TGFBR2、TGF-β1及CTGF在盆腔器官脱垂患者子宫韧带组织中的表达及意义.pdf
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1、基金项目:山西省“四个一批”科技兴医创新计划项目()作者简介:王翮,女,生,在读硕士,:收稿日期:、及 在盆腔器官脱垂患者子宫韧带组织中的表达及意义王翮,平毅(山西医科大学第二医院妇产科,太原 ;通讯作者,:)摘要:目的研究转化生长因子 受体 (,)、转化生长因子 (,)及结缔组织生长因子(,)在盆底器官脱垂(,)患者子宫韧带组织中的表达及意义。方法选取山西医科大学第二医院妇产科 年 月至 年 月收治的 例 患者子宫主韧带及骶韧带组织为 组,另选取 例因子宫肌瘤同期在该院行腹腔镜下全子宫切除术患者的主韧带及骶韧带组织为对照组。染色观察子宫主、骶韧带胶原纤维及成纤维细胞状态,并使用 染色进一步观
2、察胶原纤维形态,免疫蛋白印迹法()检测 、型胶原蛋白()及型胶原蛋白()的蛋白表达水平。另选取 例 患者和 例子宫肌瘤患者骶韧带进行全基因转录组测序,从转录组测序结果中筛选出参与胶原代谢且显著低表达的 基因,并对 基因可能影响的 及 基因从蛋白表达及 转录水平进行分析;采用 相关分析对 与 和 的 相对表达水平进行相关性分析。结果 组及对照组患者的年龄、孕产次、体质量指数比较,差异无统计学意义()。苏木精 伊红染色法(,)染色显示 组韧带组织胶原细胞数量较对照组明显减少且排列紊乱,染色显示 组韧带组织纤维结缔组织断裂呈片状,排列紊乱且结构疏松,数量较对照组明显减少。基因转录组测序结果显示 患者
3、骶韧带组织与子宫肌瘤患者骶韧带组织基因转录组水平相比有 个基因显著低表达,其中 基因显著低表达,差异有统计学意义(调整 )。检测显示:组韧带组织中 、及 的蛋白相对表达量均较对照组降低()。实时荧光定量聚合酶链式反应(,)结果显示:组韧带组织中 、基因 相对表达量均较对照组降低(),与 呈正相关(,),且 与 也呈正相关(,)。结论盆底器官脱垂患者盆底韧带中 、在 转录水平及蛋白表达水平上均降低,可能通过调控 基因通路影响纤维代谢参与 发病。关键词:盆腔器官脱垂;纤维代谢中图分类号:文献标志码:文章编号:():,(,;,:):(),(),()(),()(),(),()(),()(,)(,),:
4、;盆腔器官脱垂(,)指因盆底肌肉和筋膜组织薄弱或者损伤而造成的盆腔器官下移及功能异常的女性疾病,高发于老年女性,生育政策的改革使得育龄期女性患病风险增加,将对女性患者的生理、生活、经济造成严重负担。环境因素无法完全解释 的发病原因,然而,其分子发病机制尚不明确,目前临床上仅对其症状进行治疗,而无法从病因上予以根治,且存在并发症多以及复发率高等问题。因此,从分子发病机制方面进行研究,可能为 的有效治疗提供新策略。良好的胶原纤维网络是维持盆底支持组织的生物学基础,所有能够影响盆底支持组织胶原代谢的基因都可能导致 的发生 。我们对 患者骶韧带进行全基因转录组测序发现转化生长因子 受体(,)基因在骶韧
5、带组织中呈显著低表达,而 基因编码的载体蛋白是转化生长因子 (,)的特异受体蛋白,及结缔组织生长因子(,)共同参与胶原代谢的过程,另外 被认为是 的下游基因 。可能与 及 共同参与韧带组织胶原代谢过程,既往研究中 和 参与胶原代谢过程,但测序结果中 和 基因在 组与正常组比较,表达并无显著差异,可能与转录组测序中韧带组织样本量少有关,因此,本研究通过免疫组化蛋白印迹()、实时荧光定量聚合酶链式反应(,)技术对盆底器官脱垂患者子宫韧带组织中 、及 从蛋白表达及 转录水平进行检测,旨在进一步验证并探讨 、在 发生中的作用。资料与方法 一般资料选取 年 月至 年 月本院收治的 例 患者(分期 期)及
6、 例子宫肌瘤患者主韧带及骶韧带标本,分为 组和对照组。韧带组织标本由主治医师及以上职称的医师在多孔腹腔镜下全子宫切除术术中切取,标本大小约 。所有患者无恶性肿瘤、无盆底手术史、无盆腔炎性疾病、无糖尿病、哮喘或心血管疾病、无激素相关疾病等相关病史,手术前 个月内未使用全身激素,且术后病理结果提示无雌激素相关疾病。两组患者的年龄、孕产次数、体质量指数()等指标比较差异均无统计学意义(,见表 )。相应组织标本的获取均通过山西医科大学第二医院伦理委员会批准:()第()号,获得患者知情同意并签字。研究方法 主要试剂 一抗(兔)、一抗(兔)、一抗(兔)、一抗(鼠)、一抗(兔)和 一抗购自武汉三鹰生物技术有
7、限公司,蛋白浓度测定试剂盒、彩虹 广谱蛋白 购自北京索莱宝科技有限公司,兔二抗及鼠二抗购自北京全式金生物有限公司,、引物购自上海生工生物工程有限公司,、购自新贝生物科技有限公司。山西医科大学学报,年 月,第 卷 第 期表 两组患者的一般资料比较 分组年龄(岁)孕次产次 ()组 对照组 取材纳入 组与对照组的患者手术方式均为腹腔镜下全子宫切除术。术中同一位主治及以上级别的医师对韧带组织进行取材,主韧带取材部位:主韧带与宫颈连接处以外 ,组织大小约 ,骶韧带取材部位:骶韧带与宫颈连接处以外 ,组织大小约 ,放入已标记的无菌 管中,立即放置液氮瓶中,后转至 冰箱保存备用。染色及 染色观察韧带组织纤维
8、细胞及胶原纤维状态将术中取得的骶韧带与主韧带组织标记后固定,进行脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、贴片及烤片。染色:将切片进行脱蜡、水化,再使用苏木精染色 ,然后进行分化、返蓝,伊红染色后进行脱水、透明,最后进行封片,显微镜下观察韧带组织纤维细胞状态。染色:将切片进行脱蜡,水化,然后使用 苏木精染液染色 ,分化、返蓝步骤同 染色,将返蓝后的切片使用丽春红酸性复红浸染 后使用弱酸清洗,然后进行磷钼酸分化、苯胺蓝染色,最后切片脱水、透明和封片,显微镜下观察胶原纤维状态。基因转录组测序挑选目的基因将用于基因测序的 例 患者骶韧带组织及 例非 患者骶韧带组织(取材标准满足本研究纳入标准,获伦理委员会批准及
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