PICU重症肺炎患儿纤维支气管镜肺泡灌洗液中PI3K、MMP-9表达及其临床意义.pdf
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1、实用医学杂志 2023年第39卷第15期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.15PICU重症肺炎患儿纤维支气管镜肺泡灌洗液中PI3K、MMP-9表达及其临床意义姜家利 陈婷 童文佳 丁洁 徐卫华安徽省儿童医院儿科(合肥 230001)【摘要】目的探讨儿科重症监护病房(PICU)重症肺炎患儿纤维支气管镜肺泡灌洗液中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达及其临床意义。方法选取2021年1月到2022年6月医院PICU收治的103例行纤维支气管镜肺泡灌洗术的重症肺炎患儿,采用实时荧光定量聚合酶链反应测定P
2、I3K表达情况,采用酶联免疫吸附法测定肺泡灌洗液中MMP-9表达情况。患儿入院后随访21 d统计其预后情况。Logistic回归分析影响PICU重症肺炎患儿预后的因素,采用Pearson相关性分析泡灌洗液中PI3K、MMP-9表达水平与PICU重症肺炎患儿儿童危重病例评分(PCIS)、儿童器官功能障碍2(PELOD-2)评分的相关性,采用受试者工作曲线(ROC)分析肺泡灌洗液中PI3K、MMP-9表达水平预测PICU重症肺炎患儿预后的价值。结果103例PICU重症肺炎患儿中,预后不良29例,预后良好74例。Logistic多因素回归分析结果显示:合并休克(OR=4.104,95%CI:1.68
3、9 9.974)、PELOD-2 评分(OR=4.764,95%CI:1.960 11.577)、PCIS 评分(OR=5.068,95%CI:2.085 12.318)、PI3K(OR=3.924,95%CI:1.614 9.536)、MMP-9(OR=3.873,95%CI:1.594 9.412)是影响PICU重症肺炎患儿预后的因素(P 0.05)。Pearson相关性分析显示:肺泡灌洗液中PI3K、MMP-9表达水平与患儿PCIS评分均呈负相关(r=-0.598,P=0.000;r=-0.537,P=0.000),肺泡灌洗液中 PI3K、MMP-9 表达水平与患儿 PELOD-2 评分
4、均呈正相关(r=0.546,P=0.000;r=0.571,P=0.000)。ROC曲线结果显示,PI3K、MMP-9及二者联合预测PICU重症肺炎患儿预后的灵敏度分别为75.86%(95%CI:56.08%88.98%)、72.41%(95%CI:52.51%86.55%)、82.76%(95%CI:63.51%93.47%),特异度分别为 75.68%(95%CI:64.07%84.58%)、79.73%(95%CI:68.47%87.85%)、89.19%(95%CI:79.28%94.88%),AUC 分别为0.762(95%CI:0.666 0.859)、0.767(95%CI:0.
5、670 0.873)、0.909(95%CI:0.848 0.971)。结论纤维支气管镜肺泡灌洗液中 PI3K、MMP-9 表达与 PICU 重症肺炎患儿预后有关,二者联合预测患儿预后效能良好,将其作为预测PICU重症肺炎患儿预后的敏感指标具有一定临床价值。【关键词】儿科重症监护病房;儿童重症肺炎;纤维支气管镜肺泡灌洗;磷脂酰肌醇-3-激酶;基质金属蛋白酶-9;预后【中图分类号】R725.6Expression and clinical significance of PI3K and MMP9 in bronchoscopic alveolar lavage fluid of childre
6、n with severe pneumonia in PICU JIANG Jiali,CHEN Ting,TONG Wenjia,DING Jie,XU Weihua.Department of Pediatrics,Anhui Childrens Hospital,Hefei 230001,ChinaCorresponding author:XU Weihua Email: 【Abstract】Objective To investigate the expression and clinical significance of phosphatidylinoinosidine3kinas
7、e(PI3K)and matrix metalloproteinase 9(MMP9)in bronchoscopic alveolar lavage fluid of children with severe pneumonia in pediatric intensive care unit(PICU).Methods A total of 103 children with severe pneumonia admitted to PICU of the hospital from January 2021 to June 2022 were enrolled.All patients
8、underwent fiberbronchoscopic alveolar lavage.Realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction was used to determine the expression of PI3K,and enzymelinked immunosorption was used to determine the expression of MMP9 in alveolar lavage fluid.The patients were followed up for 21 days after
9、 admission to evaluate the prognosis.Logistic regression analysis was used to analyze the factors affecting the prognosis.Pearson correlation was used to analyze the correlation between the expression levels of PI3K and MMP9 in the bubble lavage solution and the child Critical Case Score 临 床 研 究doi:
10、10.3969/j.issn.1006-5725.2023.15.014基金项目:安徽省自然科学基金面上项目(编号:1808085MH230)通信作者:徐卫华 E-mail:1939实用医学杂志 2023年第39卷第15期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.15(PCIS)and child Organ Dysfunction 2(PELOD2)Scores.The values of PI3K and MMP9 expression levels in alveolar lavage fluid to predict the p
11、rognosis were analyzed by receiver operating curve(ROC).Results Among the 103 children,29 cases had poor prognosis vs 74 cases had good prognosis.Logistic multivariate regression analysis showed that combined shock(OR=4.104,95%CI:1.689 9.974),PELOD2 score(OR=4.764,95%CI:1.960 11.577),PCIS score(OR=5
12、.068,95%CI:2.085 12.318),PI3K(OR=3.924,95%CI:1.614 9.536)and MMP9(OR=3.873,95%CI:1.594 9.412)were the prognostic factors of PICU children with severe pneumonia(P 0.05).Pearson correlation analysis showed that the expression levels of PI3K and MMP9 in alveolar lavage fluid were negatively correlated
13、with PCIS scores(r=-0.598,P=0.000;r=-0.537,P=0.000),PI3K and MMP9 expression levels in alveolar lavage fluid were positively correlated with PELOD2 scores(r=0.546,P=0.000;r=0.571,P=0.000).ROC curve results showed that the sensitivity of PI3K,MMP9 and their combination to predict the prognosis of PIC
14、U children with severe pneumonia was 75.86%(95%CI:56.08%88.98%),72.41%(95%CI:52.51%86.55%)and 82.76%(95%CI:63.51%93.47%),the specificity was 75.68%(95%CI:64.07%84.58%),79.73%(95%CI:68.47%87.85%),89.19%(95%CI:79.28%94.88%),and the AUC was 0.762(95%CI:0.666 0.859),0.767(95%CI:0.670 0.873),0.909(95%CI:
15、0.848 0.971).Conclusion The expression of PI3K and MMP9 in bronchoscopic alveolar lavage fluid was related to the prognosis of children with severe pneumonia in PICU,and the combination in predicting the prognosis was effective,so it has certain clinical value to use them as a sensitive indicator to
16、 predict the prognosis of children with severe pneumonia in PICU.【Key words】pediatric intensive care unit;childrens severe pneumonia;fibrous bronchoscope alveolar lavage;phosphatidylinositol3kinase;matrix metalloproteinase 9;prognosis儿 科 重 症 监 护 病 房(pediatric intensive care unit,PICU)重症肺炎具有发病率高、病变进展
17、快的特点12。重症肺炎不仅可进展为肺不张、坏死性肺炎等严重疾病,还可诱发肺外并发症,造成多组织器官功能障碍3-4。纤维支气管镜肺泡灌洗术是临床治疗 PICU 重症肺炎患儿常用的方法,可清除患儿肺部痰液,阻止肺内分泌物堆积,有效控制肺部感染,但不同 PICU 重症肺炎患儿治疗疗效具有明显差异5。早期评估 PICU 重症肺炎患儿纤维支气管镜肺泡灌洗术后治疗转归情况,可指导临床早期及时调整医疗方案,改善患儿预后。目前国内外研究6-7指出,磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B信号通路是调节细胞生长、增殖、运动、代谢和存活的核心信号通路
18、之一,参与肺部感染炎性反应过程,与肺炎发生、病情进展有关的炎症级联反应关系密切,抑制该信号通路途径可促进自噬反应。基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)是含锌内肽酶家族成员之一,可降解细胞外基质蛋白,损坏呼吸系统结构,在炎性反应造成的呼吸系统结构改变中具有重要作用8。笔者推测 PICU 重症肺炎患儿纤维支气管镜肺泡灌洗液中 PI3K、MMP-9 表达与患儿病情、预后有关,但目前尚缺乏其关系验证的有关报道。明确 PICU 重症肺炎患儿纤维支气管镜肺泡灌洗液中 PI3K、MMP-9 表达与预后的关系,可能为临床治疗重症肺炎提供更多新的靶点方向。1资料
19、与方法1.1一般资料选取2021年1月到2022年6月医院PICU收治的103例重症肺炎患儿为研究对象,其中男 53 例,女 50 例,年龄 6 个月至 6 岁,平均(4.19 0.53)岁。本研究经医院伦理委员会审批(编号:EYLL-2019-013)。纳入标准:(1)符合 中国急诊重症肺炎临床实践专家共识9中重症肺炎诊断标准,即符合至少1项主要标准:需机械通气,体液复苏后仍需血管活性药物;或满足至少3 项次要标准:发热,呼吸频率 50 次/min,动脉血氧分压/吸入氧浓度 3 d;(3)入院前未接受相关治疗者;(4)患儿监护人签署研究知情同意书。排除标准:(1)入住PICU 24 h内死亡
20、者;(2)长期使用糖皮质激素、免疫抑制剂、免疫增强剂等药物者;(3)入院治疗前已行机械通气、气管切开者;(4)伴先天性发育异常、先天性心脏病等疾病者;(5)伴肺结核、支气管肺炎、肺纤维化、间质性肺部疾病、呼吸衰竭者;(6)伴免疫系统疾病者;(7)无法配合完成本研究者;(8)家属放弃治疗者。1.2方法1.2.1治疗方案所有患儿入院后参照 中国急诊重症肺炎临床实践专家共识9,依据个体情况给予抗感染(根据病原菌测定结果给予万古霉素、1940实用医学杂志 2023年第39卷第15期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.15美罗培南抗菌治疗)
21、、机械通气、补液支持治疗、血管活性药物维持循环、营养支持、纤维支气管镜肺泡灌洗术等对症治疗。1.2.2纤维支气管镜肺泡灌洗术所有研究对象均经纤维支气管镜肺泡灌洗(采用0.9%氯化钠溶液,灌洗量1 mL/kg),术前常规禁食、禁饮,鼻咽部局部麻醉采用1%利多卡因,静脉镇静使用咪达唑仑,监测血压等生命体征,仰卧位,通过鼻腔单侧置入纤维支气管镜,观察并确定病变区域,送检气管、支气管与鼻咽位置分泌物,调整负压多次灌洗氯化钠溶液,灌洗结束后,在感染病变支气管内注入510 mL敏感抗生素(生理盐水稀释),多次灌洗后吸出灌洗液,术后禁食2 h。1.2.3纤维支气管镜肺泡灌洗液中PI3K、MMP9测定术后离心
22、分离肺泡灌洗液(转速3 500 r/min,离心时间15 min,离心半径10 cm),采用酶联免疫吸附法测定肺泡灌洗液中 MMP-9 水平,试剂盒购自武汉博士德生物技术有限公司。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定PI3K表达情况,Trizol裂解液提取总RNA,逆转录试剂盒(德国Qiagen公司)逆转录成cDNA,以cDNA为模板进行qRT-PCR,反应体系:cDNA 1 L、正反向引物各0.5 L、PCR缓冲液10 L、蒸馏水8 L,95 预变性3 min,95 变性10 s,58 退火30 s,70 延伸5 min,共35个循环。内参用GAPDH(正向:5-ACGGCTG
23、CCTGGTCTGGTCCGCCG-3,反向:5-GCTGGCTGGCGGCGTGCCGGGC-3),2-Ct法计算PI3K(正向:5-AGCCGGTCCCGGGTCGGGTCTGCGG-3,反向:5-GTTGCCTGGGCGTCGTGTCCGCC-3)mRNA相对表达量。1.2.4收集资料收集所有患儿基本资料及纤维支气管镜肺泡灌洗术后的指标,包括性别、年龄、身高、体质量、喂养方式、体温、是否休克、是否伴并发症,入住重症监护室48 h内的儿童危重病例评分(pediatric critical illness score,PCIS)10、儿童器官功能障碍2(pediatric logistic
24、organ dysfunction-2,PELOD-2)评分11,纤维支气管镜肺泡灌洗术后心率、呼吸频率、平均动脉压、氧合指数、血小板(platelets,PLT)计数、血红蛋白、纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)、血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、白细胞(white blood cell,WBC)计数、机械通气时间、PICU停留时间及肺泡灌洗液中 PI3K、MMP-9 水平、肺泡灌洗治疗药物(万古霉素、美罗培南)。1.2.5患儿预后情况评价方法患儿入院后随访
25、21 d,参照 中国急诊重症肺炎临床实践专家共识9评价预后情况,将患儿治疗后发热、呼吸困难等体征基本消失或明显好转,胸部X线显示肺部病灶基本吸收,生存良好记为预后良好,否则记为预后不良。1.3统计学方法数据处理采用 SPSS 18.0 统计软件,计量资料以均数标准差表示,比较采用t检验;计数资料以构成比或率(%)表示,比较做2检验;相关分析用Pearson法;绘制ROC曲线;影响因素的分析采用logistic 回归分析模型。P 0.05);预后不良组的合并休克占比、伴并发症占比、PELOD-2评分、机械通气时间、PI3K mRNA 相对表达量、MMP-9水平均高于预后良好组(P 0.05),预
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