矿区林下经济植物种植对根际土壤生物群落特征及理化性质的影响.pdf
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1、矿区林下经济植物种植对根际土壤生物群落特征及理化性质的影响魏紫静 1,邓敏 1,余丙涛 2,赖公政 1,舒荣波 1,代力 1(1.中国地质科学院矿产综合利用研究所,中国地质调查局矿山生态保护修复技术中心(西部),四川成都610041;2.西部(重庆)地质科技创新研究院有限公司,重庆400030)摘要:这是一篇矿山环境工程领域的论文。为评价离子型稀土矿区林下经济植物种植对根际土壤生物群落特征及理化性质影响,选取何首乌、葛根等 7 种典型林药经济植物和黑麦草、狼尾草等 7 种典型林草经济植物为研究对象,开展林下经济植物种植盆栽实验。通过测定植物株高、叶面积、地上/地下部生物量和土壤全磷、全钾、全氮
2、、速效氮、速效磷、有机质、阳离子交换量以及微生物群落组成、丰富度、多样性等指标,综合研究林下经济植物种植对根际土壤生物群落特征及理化性质的影响。结果表明:种植中草药类植物会增加微生物多样性,而种植牧草类会对微生物群落组成产生一定的影响;种植中草药类林下经济植物对土壤肥力有较明显的提高,粉防己最为明显较照对组全氮、碱解氮、有机质、分别提高 300.0%、118.5%、825.3%;种植牧草类对土壤肥力影响不明显。通过本文研究表明,种植林下经济植物会对土壤生物群落产生一定的影响,并在一定程度上提高土壤肥力。关键词:矿山环境工程;矿区;林下经济;生物群落特征;土壤理化性质doi:10.3969/j.
3、issn.1000-6532.2023.04.022中图分类号:TD985 文献标志码:A 文章编号:1000-6532(2023)04014409 离子型稀土矿又称风化型稀土矿,是富含稀土元素的花岗岩经长期外力地质作用下溶解、迁移,在合适环境条件下吸附沉积在前地表花岗岩风化壳中的蒙脱石、高岭土、伊利石等黏土矿物中形成的矿体1,是全球稀土资源的重要组成部分。离子型稀土矿的开采历经池浸、堆浸以及原地浸矿 3 种工艺2,目前主要采用原地浸矿工艺开采,该工艺不开挖矿体、不剥离表层覆土、劳动强度较低,且可充分利用低品位稀土资源,是较为绿色高效的开采方式3。原地浸出开采占用山林面积大,具有开采周期短和流
4、动性强的特点4。闭矿后,开采企业搬迁,矿区林地资源被忽略,巨大的林地资源未能发挥应有的经济效益和社会效益,造成了大量林地资源浪费。因此,有必要对矿区林地资源进行开发利用。目前,林地资源的开发模式主要有:林禽、林菌、林草、林药等模式5。林禽模式可充分利用林下空间和杂草资源,有较高经济效益,但随着养殖规模扩大,树下家禽密度过大,易造成林下生态系统破坏,不利于维护林地生态多样性6。林菌模式生产效率高,但栽培劳动强度较大、耗时较长,对林下环境要求较高7。林草模式可改善林地环境,该模式针对畜类动物,养殖密度大造成林地土壤板结,森林水资源污染,不利于林业资源的保护8。林药模式栽培药材与林业作物生长几乎无矛
5、盾,根据林下生态环境选择适宜种植药材二者可相辅相生,利用中草药植物特性可充分发挥出其药用价值6,具有较好经济前景。收稿日期:2022-08-30基金项目:中国地质调查局地质大调查项目(DD20221697);四川省重点研发计划(面上项目)(22ZDYF0038)作者简介:魏紫静(1994-),女,助理工程师,主要研究方向为矿山生态修复。通信作者:邓敏(1992-),男,助理工程师,主要研究方向为矿山生态修复。矿产综合利用 144 Multipurpose Utilization of Mineral Resources2023 年因此,本研究根据离子型稀土矿山分布情况,因地制宜选取以何首乌、葛
6、根、魔芋、黄精、金银花、粉防己、茯苓苗为代表林药经济植物,以黑麦草、狼尾草、白茅、白三叶、牛鞭草、狗牙根为代表的林草经济植物,开展以本土特色品种为主的矿山林下经济作物种植研究,以期在多个成片矿区形成具有相当规模和地方特色的林下经济作物,发展矿区林下经济产业,助力矿山生态修复与乡村产业振兴的高效融合。1实验 1.1实验材料 1.1.1供试土壤供试土壤采自于江西某地,将采集的土壤剔除杂质风干,磨过尼龙筛后备用。土壤理化性质见表 1。表 1 土壤基本理化性质Table 1 Basic physical and chemical properties of soilpH值 有机质/(g/kg)阳离子交
7、换量/(coml/kg)全氮/(g/kg)全磷/(mg/kg)全钾/(g/kg)碱解氮/(mg/kg)速效钾/(mg/kg)有效磷/(mg/kg)7.887.3020.315.001440.007.6056.10171.002.89 1.1.2实验试剂本次研究所用的试剂均为分析纯(AR),包括无水硫酸钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化铵、硫酸亚铁铵(六水)、氯化钠、尿素、异戊醇、尿素、过磷酸钙、硫酸钾等。1.1.3供试植物种子本实验过程中采用的罗汉果(LHG)、何首乌(HSW)、葛根(GG)、金银花(JYH)、粉防己(FFJ)、茯苓苗(FLM)、黄精(HJ)、魔芋(MY)、牛鞭草(NBC)、狗牙根(
8、GYG)、狼尾草(LWC)、白茅(BM)、白三叶(BSY)、黑麦草(HMC)的植物种子,均购置于篱丰种业有限公司。1.2实验方法 1.2.1盆栽实验每盆装入土壤 6.0 kg,按照每公斤土:0.2 g尿素,0.4 g 过磷酸钙,0.6 g 硫酸钾施入底肥,拌匀,加入适量水分,待土壤稳定后种植作物,并设置对照组(CK),均按照常规农艺管理措施和施肥量9对植物全生育期进行管理和实验。1.3测试方法 1.3.1植物生物量植物成熟后,用剪刀将地上部与地下部剪开,用自来水冲洗干净后擦干,用直尺测定植物的株高、叶面积,用天平称取植物地上部、地下部生物量重量(鲜重),记录数据。1.3.2土壤生物群落土壤样本
9、采集经液氮猝灭后送至北京诺禾致源科技股份有限公司进行 16S rDNA 基因扩增子高通量测序。具体流程为:采用 CTAB 法对样本DNA 进行提取;采用通用引物 515F 和 806R 对16S V4 区进行 PCR 扩增;反应体系(30 L):2Phusion Master Mix 15 L,2 mol/L Primer 3L,1n g/Lg DNA 10 L,H2O 2 L;反应程序:98 预变性 1 min,30 个循环包括(98,10 s;50,30 s;72,30 s),72,5 min;PCR 产物使用 2%琼脂糖凝胶进行电泳检测;等浓度混样后用 2%琼脂糖胶电泳纯化 PCR 产物
10、;使用 TruSeqDNA PCR-Free Library Preparation Kit 建库试剂盒进行文库的构建,构建好的文库经过 Qubit 定量和文库检测,使用 NovaSeq 6000 进行上机测序。1.3.3土壤理化性质土壤理化性质测试主要参照土壤农化分析10,具体为:pH 值检测采用电位法,总磷(P)和速效磷(AP)检测采用钼锑抗比色法,总钾(K)和速效钾(TK8)检测采用火焰光度计法,总氮(N)检测采用凯氏定氮法,速效氮(AN)检测采用碱解扩散法,阳离子交换量(CEC)采用氯化铵-乙酸铵交换法,有机质(SOM)测定采用重铬酸钾水合热法。1.3.4数据处理与统计利用 QIIME
11、 软件对高通量测序原始数据进行过滤除杂,以除去低质量序列、错配序列、引物序列和过长(500 bp)或过短序列(200 bp),从而获得高质量的 Cleandata,根据 Reads 间的重叠关系将 Reads 拼接成 Tags。不同样本在 97%一致性阈值下,利用 Mothur 软件计算 Alpha 多样性,包括 Chao1、Shannon、Simpson 和 Shannoneven 指数11;利用 Qiime 软件生成各分类学水平丰富度和Beta 多样性12的主坐标分析;利用软件USEARCH对拼接好 Tags 进行 OTU 聚类13;利用 Uparse 和第 4 期2023 年 8 月魏紫
12、静等:矿区林下经济植物种植对根际土壤生物群落特征及理化性质的影响 145 Usearch 软件对 OTU 序列进行聚类和统计。植物生物量数据 Origin2022 绘图,土壤基本理化性质数据 Microsoft Excel 2016 统计。2实验结果 2.1林下经济作物生长特性14 种林下经济作物种植 6 个月株高、叶面积、地上及地下部生物量均不同(表 2)。由图 1(a)可知,何首乌、葛根、金银花、狼尾草等株高生长显著,罗汉果、何首乌、葛根、狼尾草、魔芋叶面长幅较大。结合图 1(b)可知,罗汉果地上部分和白茅地下部分生物量最大,而黄精、牛鞭草、狗牙根、黑麦草、金银花生物量均较小,可能需要更长
13、生长周期。表 2 林下经济植物生物量Table 2 Understory economic plant biomass名称株高/cm叶长/cm叶宽/cm鲜重/g地上部地下部初始最终初始最终初始最终初始最终初始最终三叶草8.624.21.13.41.42.51.527.90.723.7罗汉果20.1149.46.513.57.87.53.1280.40.82.3粉防己/80.3/4.9/3.9/6.81.231.8黄精/20.1/6.2/2.5/7.413.319.8牛鞭草21.060.2/14.3/1.82.216.51.014.6狗牙根19.235.3/26.5/0.95.611.31.16
14、.4何首乌15.0320.4/8.1/4.5/26.8/34.8黑麦草28.370.1/21.4/0.52.476.314.517.6葛根7.3258.33.37.42.36.3/17.2/13.6白茅24.087.1/48.6/1.24.773.31.659.3金银花41.3310.31.72.80.91.5/71.3/13.2茯苓苗/52.3/1.7/0.9/33.1/5.5狼尾草/78.2/32.2/2.1/29.1/22.4魔芋/68.4/11.3/4.3/34.921.631.8“/”表示植物种植时为种子播种或生物量极小,无法测量相关数据。806040200350(a)3002502
15、00150100500始末株高差/cm始末叶面积差/cm2三叶草罗汉果粉防已黄精牛鞭草狗牙根何首乌黑麦草葛根白茅金银花茯苓苗狼尾草魔芋30025020015010050(b)102030405060地上部始末重量差/g地下部始末重量差/g0三叶草罗汉果粉防已黄精牛鞭草狗牙根何首乌黑麦草葛根白茅金银花茯苓苗狼尾草魔芋始末株高差始末叶面积差图 1 不同林下经济作物的生长特征Fig.1 Growth characteristics of cash crops in different understory 146 矿产综合利用2023 年 2.2林下经济植物种植土壤生物群落特征 2.2.1种植不同植
16、物根际土壤的细菌高通量测序结果及多样性分析本研究对 15 个土壤样品进行分析,种植林下经济作物对土壤微生物的丰富度和多样性有一定影响。所有样本测序获得 1,168,322 对序列,有效序列 885,044 条,每样品平均产生 76,338 条高通量测序标签。分析测序覆盖率达 0.997 以上,各土壤样品测序结果可反映土壤微生物群落结构真实情况。Alpha 多样性分析反映,种植不同作物根系土壤微生物群落的丰度和多样性不同。从表 3 可知,何首乌土壤细菌的 Chao 1 指数最大且 Ace 指数较大,葛根土壤细菌 Ace 指数最大且 Chao 1 指数较大,说明种植何首乌和葛根中草药类的林下经济作
17、物土壤细菌丰富度最大。与 CK 对比,种植各作物土壤细菌平均 Chao 1 指数、Shannon 指数和 Ace 指数均存在差异,但并不明显,说明种植作物对土壤群落丰度和多样性有影响,但影响有限。表 3 不同林下经济作物种植对土壤细菌 Alpha 多样性指数的影响Table 3 Effects of different understory cash crops on soil bacterial Alpha diversity index样品编号Simpson指数Shannon指数Chao 1指数Ace指数CK0.9939.0522998.4383070.002罗汉果0.9979.88535
18、25.5203583.180何首乌0.9969.7773768.3563859.541葛根0.9979.8043764.0433862.395金银花0.9969.2332613.0712630.023粉防己0.9979.8493482.1903516.295茯苓苗0.9979.6773209.8723312.846黄精0.9979.5663205.2943258.563魔芋0.9989.9763527.7463580.656牛鞭草0.9969.3082691.6542766.166狗牙根0.9979.8413367.0003417.542狼尾草0.9969.6733376.6533441.45
19、6白茅0.9969.3682854.7912893.736白三叶0.9979.6883565.2973660.292黑麦草0.7515.0332348.1752416.727 2.2.2种植不同植物根际土壤的细菌在门、属分类水平上的群落组成对门水平上相对丰度前 10 位细菌门分析(图 2),各根际土样本中细菌在门、属分类水平上细菌种类基本相同,但种植林下经济作物样品中群落占比均与对照土壤存在差异。优势菌门有变形菌门(Proteobacteria)、蓝藻细菌门(Cyanobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、芽单胞菌门(Gemmatim-onadetes)、酸杆菌门(Ac
20、idobacteria)等,较优菌门是变形菌门,其次是酸杆菌门,对应相对丰度分别为 27.55%76.38%和 5.73%20.58%。种植作物除黑麦草外,酸杆菌门比例普遍增高,蓝藻细菌门降低;黑麦草种植后与其他作物细菌群落差异较大,变形菌门比例显著增高,其余优势菌门均降低。这些菌群被发现在不同林下经济作物土壤中,可认为是本土核心菌群。1.000.750.500.25CKLHGHSWGGJYHFFJFLMHJMYNBCGYGLWCBMSBYHMC相对丰度样本名0OthersCyanobacteriaGemmatimonadetesMyxococcotaChloroflexiActinobact
21、eriotaBacteroidotaFirmicutesAcidobacteriotaUnidentified_BacteriaProteobacteriaOthers 为图中 10 个门之外其他所有门的相对丰度之和。图 2 根际土壤细菌在门水平上的群落组成Fig.2 Community composition of rhizosphere soil bacteria atphylum level 土壤细菌在属水平上存在差异(图 3),相对丰度1.00%条件下,相比对照样本(CK),罗汉果、葛根、粉防己、茯苓苗、牛鞭草、狗牙根、狼尾草和白茅样本中显著增加的菌属有分别第 4 期2023 年 8
22、月魏紫静等:矿区林下经济植物种植对根际土壤生物群落特征及理化性质的影响 147 Terracidiphilus(1.34%)、Novosphingobium(1.38%)、Bryobacter(3.47%),何首乌样本显著增加的菌属有Acinetobacter(2.46%),Escherichia-Shigella(3.04%),MND1(4.04%);以上作物样本中并没有显著减少的菌属。黑麦草样本聚集较多的菌属为Enterobacter(62.65%),MND1、Subgroup、IS-44菌属聚集较少。说明种植不同作物会对土壤细菌菌属种类产生影响。PhylumCKLHGHSWGGJYHFF
23、JFLMHJMYNBCGYGLWCBMBSYHMCEllin6055Unidentified_ChloroplastGemmatimonasRamlibacterSphingomonasEnterobacterEscherichia-ShigellaBradyrhizobiumPseudolabrysTerracidiphilusOccallatibacterGranulicellaLigilactobacillusNovosphingobiumHaliangiumSubgroup_10lamiaGaiellaBurkholderia-Caballeronia-Paraburkholderia
24、SteroidobacterEllin6067DongiaSWB02BryobacterClostridium_sensu_stricto_1BifidobacteriumCandidatus_SolibacterChryseolineaSaccharopolysporaVibrioAcinetobacterMND1IS-44Candidatus_NitrosotenuisPolycyclovoransGroupGroupPhylumAcidobacteriotaActinobacteriaActinobacteriotaBacteroidotaCrenarchaeotaCyanobacter
25、iaFirmicutesGemmatimonadetesMyxococcDtaProteobacteriaCBZWCKZCY3210123纵向为样本信息,横向为物种注释信息,左侧聚类树为物种聚类树,热图对应值为每一行物种相对丰度经过标准化处理后得到的 Z 值。图 3 土壤细菌在属水平上的群落组成Fig.3 Community composition of soil bacteria at genus level 2.2.3种植不同植物根际土壤的细菌核心菌群对土壤细菌群落进行聚类分析(图 4),种植不同林下经济作物根际土壤和对照样本的核心细菌群落数目组成存在相似性、重叠性和特异性。由图 4(a)
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