94份玉米中6类真菌毒素检测及污染情况分析.pdf
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1、 ,N o 检测分析 收稿日期:;修回日期:作者简介:栾杰(),女,主管技师,主要从事卫生理化检测工作.通讯作者:林海潮(),男,工程师,主要从事食品检测工作.d o i:/j i s s n 份玉米中类真菌毒素检测及污染情况分析栾杰,陈姗姗,林海潮,里南,刘红兵(云南省疾病预防控制中心,云南 昆明 ;陕西省产品质量监督检验研究院,陕西 西安 ;青岛普瑞邦生物工程有限公司,山东 青岛 )摘要:建立了玉米的一步法提取类真菌毒素同时检测的分析方法,共分析了 份玉米中类真菌毒素的污染情况及地域分布情况,为监测饲料质量提供技术指导.称取的样品添加类真菌毒素同位素内标,以 乙腈水和 甲醇水作为提取试剂,
2、以mm o l/L乙酸铵 甲酸水溶液和甲醇/乙腈和水为流动相梯度洗脱,采用液相色谱串联质谱进行检测.份玉米中类真菌毒素的检出率为,单种毒素检出率最高的是伏马毒素B和B,高达,呕吐毒素和赭曲霉毒素A检出率最低,均未检出.伏马毒素B和B、黄曲霉毒素B、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素的最高残留量分别是 m g/k g、mg/k g、m g/k g和 m g/k g.地域分布上具有分布范围广,污染较严重的特点.建立的类真菌毒素检测方法操作简单、结果准确,结果分析对玉米中真菌毒素污染检测和防控具有重要意义.关键词:真菌毒素;液相色谱串联质谱;污染情况;真菌毒素同位素内标中图分类号:S ;文献标志码:A文章编号
3、()D e t e c t i o na n dp o l l u t i o na n a l y s i so f m y c o t o x i n s i n m a i z e s a m p l e sL UANJ i e,CHE NS h a n s h a n,L I N H a i c h a o,L IN a n,L I U H o n g b i n g(Y u n n a nC e n t e r f o rD i s e a s eC o n t r o l a n dP r e v e n t i o n,K u n m i n g ,C h i n a;S h a
4、 a n x i I n s t i t u t eo fP r o d u c tQ u a l i t yS u p e r v i s i o na n dI n s p e c t i o n,X i a n ,C h i n a;Q i n g d a oP r e b a n gB i o l o g i c a lE n g i n e e r i n gC o L T D Q i n g d a o ,C h i n a)A B S T R A C T:Ao n e s t e pm e t h o d f o r e x t r a c t i o na n dd e t e
5、 c t i o no f t y p e so fm y c o t o x i n s f r o mc o r nw a s e s t a b l i s h e d T h e c o n t a m i n a t i o na n dg e o g r a p h i c a l d i s t r i b u t i o no f t y p e so fm y c o t o x i n s i n s a m p l e so f c o r nw e r ea n a l y z e d,w h i c hp r o v i d e dt e c h n i c a l
6、g u i d a n c e f o rm o n i t o r i n gf e e dq u a l i t y S i xk i n d so fm y c o t o x i ni s o t o p e sw e r ea d d e dt ot h es a m p l e s,a c e t o n i t r i l ew a t e ra n d m e t h a n o lw a t e rw e r eu s e da se x t r a c t i o nr e a g e n t s,mm o l/La mm o n i u ma c e t a t e f
7、o r m i ca c i da q u e o u ss o l u t i o na n dm e t h a n o l/a c e t o n i t r i l ea n dw a t e rw e r eu s e da sm o b i l ep h a s eg r a d i e n te l u t i o n,a n dl i q u i dc h r o m a t o g r a p h y t a n d e m m a s ss p e c t r o m e t r yw a su s e df o rd e t e c t i o n T h ed e t
8、e c t i o nr a t eo f m y c o t o x i n s i n c o r ns a m p l e sw a s,t h eh i g h e s ts i n g l et o x i nd e t e c t i o nr a t ew a s f u m o n a t o x i nBa n dB,u pt o,v o m i t o x i na n do c h r a t o x i nAw e r e t h e l o w e s t,a n dn o n ew e r ed e t e c t e d T h eh i g h e s t r
9、e s i d u e l e v e l so f f u m o n i t o x i nBa n dB,a f l a t o x i nB,z e a r a l e n o n ea n dv o m i t o x i nw e r e m g/k g,mg/k g,m g/k ga n d m g/k g,r e s p e c t i v e l y T h eg e o g r a p h i c a l d i s t r i b u t i o nh a s t h e c h a r a c t e r i s t i c so fw i d ed i s t r i
10、 b u t i o na n ds e r i o u sp o l l u t i o n T h ee s t a b l i s h e dm e t h o d s f o r t h ed e t e c t i o no f s i xm y c o t o x i n s a r e s i m p l e a n da c c u r a t e,a n d t h e a n a l y s i so f t h e r e s u l t s i so f g r e a t s i g n i f i c a n c e f o r t h ed e t e c t i
11、 o na n dc o n t r o l o fm y c o t o x i np o l l u t i o n i nm a i z e K E YWO R D S:m y c o t o x i n;L i q u i d c h r o m a t o g r a p h y t a n d e mm a s s s p e c t r o m e t r y;p o l l u t i o n s i t u a t i o n;m y c o t o x i n i s o t o p ei n t e r n a l s t a n d a r d真菌毒素属于真菌的代谢产物
12、,几乎可以污染所有的农作物,会损害动物体的肝脏、肾脏及皮肤组织等,进而通过食物链的形式影响到人体的健康.已知的真菌毒素多达 种以上,目前多个国家均建立了饲料中真菌毒素的限量要求 ,我国已于 年推出国家强制性标准G B 饲料卫生标准,并于 年实施,其对黄曲霉毒素B、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A、伏马毒素B和B、T 毒素等做出明确的检测方法规定和限量要求.本试验采用 份玉米为样本,对这类 栾杰等:份玉米中类真菌毒素检测及污染情况分析/年第期真菌毒素进行检测方法开发和污染情况分析.为多毒素的快速检测提供技术支持的同时,也为饲料中真菌毒素污染的监测和防控提供帮助.本试验采用液相色谱串联质谱,通
13、过加入同位素内标进行校正的手段,开发类真菌毒素的检测方法,并对 份玉米样品进行类真菌 毒素的 检 测 及 污 染 情 况分析.材料 仪器T S QQ u a n t i s液相色谱串联质谱、K S D E超声波提取仪和T G L M高速冷冻离心机.试剂真菌毒素标准品:黄曲霉毒素B(货号:S T D )、呕吐毒素(货号:S T D )、玉米赤霉烯酮(货号:S T D )、赭曲霉毒素A(货号:S T D )、伏 马 毒 素B和B(货 号:S T D )和T 毒素(货号:S T D ).真菌毒素同位素内标:黄曲霉毒素B同位素内标(货号:S T D U)、呕吐毒素同位素内标(货号:S T D U)、玉
14、米赤霉烯酮同位素内标(货号:S T D U)、赭曲霉毒素A同位素内标(货号:S T D U)、伏马毒素B同位素内标(货号:S T D U)、伏马毒素B同位素内标(货号:S T D U)和T 毒素同位素内标(货号:S T D U).样品 份玉米地域分布(样品来源于全国近 个省份及地区)见表.份玉米种类涉及青农 、郑单 、万盛 、登海W 、洛玉、中选 等.表 份玉米的分布区域区域省份份数华东地区山东、江苏、安徽、浙江、福建、上海 华南地区广东、广西、海南 华中地区湖南、湖北、河南、江西 华北地区北京、天津、河北、山西、内蒙古 西南地区四川、云南、西藏、重庆 西北地区宁夏、新疆、青海、陕西、甘肃 东
15、北地区黑龙江、吉林、辽宁 方法 色谱及质谱条件色谱柱:H y p e r s i lG O L DC(mm).流动相:mm o l/L乙酸铵 甲酸水溶液(溶液A)和甲醇梯度洗脱伏马毒素B和B、黄曲霉毒素B、赭曲霉毒素A和T 毒素/乙腈水梯度洗脱呕吐毒素和玉米赤霉烯酮(见表、表).采用E S I离子源,分别用正离子模式扫描和负离子模式扫描,多反应监测模式(MRM)采集数据,类真菌毒素及其对应同位素内标的质谱参数见表.表梯度表时间/m i n流速/m lm i n溶液A/甲醇/表梯度表时间/m i n流速/m lm i n水/乙腈/表类真菌毒素及其对应同位素内标的质谱参数毒素名称母离子(m/z)子
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