DDR1对结直肠癌侵袭和上皮细胞间质转化的影响.pdf
《DDR1对结直肠癌侵袭和上皮细胞间质转化的影响.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《DDR1对结直肠癌侵袭和上皮细胞间质转化的影响.pdf(5页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、分子诊断与治疗杂志2023年7月第15卷第7期J Mol Diagn Ther,July 2023,Vol.15No.7论著作者单位:1.日照市人民医院生殖医学科,山东,日照 2768002.日照市人民医院检验科,山东,日照 2768003.日照市妇幼保健院产科,山东,日照 276800通信作者:孙良臣,Email:DDR1对结直肠癌侵袭和上皮细胞间质转化的影响任清霞1田斌2苏彤2孙良臣3摘要 目的探究盘状结构域受体 1(DDR1)对结直肠癌侵袭、上皮间质转化(EMT)的影响及机制。方法收集 2018 年 1 月至 2021 年 1 月在日照市人民医院进行外科手术肿瘤切除治疗的 60 例结直肠
2、癌癌组织及其癌旁组织。免疫组化检测结直肠癌组织和癌旁组织中 DDR1 蛋白表达水平。体外培养人结肠上皮细胞和结直肠癌细胞,Western blot 检测 DDR1蛋白表达水平。随后结直肠癌上皮细胞分为转染 DDR1 阴性干扰片段组(DDR1NC)、转染 DDR1 干扰片段组(DDR1siRNA)、过表达 DDR1 无关片段组(OVENC)和过表达 DDR1 组(OVEDDR1),Western blot 检测 DDR1、IL6、pSTAT3 和 EMT 相关蛋白表达变化。Trasnswell 检测结直肠癌细胞侵袭情况。结果与癌旁组织相比,结直肠癌组织 DDR1蛋白阳性表达率明显增加,差异有统计
3、学意义(c2=20.979,P0.05)。与人结肠上皮细胞相比,结直肠癌细胞DDR1蛋白表达明显增加差异有统计学意义(t=2.970、8.398、4.977、5.253,P0.05)。与 DDR1NC 组相比,DDR1siRNA 组细胞 DDR1、IL6、pSTAT3 蛋白表达降低,差异有统计学意义(t=3.533、4.021、3.864,P0.05),结直肠癌细胞侵袭能力降低,差异有统计学意义(t=6.695,P0.05)、EMT 进程被抑制。与 OVENC组相比,OVEDDR1 组细胞 DDR1、IL6、pSTAT3 蛋白表达升高,差异有统计学意义(t=4.752、6.759、4.896,
4、P0.05),结直肠癌细胞侵袭能力增加,差异有统计学意义(t=4.181,P0.05),促进 EMT 进程。结论DDR1在结直肠癌细胞中表达升高,其能够通过调控IL6/STAT3信号促进结直肠癌细胞侵袭和EMT。关键词 结直肠癌;盘状结构域受体 1;侵袭;上皮间质转化;IL6/STAT3 信号Effect of DDR1 on invasion and epithelialmesenchymal transition of colorectal cancerREN Qingxia1,TIAN Bin2,SU Tong2,SUN Liangchen3(1.Department of Reprod
5、uctive Medicine,Rizhao Peoples Hospital,Rizhao,Shandong,China,276800;2.Department of Clinical Laboratory,Rizhao Peoples Hospital,Rizhao,Shandong,China,276800;3.Department of Obstetrics and Gynecology,Rizhao Maternal and Child Health Hospital,Rizhao,Shandong,China,276800)ABSTRACTObjectiveTo investiga
6、te the effect and mechanism of discoid domain receptor 1(DDR1)on invasive epithelialmesenchymal transition(EMT)in colorectal cancer.MethodsFrom January2018 to January 2021,60 cases of colorectal cancer and their paracancerous tissues underwent surgical tumorresection in Rizhao Peoples Hospital were
7、collected.Immunohistochemistry was used to detect the expressionlevel of DDR1 protein in colorectal cancer and adjacent tissues.Human colon epithelial cells and colorectal cancer cells were cultured in vitro,and the expression level of DDR1 protein was detected by Western blot.Colorectal cancer epit
8、helial cells were then divided into DDR1negative interfering fragment group(DDR1NC),DDR1 interfering fragment transfecting group(DDR1siRNA),DDR1overexpressing irrelevant fragment group(OVENC),and DDR1overexpressing group(OVEDDR1),Western blot was used to detectthe expression changes of DDR1,IL6,STAT
9、3 and EMTrelated proteins.The invasion of colorectal cancercells was detected by Trasnswell.ResultsCompared with adjacent tissues,the expression of DDR1 proteinin colorectal cancer tissues was significantly increased(P0.05).Compared with human colon epithelial cells,the expression of DDR1 protein in
10、 colorectal cancer cells was significantly increased(P0.05).Compared with 1182分子诊断与治疗杂志2023年7月第15卷第7期J Mol Diagn Ther,July 2023,Vol.15No.7DDR1NC group,the expression of DDR1,IL6 and pSTAT3 proteins in DDR1siRNA group decreased(P0.05),the invasive ability of colorectal cancer cells was decreased(P0.0
11、5),and the EMT process was inhibited.Compared with the OVENC group,the expression of DDR1,IL6 and pSTAT3 proteins were increased(P0.05),the invasive ability of colorectal cancer cells was increased(P0.05),and the EMT process was promoted in the OVEDDR1 group(P0.05).ConclusionThe expression of DDR1 i
12、s increased in colorectal cancer cells,and it can promote colorectal cancer cell invasion and EMT by regulating IL6/STAT3 signaling.KEY WORDSColorectal cancer;Discoid domain receptor 1;Invasion;Epithelialmesenchymaltransition;IL6/STAT3 signaling结直肠癌是临床上常见的恶性肿瘤,具有发病隐匿、预后差等特点,严重的威胁了患者的生命健康。2020年全球癌症发病
13、数据显示,我国癌症新发病例 457 万,其中结直肠癌位居第二。癌症病死例300 万,结直肠癌位居第五位1,但是有关其发病机制尚不清楚。盘状结构域受体 1(discoid domain receptor 1,DDR1)是受体酪氨酸蛋白激酶家族成员之一,参与了肿瘤细胞的生物学行为,包括增殖、凋亡、侵袭以及上皮间质转化(epithelialmesenchymaltransition,EMT)等23。新近研究发现 DDR1 蛋白表达水平与结直肠癌细胞的迁移密切相关,抑制DDR1 表达能够减弱结直肠癌细胞迁移能力4,表明DDR1可能是结直肠癌的新的潜在表达分子。EMT 是肿瘤细胞具有侵袭和转移的必要条件
14、之一,在结直肠癌组织和细胞上皮标志性蛋白E钙黏蛋白(Ecadherin)表达下调,间质样 N钙粘蛋白(Ncadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达上调5,提示 EMT 与结直肠癌进展密切相关。因此,通过调节结直肠癌细胞 EMT 对于改善疾病进展具有重要意义。IL6/STAT3 信号通路活化是肿瘤细胞发生间质转化和血管新生的重要因素6。新近研究发现抑制 IL6/STAT3 信号通路活化能够抑制结直肠癌细胞 EMT 进程7。但是有关 DDR1对结直肠癌细胞侵袭和 EMT 的影响是否与调控IL6/STAT3 信号通路尚不清楚。为此,本研究拟通过组织层面和细胞功能层面探究 DDR1 对结直肠
15、癌细胞侵袭和 EMT 的影响及机制,以期为结直肠癌治疗的潜在生物靶点提供依据。1材料与方法1.1材料1.1.1临床资料收集 2018 年 1 月至 2021 年 1 月在日照市人民医院行结直肠癌手术切除患者 60 例,且所有患者均经病理医生确诊。结直肠癌组织及癌旁组织于液氮内或福尔马林中保存。纳入标准:患者为首次发现、且术前未接受过放、化疗。排除标准:伴有肿瘤病灶转移,且存在其他恶性肿瘤患者。研究经院伦理委员会批准,患者均签署知情同意书。1.1.2细胞与主要试剂人 结 肠 上 皮 细 胞(FHC)和 结 直 肠 癌 细 胞(DLD1、SW480、SW620 和 HCT15)购自中科院上海细胞库
16、;免疫组化检测试剂盒(北京中杉金桥公司,货号;SP9001);DMEM 细胞培养基(美国Gibco 公司);胎牛血清(Fetal Bovine Serum。FBS)(美国 Gibco 公司);DDR1 抗体、Ecadherin 抗体、Ncadherin 抗 体、Vimentin 抗 体、IL6 抗 体、pSTAT3 抗 体(美 国 Cell Signaling Technology,货 号:3917、8242、80477、15101、12912、9145);Transwell 小室(美国 Corning 公司);Lipofectamine2000 转染试剂盒(广州锐博生物技术有限公司);BCA
17、 蛋白浓度测定试剂盒、ECL 发光液、actin小鼠单克隆抗体、山羊抗兔二抗、山羊抗小鼠二抗(上 海 碧 云 天 生 物 技 术 公 司,货 号:P0011、P0018FS、AF5001、A0409、A0413)。1.1.3仪器组织细胞研磨仪(北京博普特科技有限公司,型号:MiniBeadb);酶标仪(山东恒美科技公司,型号:HMSY96S);ChemiDoc XRS+成像系统(美国BioRad 公司);离心机(美国贝克曼库尔特,型号:Optima MAXTL);荧光显微镜(广州市明慧科技有限公司,型号:NIB620FL)。1.2方法1.2.1免疫组化检测 DDR1 蛋白表达依据免疫组化检测试
18、剂盒进行结直肠癌组织及癌旁组织中 DDR1 蛋白相对表达,DDR1 蛋白染色呈棕色颗粒。以细胞上皮和细胞质无着色或着色面积小于 10%定性为 DDR1 蛋白阴性表达;细胞上皮和细胞质着色大于等于 10%定性为DDR1 蛋白阳性表达。1183分子诊断与治疗杂志2023年7月第15卷第7期J Mol Diagn Ther,July 2023,Vol.15No.7DDR1bactinFHCDLD1SW480SW620CHT15135 kDa42 kDa1.51.00.50.0FHCDLD1SW480SW620CHT15aaaaThe expre ession of DDR1A AB B1.2.2细胞
19、培养、转染过表达人结肠上皮细胞和结直肠癌细胞采用含 10%的胎牛血清 DMEM 培养基,并放置于 37、5%CO2细胞培养箱内培养。当细胞生长融合度到达60%70%时,使用质粒 2000 转染试剂盒分别转染DDR1 无关片段(DDR1NC 组)、DDR1 干扰片段(DDR1siRNA 组),过 表 达 DDR1 无 关 片 段 组(OVENC)和过表达 DDR1 组(OVEDDR1),转染时间为 48 h,Western blot 检测转染效果。依据转染试剂盒说明书进行相关操作。1.2.3细胞侵袭实验Transwell 小室的滤膜采用 ECM gel 覆盖,小室加入 10%FBS 培养基 0.
20、5 mL,上室中加入适当的细胞悬液,200 L/每孔,2106/L,每组设置 3 个复孔。各组细胞常规培养 48 h,4%的多聚甲醛固定,结晶紫染色,400 倍显微镜下随机选取 5 个视野观察穿过膜细胞平均数。1.2.4Western blot 实验人结肠上皮细胞和结直肠癌细胞加入细胞裂解液后于冰上裂解;4,12 000 r/min(离心半径=6 cm),离心 10 min,吸取组织上清液;BCA 法测定蛋 白 质 浓 度;蛋 白 上 样;凝 胶 电 泳;湿 转 法 转膜;5%BSA 室 温 封 闭 2 h;分 别 加 DDR1 一 抗(11 000)、Ecadherin 一抗(1 500)、
21、Ncadherin一抗(1500)、Vimentin 一 抗(11 000)、IL6一 抗(1500)、pSTAT3 一抗(1 1 000)及 actin一抗(1 2 000),4 孵育过夜;加对应的山羊抗兔二抗或者山羊抗鼠二抗(1 5 000),室温孵育 12 h;加吐温 20 磷酸盐缓冲溶液洗涤 3 次,每次 5 min,加入显影液,显影并拍照。1.3统计学分析采用 SPSS 20.0 软件进行数据分析。计量资料以(x s)表示,两组间比较采用 t 检验。以 P0.05 差异有统计学意义。2结果2.1结直肠癌组织中 DDR1 蛋白表达免疫组化检测显示 DDR1 主要定位表达结直肠上皮细胞膜
22、和细胞质中,与癌旁组织相比,结直肠癌组织中 DDR1 蛋白阳性表达率为 75.0%(45/60),显著高于癌旁组织 DDR1 蛋白阳性表达率 33.3%(20/60),差异有统计学意义(c2=20.979,P0.01)。见图 1。2.2结直肠癌细胞中 DDR1 蛋白表达与人正常结肠上皮细胞相比,结直肠癌细胞中DDR1 蛋白表达水平均显著升高,差异有统计学意义(t=2.970、8.398、4.977、5.253,P0.05)。见图2。2.3细胞转染效果与 DDR1NC 组相比,DDR1siRNA 组细胞DDR1 蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(t=3.533,P0.05)。与 OVENC 组
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- DDR1 直肠癌 侵袭 上皮细胞 间质 转化 影响
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。