不同植物精油及精油成分体外抗氧化性能评定.pdf
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1、饲 料 添 加 剂2023年第44卷第17期 总第686期不同植物精油及精油成分体外抗氧化性能评定 苏翔宇1 何剑波1 郭升岚1 史海涛1 郭春华1 吕继蓉2 余 淼2 李建涛3*(1.西南民族大学畜牧兽医学院,四川成都 610041;2.四川省动物采食调控工程技术研究中心,四川成都 611130;3.沈阳农业大学动物科学与医学学院,辽宁沈阳 110866)摘 要:为比较天然植物精油与精油活性成分单体的抗氧化性能,采用清除1,1-二苯基-2-苦基肼(1,1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl,DPPH)自由基的方法,以抗氧化剂2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(抗氧化剂,BHT)为
2、对照,测定了牛至油、丁香油、薰衣草油等5种植物精油和丁香酚、香芹酚、肉桂醛等20种精油成分的体外抗氧化能力,从中筛选出DPPH自由基清除率在90%以上植物精油和精油成分,以及清除率低于90%,但生产中常用的柠檬醛、肉桂醛、柠檬烯,测定其IC50值。结果表明:在浓度为 200 mg/mL时,牛至油、丁香油、薰衣草油、肉桂油、缬草油、丁香酚、百里香酚、香芹酚、松油醇、香草醛和BHT对DPPH自由基的清除率在90%以上;柠檬醛、肉桂醛和柠檬烯的清除率分别是84.79%、45.55%、36.21%。当浓度降为20 mg/mL时,牛至油、丁香油、薰衣草油、丁香酚、百里香酚、香芹酚、香草醛和BHT对自由基
3、的清除率仍在90%以上,但肉桂油、缬草油和松油醇的清除率有所降低,分别为48.90%、38.51%、43.01%。根据IC50值,几种精油和精油成分的抗氧化性能强弱依次为丁香酚(0.008 4 mg/mL)丁香油(0.012 7 mg/mL)薰衣草油(0.358 0 mg/mL)BHT(0.641 5 mg/mL)牛至油(0.684 4 mg/mL)百里香酚(0.970 9 mg/mL)香草醛(1.148 3 mg/mL)香芹酚(1.478 6 mg/mL)柠檬醛(48.799 2 mg/mL)肉桂醛(124.365 9 mg/mL)柠檬烯(213.184 2 mg/mL)。综上,丁香酚、丁香
4、油、薰衣草油、牛至油、百里香酚、香草醛以及香芹酚均具有较高的体外抗氧化能力,其中丁香酚、丁香油、薰衣草油的抗氧化能力分别是BHT的76.37、50.51、1.79倍。关键词:精油成分;牛至油;百里香酚;抗氧化活性;DPPH自由基doi:10.13302/ki.fi.2023.17.002中图分类号:S816.7 文献标识码:A 文章编号:1001-991X(2023)17-0008-07In Vitro Evaluation of The Antioxidant Activity of Essential OilsSU Xiangyu1 HE Jianbo1 GUO Shenglan1 SHI
5、 Haitao1 GUO Chunhua1 LYU Jirong2YU Miao2 LI Jiantao3*(1.College of Animal Veterinary Sciences,Southwest Minzu University,Sichuan Chengdu 610041,China;2.Sichuan Province Engineering&Technology Center of Animal Feed Intake Control,Sichuan Chengdu 611130,China;3.College of Animal Science and Veterinar
6、y Medicine,ShenyangAgricultural University,Liaoning Shenyang 110866,China)Abstract:In order to compare the antioxidant properties of essential oils(EOs)and essential oil(EO)component,the antioxidant abilities in vitro of five EOs(oregano oil,clove oil,lavender oil,etc.)and 20 EO components(eugenol,c
7、arvol,and cinnamaldehyde,etc)were measured by 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)free radical scavenging assay,with antioxidant 2,6-ditert-butyl-4-methylphenol(BHT)as the control.The IC50 values of EOs and EO components with DPPH free radical scavenging rate of more than 90%,as well as citral,cinnam
8、aldehyde and limonene with scavenging rate of less than 90%were determined.The results showed that:at a concentration of 200 mg/mL,the DPPH free radicals scavenging rates of oregano oil,clove oil,lavender oil,cinnamon oil,valerian oil,eugenol,thymol,carvol,terpineol,vanillin,and BHT on 作者简介:苏翔宇,硕士,研
9、究方向为动物营养与饲料科学。*通讯作者:李建涛,博士,副教授,硕士生导师。收稿日期:2023-05-31基金项目:四川省重点研发项目“植物精油在畜禽无抗养殖中应用的关键技术研发及示范”2021YFN012208SILIAO GONGYE2023年第44卷第17期 总第686期随着对精油研究的不断深入,有关天然植物精油1-3和精油成分4-6抗氧化活性的研究层出不穷。精油由醛类、萜烯类、酯类、酸类、醇类、酚类、酮类等具有挥发性的化学分子组成7,具有很好的抗氧化效果。有研究报道,百里香精油的化学成分多达85种,酚类物质占大多数8。戴冉等9报道,牛至油具有高效的抑菌和抗氧化活性。1,1-二苯基-2-苦
10、基肼(1,1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl,DPPH)的结构特殊,是一种以氮为中心的有机自由基,稳定性能良好,具有孤电子,能够接受电子或者氢离子,在517 nm波长处具有较强吸收。当体系中存在抗氧化剂时,会发生电子转移或者氢转移,孤电子被捕捉配对,其醇溶液从深紫色逐渐变为浅黄色10,吸收峰减少或者消失,并且吸收峰处的吸光度值降低,从而评价样品的抗氧化能力11-12。在目前报道的文献中,大多是关于植物精油的抗氧化性能研究,较少针对精油成分抗氧化性能进行研究,而对植物精油与精油中主要成分抗氧化性能的对比研究鲜见报道。本研究以牛至油、丁香油、薰衣草油等5种植物精油和丁香酚、香芹
11、酚、肉桂醛等20种精油成分作为研究对象,这20种精油成分包含3种酚类物质、1种烯类物质、4种醇类物质、2种醚类物质、7种醛类物质和3种酯类物质,采用清除DPPH自由基的方法测定抗氧化性能;然后再从中筛选出清除DPPH 自由基能力在 90%以上的植物精油或精油成分,以及生产中常用的 3 种精油成分(柠檬醛、肉桂醛、柠檬烯),以2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)作为阳性对照物,测定其IC50值(即抗氧化剂对DPPH自由基清除率达50%的质量浓度,IC50值越低表示抗氧化能力越强)13。探究植物精油与精油成分的抗氧化性能,为其作为替抗的绿色添加剂在动物饲料中的开发应用提供基础数据,这对于促进畜
12、禽健康养殖具有现实意义。1 材料与方法1.1 试验材料DPPH,购自上海某公司;5种植物精油和20种精油成分及抗氧化剂BHT,由成都某有限公司馈赠(见表1)。1.2 试验设备与仪器赛默飞全波长酶标仪(Multiskan sky)、岛津电子分析天平(ATY224)、96孔TC细胞培养板、移液器。1.3 试验方法1.3.1 试剂的配制与保存精油乙醇溶液的配制:称取精油20 g,使用无水乙醇作为溶剂,溶解定容到100 mL容量瓶中,定容后作为母液待用,4 冷藏保存,使用时逐级稀释。DPPH溶液的配制(需现用现配):准确称取DPPH试剂5 mg,使用无水乙醇溶解,并定容于100 mL容量瓶中,低温下避
13、光保存,DPPH 反应溶液的浓度为12.6810-3 mmol/mL。1.3.2 精油清除DPPH自由基能力的测定 取0.5 mL供试精油乙醇溶液及BHT乙醇溶液于离心管中,均加入新配制的 DPPH溶液 0.5 mL,均匀混合避光反应 27 min后,常温下 3 000 r/min 离心3 min;取200 L反应溶液加入96孔板中,以酶标仪检测 517 nm处吸光度值(A2),吸光度值越低表示对DPPH自由基的清除能力越强。DPPH free radicals were above 90%,while the free radical scavenging rates of citral,c
14、innamaldehyde,and limonene were 84.79%,45.55%and 36.21%,respectively.When the concentration was reduced to 20 mg/mL,the scavenging rates of oregano oil,clove oil,lavender oil,eugenol,thymol,carvol,vanillin,and BHT on free radicals were still above 90%,but that of cinnamon oil,valerian oil and terpen
15、ol were reduced to 48.90%,38.51%and 43.01%,respectively.Based on the IC50,the antioxidant properties of several EOs and EO components were as follows:eugenol(0.008 4 mg/mL)clove oil(0.012 7 mg/mL)lavender oil(0.358 0 mg/mL)BHT(0.641 5 mg/mL)oregano oil(0.684 4 mg/mL)thymol(0.970 9 mg/mL)vanillin(1.1
16、48 3 mg/mL)carvavol(1.478 6 mg/mL)citral(48.799 2 mg/mL)cinnamaldehyde(124.365 9 mg/mL)limonene(213.184 2 mg/mL).In conclusion,eugenol,clove oil,lavender oil,oregano oil,thymol,vanillin and carvall have high antioxidant capacity in vitro,among which the antioxidant capacity of eugenol,clove oil and
17、lavender oil are 76.37,50.51 and 1.79 times of BHT respectively.Key words:essential oil components;oregano oil;thymol;antioxidant activity;1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)free radicals09饲 料 添 加 剂2023年第44卷第17期 总第686期 取0.5 mL供试精油乙醇溶液及BHT乙醇溶液,与等体积的无水乙醇均匀混合避光反应27 min后,常温下3 000 r/min离心3 min;取200 L反应溶液加入
18、96孔板中,以酶标仪检测517 nm处吸光度值(A1)。取 0.5 mL 无水乙醇,与等体积的 DPPH 溶液均匀混合避光反应 27 min 后,常温下 3 000 r/min离心 3 min;取200 L反应溶液加入96孔板,以酶标仪检测517 nm处吸光度值(A0)。以上试验重复3次,求得清除率的平均值14-15。DPPH自由基清除率(%)=1-(A2-A1)/A0100式中:A00.5 mL 无水乙醇+0.5 mL DPPH 乙醇溶液的吸光度值;A10.5 mL 样品+0.5 mL 无水乙醇的吸光度值,以消除样品本身颜色的影响16;A20.5 mL 样品+0.5 mL DPPH 乙醇溶液
19、的吸光值。1.4 数据统计与分析所有数据采用Excel软件进行整理统计,并计算出样品对 DPPH 自由基清除率的平均值,然后采用Excel软件中的函数公式计算清除率的标准偏差,结果用“平均值标准差”表示。2 结果与分析2.1 精油清除DPPH自由基能力的初步测定结果对5种植物精油和20种精油成分进行初步筛选,测定其清除DPPH自由基的能力,结果如表2所示。由表2可知,当浓度为200 mg/mL时,5种植物精油(牛至油、丁香油、薰衣草油、肉桂油和缬草油)、3种酚类精油成分(丁香酚、百里香酚、香芹酚),以及松油醇、香草醛和BHT的清除率均在90%以上,具有较强的抗氧化作用,而其余物质抗氧化性能较弱
20、。因此这5种植物精油和5种精油成分值得进一步探究,确定为复测对象。2.2 精油清除DPPH自由基能力的复测结果将清除率在90%以上的5种植物精油(牛至油、丁香油、薰衣草油、肉桂油、缬草油)和5种精油成分(丁香酚、百里香酚、香芹酚、松油醇、香草醛)以及BHT进一步稀释后进行复测。取200 mg/mL的精油乙醇10 mL溶液至100 mL容量瓶,最终得到20 mg/mL的精油乙醇溶液,测定其对DPPH自由基的清除能力,结果如表3所示。由表3可知,当供试植物精油及精油成分浓度为20 mg/mL时,3种植物精油(牛至油、丁香油、薰衣草项目植物精油酚类醛类醇类醚类酯类烯类标准品BHT序号12345678
21、91011121314151617181920212223242526名称牛至油(oregano oil)丁香油(clove oil)薰衣草油(lavander oil)肉桂油(oleum cinnamomi)缬草油(valerian oil)丁香酚(eugenol)百里香酚(thymol)香芹酚(carvacrol)香兰素(香草醛,vanillin)甜橙醛(-sinensal)柠檬醛(citral)兔耳草醛(cyclamen aldehyde)肉桂醛(cinnamic aldehyde)苯甲醛(benzaldehyde)桃醛(-unsecalactone)松油醇(terpineol)叶醇(l
22、eaf alcohol)芳樟醇(linalool)桉树醇(1,8-epoxy-p-menthane)茴香脑(丙烯基茴香醚,anethole)草蒿脑(对烯苯基苯甲醚,4-allylanisole)水杨酸甲酯(methyl salicylate)水杨酸异戊酯(isoamyl salicylate)乙酸芳樟酯(linalyl acetate)柠檬烯(cinene)2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(2,6-tert-butyl-4-methylphenol)分子式C10H12O2C10H14OC10H14OC8H8O3C15H22OC10H16OC13H18OC9H8OC7H6OC11H20O2C10H
23、18OC6H12OC10H18OC10H18OC10H12OC10H12OC8H8O3C12H16O3C12H20O2C10H16C15H24O含量(%)989898989998989898989898989898989898989898表1 5种植物精油和20种精油成分的基本信息10SILIAO GONGYE2023年第44卷第17期 总第686期油)和4种精油成分(丁香酚、百里香酚、香芹酚、香草醛)以及 BHT 对 DPPH 自由基的清除率仍达 90%以上,表现出较高的抗氧化性能,而肉桂油、缬草油、松油醇对 DPPH 自由基的清除能力分别为 48.90%、38.51%、43.01%。2.3
24、 3种植物精油和4种精油成分清除DPPH自由基的IC50值为便于比较,将清除率达到90%以上的3种植物精油和4种精油成分,以及表2中清除率较低但生产中常用的3种精油成分(柠檬醛、肉桂醛、柠檬烯)进行IC50值的测定,进一步研究其抗氧化能力。将浓度在20 mg/mL时,清除DPPH自由基能力在90%以上的 3 种植物精油(牛至油、丁香油、薰衣草油)和4种精油成分(丁香酚、百里香酚、香芹酚、香草醛),以及清除DPPH自由基能力低于90%,但在生产中常用的3种精油成分(柠檬醛、肉桂醛、柠檬烯),配制为不同质量浓度的溶液,进行IC50值的测定。以清除率作为y轴,精油质量浓度作为x轴绘制清除自由基的拟合
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