAA0.2 m g/L。由此可见最适合欧李壮苗的生长素为NAA,浓度
11、为0.2m g/L。而选用I B A和I AA进行试验的培养基,其幼苗长势不强,且随着6-B A浓度的增加,幼苗颜色逐渐变黄,产生愈伤组织较多,影响其进一步生长。2.3 不同激素浓度对欧李生根诱导的影响生根诱导试验安排及结果见表3,采用S P S S软件对数据进行逐步回归分析,标准使用F检验概率,入选水平0.0 5,剔除水平0.1 0,剔除掉对Y影响不显著表2 不同浓度激素对欧李壮苗培养的影响处理6-B A浓度/(m g/L)N A A浓度/(m g/L)I B A浓度/(m g/L)I A A浓度/(m g/L)苗高/c m叶色愈伤情况B 10.1 00.2 05.1深绿极少B 20.1 5
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