LncRNA SLC16A1-AS1靶向调控miR-182对乳腺癌BT549细胞增殖能力的影响.pdf
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1、网络出版时间:网络出版地址:论著 靶向调控 对乳腺癌 细胞增殖能力的影响蒋冰,马琳,刘骞摘要:目的探讨 对 的靶向调控作用及对乳腺癌 细胞增殖能力的影响。方法使用 工具分析 数据库中 在三阴型乳腺癌(,)中的差异性表达,应用 数据库进行生存分析。利用 和 数据库预测 的潜在靶标 。用 检测 在 组织及细胞系(、及 )中的表达。利用双荧光素酶活性测定及 免疫沉淀实验验证 与 的结合力。用 及集落形成实验检测不同处理组 细胞增殖能力的变化。结果生物信息学分析结果显示,组织中 的表达水平显著低于正常组织(),与预后良好相关(),与 之间存在结合位点。在 例 组织中的表达水平显著低于瘤旁组织(,),在
2、 细胞系中的表达水平亦显著低于正常乳腺上皮细胞系()。在 细胞中过表达 可显著降低 载体的荧光酶素活性,免疫沉淀实验显示,同时富集 及 ()。与对照组相比,过表达 显著降低 细胞的增殖活性并减少集落形成数量,共表达 与 可恢复 细胞的增殖能力()。结论 在 中低表达,且通过靶向调控 在体外抑制 细胞的增殖能力,轴有望成为 治疗的潜在靶点。关键词:乳腺肿瘤;三阴型乳腺癌;中图分类号:文献标志码:文章编号:():接受日期:作者单位:辽宁省肿瘤医院病理科,沈阳 作者简介:蒋冰,女,博士,副主任医师。:乳腺癌是全球女性常见的恶性肿瘤 ,位居癌症相关死亡原因的第二位 。随着乳腺癌筛查项目的普及和新型联合
3、抗癌疗法的进展,发现其发病率和病死率已呈显著下降趋势 。然而,中国等发展中国家的乳腺癌筛查率仍较低,其预后较差 。乳腺癌是一组异质性较强的肿瘤,不同分子分型的乳腺癌具有不同的发病机制及预后,对应的辅助及新辅助治疗方案也不同 。三阴型乳腺癌(,)因 、均阴性 ,不能从内分泌治疗及 靶向治疗中获益 。近年,文献报道许多分子参与了 的发生、发展,明确其分子特征及发挥作用的机制,将有助于 的诊断及治疗 。研究发现,能够调节肿瘤相关基因的表达并参与肿瘤发生、发展的生物学过程,包括增殖、侵袭、细胞周期进程、凋亡、分化及免疫反应等 。最近一项研究表明,在非小细胞肺癌中表达下调,可作为预后良好的预测因子 。目
4、前,有关 的报道非常有限,国内尚未见其在 中 的 研 究。本 文 旨 在 探 讨 对 细胞增殖能力的影响及可能的靶向调控因子,为 的治疗提供理论参考。材料与方法 在线数据收集及生物信息学分析使用 (:)数据库分析 数据,预测 在 中的差异性表达。(:)数据库分析 与 预后的关系,纳入总生存期患者 例。使用 和 数据库预测 的潜在靶标 。使用 (:)预 测 可能形成的互补碱基对。组织学标本收集我院存档的 组织学标本 例(配对的肿瘤及瘤旁新鲜组织),保存于临床与实验病理学杂志 ;()冰箱,用于检测 表达。细胞培养 细胞系 、和 正 常 乳 腺 上 皮 细 胞 系 ,均购自美国 公司。细胞专用培养基
5、、含 的 培养基及含 的 培养基,均购自美国 公司。常规细胞在 、湿度及 的培养箱中培养,通常在培养皿内细胞密度约 时收集用于后续实验。细胞转染以 载体为骨架构建 质粒(公司);合成 阴性对照物及 (公司);应用 进行转染。具体操作步骤严格按试剂盒说明书进行。分组:组(转染 阴性对照物),组(转染 空白载体),组(细胞未转染),挽救实验阴性对照组(共转染 阴性对照物及 空白载体)。转染后 收集细胞,检测转染效率,进行后续实验。提取及 使用 (美国 公司)提取总 ;应用 (德国 公司)行 ,检测 的表达,以 作为内部对照。使用 (美国 公司)行 ,检测 的表达,以 作为内部对照。具体操作步骤严格
6、按试剂盒说明书进行。通过 法计算相对 丰度,引物序列详见表 。反转录体系:,上游引物 ,下游引物 ,及 。反应条件:,合计 个循环。表 引物序列基因名称上游引物()下游引物()双荧光素酶活性实验构建荧光素酶报告基因野生型质粒 及突变型质粒 (美国 公司)。用 (美国 公司)将上述荧光素酶报告基因质粒、共转染至 细胞系中,进行荧光素酶活性测定(美国 公司)。免疫沉淀(,)实验使用 (美国 公司)验证 和 的结合力。用于 测定的抗体包括抗 和对照 ,共沉淀的 用于 合成,并通过 进行评估。检测使用胰蛋白酶消化细胞,收集并进行细胞计数。将细胞密度调整至每毫升 个细胞,在 孔细胞培养板中每孔加入培养基
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