牛病毒性腹泻病毒NS3基因的生物信息学分析、蛋白纯化及免疫原性分析.pdf
《牛病毒性腹泻病毒NS3基因的生物信息学分析、蛋白纯化及免疫原性分析.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《牛病毒性腹泻病毒NS3基因的生物信息学分析、蛋白纯化及免疫原性分析.pdf(8页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、华北农学报():收稿日期:基金项目:河北省重点研发计划()作者简介:杨宁宁()女河南商丘人在读博士主要从事新型疫苗的研发通信作者:陈创夫()男新疆石河子人教授博士主要从事分子病理学研究牛病毒性腹泻病毒 基因的生物信息学分析、蛋白纯化及免疫原性分析杨宁宁徐明国张江伟易继海陈创夫(.石河子大学 动物科技学院新疆 石河子.铁门关职业技术学院 畜禽智能养殖新疆 铁门关.西部地区高发人兽共患传染性疾病防治协同创新中心新疆 石河子)摘要:为了探讨牛病毒性腹泻病毒()非结构蛋白()并获得具有较高免疫原性的 重组蛋白利用生物信息学研究方法对 蛋白氨基酸进行序列分析经 技术扩增 基因序列通过无缝克隆技术构建()
2、重组表达质粒将其转化至大肠杆菌()感受态细胞中诱导其表达 重组蛋白并提纯通过 方法检测其反应原性将获得的较高纯度的 重组蛋白免疫/小鼠收集血清方法分别检测血清中、和 抗体水平最后通过病毒中和试验检测其中和病毒的能力 结果表明:蛋白氨基酸序列中无信号肽和跨膜区二级结构主要以无规则卷曲为主且 氨基酸序列中含有优势抗原表位利用 和无缝克隆技术成功构建了()重组表达载体经诱导表达获得了较高纯度的 重组蛋白大小约为 与理论大小相符 结果表明 重组蛋白具有较高的反应原性 检测 重组蛋白免疫后的小鼠能够产生高水平的、和 抗体结果显示免疫组小鼠产生的抗体水平极显著高于 阴性对照组(.)血清中和抗体水平也极显著
3、高于 阴性对照组(.)总之成功获得了纯度高且具有免疫原性的 重组蛋白关键词:牛病毒性腹泻病毒生物信息学原核表达免疫原性中图分类号:文献标识码:文章编号:():./.(.):()().().()./.华 北 农 学 报 卷 ().(.)(且不稳定性指数为.表明该蛋白为稳定蛋白质 华 北 农 学 报 卷.蛋白的跨膜结构域和信号肽分析 蛋白的跨膜结构域和信号肽分别利用.和 .在线软件分析结果发现 蛋白无跨膜结构域和信号肽序列(图)图 蛋白跨膜结构域预测.蛋白的二级结构和三级结构模型预测 蛋白的二级结构利用 在线软件预测分析发现 蛋白的二级结构中(图)螺旋由 个氨基酸占.延伸链由 个氨基酸占.转角由
4、个氨基酸占.无规则卷曲由 个氨基酸占.表明 蛋白的二级结构主要以无规则卷曲为主 蛋白的三级模型利用 在线软件构建(图)图 蛋白信号肽预测.图 蛋白的二级结构预测.图 蛋白的三级结构预测模型.蛋白的 细胞抗原表位预测抗原表位指蛋白质表面由 个氨基酸或碳水基团组成并且具有刺激机体产生抗体的区域 利用 软件对 蛋白的优势抗原表位进行预测结果发现其有 个优势抗原表位分别在第 等氨基酸片段区(表)表明 蛋白整体抗原性较好具有作为疫苗及诊断抗原的潜力.目的基因的扩增 反应以 毒株的 为模板以 和 为引物经.琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物在约 处出现一条条带(图)测 序 结 果 比 对 发 现 与 公 布 的
5、基因序列达到 的同源性表明成功获得目的基因片段.()重组质粒酶切鉴定将()重组质粒转化至()感受态细胞中挑取单克隆菌并扩增提取质粒用 和 双酶切经.琼脂糖凝胶电泳检测发现与目的基因大小相符的条带(图)表明 基因与()载体已相互连接即成功获得()重组质粒.重组蛋白的诱导表达和可溶性分析将()菌液接种到 液体培养基中诱导表达经 电泳分析结果显示在 处出现一条与 蛋白大小相符的蛋白条带且随诱导时间的延长蛋白表达量逐渐增高表明 蛋白成功表达最佳诱导时间为 (图)电泳分析超声破碎后的上清和沉淀结果显示 重组蛋白在沉淀中含量较高说明该蛋白主要以包涵体的形式进行表达(图)期杨宁宁等:牛病毒性腹泻病毒 基因的
6、生物信息学分析、蛋白纯化及免疫原性分析 表 预测多肽.序号.开始结束肽 长度.阴性对照.目的基因.图 基因的 扩增.()质粒.()重组质粒双酶切.().().图 ()重组质粒双酶切鉴定.():.蛋白质分子质量标准.()诱导 的菌液:.蛋白质分子质量标准.破碎后菌液沉淀.破碎后菌液上清液:.().:.图 重组蛋白最佳诱导时间及可溶性分析.重组蛋白的纯化与 检测按照 标签蛋白纯化试剂盒(包涵体蛋白)步骤对 重组蛋白进行纯化经 电泳分析得到了纯度较高的 重组蛋白(图)纯化的蛋白 验证结果显示在约 处出现明显的反应条带(图)表明纯化的 重组蛋白能够与 阳性血清发生特异性反应.小鼠血清、和 抗体检测免疫
7、小鼠血清中的、和 抗体水平由 检测 结果显示:与 阴性对照组相比 重 华 北 农 学 报 卷组蛋白免疫组能诱导小鼠产生较高水平的、和 抗体(图)表明其具有较好的免疫原性.蛋白质分子质量标准.纯化后的 重组蛋白.图 重组蛋白的纯化鉴定.蛋白质分子质量标准.纯化后的 重组蛋白 .图 重组蛋白的 鉴定.小鼠血清中 抗体水平.小鼠血清中 抗体水平.小鼠血清中 抗体水平不同大写字母表示 水平差异极显著(.)图 同.(.).图 小鼠血清、和 抗体检测.小鼠血清中和抗体水平小鼠血清中和抗体结果显示一免后 重组蛋白免疫组与 阴性对照组相比极显著高于 阴性对照组(图)且随着免疫时间和免疫次数的增加这种显著性更为
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 病毒性 腹泻 病毒 NS3 基因 生物 信息学 分析 蛋白 纯化 免疫原性
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。