miR-375表达对脉络膜黑色素瘤细胞增殖和侵袭的影响.pdf
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1、实验论著 表达对脉络膜黑色素瘤细胞增殖和侵袭的影响刘松涛刘向玲蒋乐文引用:刘松涛刘向玲蒋乐文.表达对脉络膜黑色素瘤细 胞 增 殖 和 侵 袭 的 影 响.国 际 眼 科 杂 志 ():基金项目:河南省科技攻关计划联合项目(.)作者单位:()中国河南省焦作市焦作煤业(集团)有限责任公司中央医院眼科()中国河南省新乡市新乡医学院第三附属医院眼科作者简介:刘松涛男硕士副主任医师研究方向:眼底病通讯作者:刘松涛.收稿日期:修回日期:摘要目的:探讨 表达对脉络膜黑色素瘤 细胞增殖和侵袭的影响方法:培养 细胞分别转染 模拟物序列(模拟物组)、抑制物序列(抑制物组)、阴性对照序列(阴性对照组)和不做任何处理
2、(空白组)分别采用 实验、实验、细胞凋亡实验、实验检测细胞中、细胞增殖活性、细胞凋亡情况、细胞迁移和侵袭情况结果:相比于阴性对照组(.)和空白组(.)模拟物组细胞中 表达量(.)升高而抑制物组细胞中 表达量(.)降低(.)与空白组和阴性对照组比较模拟物组细胞、和 时 值均降低(.)而抑制物组细胞、和 时 值均升高(.)与空白组细胞凋亡率(.)和阴性对照组细胞凋亡率(.)比较模拟物组细胞凋亡率(.)升高(.)而抑制物组细胞凋亡率(.)降低(.)与空白组和阴性对照组比较模拟物组细胞迁移数和细胞侵袭数均降低(.)而抑制物组细胞迁移数和细胞侵袭数均升高(.)结论:上调 细胞中 表达可降低细胞增殖活性
3、加速细胞凋亡 抑制细 胞迁移和侵 袭 下调表达则发挥相反的作用表明 可能在脉胳膜黑色素瘤病程中发挥抑癌功能关键词:脉络膜黑色素瘤 细胞干扰细胞生物学行为:./.:(.)().:.().:().:()()().:(.)(.)(.)(.)(.).(.)(.).(.)(.)(.)(.)(.)(.).(.)(.).:.国际眼科杂志 年 月 第 卷第 期 :/.电话:电子信箱:.:.()():引言脉络膜黑色素瘤()是常见的眼内恶性肿瘤病因不明病情进展快早期便可出现转移有超过/的患者发生肝转移总体生存时间短、预后差 有研究指出恶性增殖和转移是影响 患者预后的关键性因素发生转移的患者在 内病死率在 以上 微
4、小()是长度约为 的非编码 可通过调控靶基因 转录或降解而广泛参与机体多项生理、病理过程近年来研究表明 与肿瘤细胞恶性增殖、侵袭等生物学行为关系密切 有研究指出 参与了宫颈癌 细胞增殖、侵袭和迁移 等指出 可抑制胶质母细胞瘤的增殖和侵袭 本研究观察了人脉络膜黑色素瘤 细胞中 表达对细胞生物学特性的影响以期为 机制研究及诊疗提供参考资料 材料和方法.材料 细胞购自上海斯信生物公司胎牛血清、培养液、青链霉素购自美国 公司总 提取试剂盒和 转染试剂购自美国 公司 和扩增试剂盒购自大连宝生物公司 和 购自上海生工生物公司 模拟物()、抑制物()及阴性对照序列购自上海吉玛公司 试剂盒购自上海索宝生物公司
5、/细胞凋亡试剂及流式细胞仪购自美国 公司 小室和基质胶购自美国 公司 实时荧光定量 仪购自美国 公司.方法.细胞培养用含 胎牛血清的 培养液在含 、条件下培养 细胞待细胞生长覆盖率在时传代 将对数生长期细胞根据处理方式不同分成:()模拟物组:用 转染试剂转染 模 拟 物 序 列:()抑制物组:转染 抑制物序列:()阴性对照组:转 染 阴 性 对 照 序 列:()空白组:不作任何处理 各组转染完毕继续培养.实验取各组处理培养细胞按照总 提取试剂盒操作提取总 用紫外分光光度计检测纯 度 合 格 标 准 为/.取 总 按 试剂盒说明逆转录为 用实时荧光定量 仪按扩增试剂盒操作扩增引物 引物序列:上游
6、:下 游:上 游:下游:反应条件:次循环 用 法计算细胞中 表达量.实验取各组对数生长细胞以每孔.个接种在 孔板每组设复孔 个分别于、和 时除培养液加入 液 室温孵育用酶标仪在 处测定各孔光密度值()重复实验 次取均值.细胞凋亡 实验取各组处理培养细胞用预冷磷酸盐缓冲液冲洗细胞离心、重悬调整细胞浓度在/取约 个细胞液加入到离心管内分别将 的 及 的 加入摇匀 避光孵育分别加入 的结合缓冲液 内上机检测细胞凋亡率重复实验 次取均值.实验()迁移能力:转染培养 后用无血清培养液制备浓度为 /的细胞悬液取 加入到 小室上室将含 胎牛血清的培养液 加入到下室室温培养 取出小室并将小室内微孔膜上散落 细
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