血清miR-599、s_M...对早期原发性肝癌的诊断价值_胡琳.pdf
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1、现代生物医学进展Progress in Modern Biomedicine Vol.23NO.1JAN.2023doi:10.13241/ki.pmb.2023.01.020血清 miR-599、sMR 联合 Hsp90 检测对早期原发性肝癌的诊断价值*胡琳1王钰2舒畅2喻晶晶2陶然2杨蕙源2窦磊2(1 武汉市金银潭医院 湖北 武汉 430023;2 华中科技大学同济医学院同济医院 湖北 武汉 430030)摘要 目的:分析 miR-599、sMR 联合 Hsp90 检测对早期原发性肝癌的诊断价值。方法:收集 2020 年 6 月至 2022 年 6 月于我院收治的原发性肝癌患者 76 例为
2、 PHC 组,慢性乙型病毒性肝炎患者 82 例为 CHB 组,选择同期于我院查体的健康人群 45 例为HC 组。采用荧光定量 PCR 检测 miR-599 表达量,采用 ELISA 法定量测定可溶性甘露糖受体(sMR)、血热休克蛋白 90(Hsp90)。比较分析三组研究对象血清 miR-599、sMR 及 Hsp90 表达水平的差异,分析肝癌患者血清 miR-599、sMR 及 Hsp90与肿瘤临床病理相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清 miR-599、sMR 联合 Hsp90 对原发性肝癌及早期原发性肝癌的诊断效能。结果:PHC 组和 CHB 组患者 miR-599 表达量明显
3、低于对照组,sMR 和 Hsp90 水平显著高于对照,PHC 组和 CHB组各项指标差异具有统计学意义(P0.05)。PHC 组患者血清 miR-599 和 sMR 表达量与 Child-Pugh 分级、门静脉癌栓、淋巴结转移及 CNLC 分期具有相关性(P0.05);PHC 组患者血 Hsp90 表达量与 Child-Pugh 分级、肿瘤个数、肿瘤直径、门静脉癌栓、淋巴结转移及 CNLC 分期存在一定关系(P0.05)。以非肝癌组(HC+CH 患者)为对照组,PHC 患者为病例组,进行 ROC 曲线分析,miR-599、sMR 及 Hsp90 单独及联合检测诊断 PHC 的 AUC 分别为
4、0.728、0.782、0.765 和 0.867。以非肝癌组(HC+CH 患者)为对照组,PHC 患者 BCLC 分期 A 级为病例组,进行 ROC 曲线分析,miR-599、sMR 及 Hsp90 单独及联合检测诊断早期原发性肝癌的 AUC 为 0.728、0.782、0.706 及 0.856。结论:血清 miR-599、sMR 及 Hsp90 在原发性肝癌中差异表达,血清 miR-599、sMR 联合Hsp90 检测诊断原发性肝癌甚至早期原发性肝癌具有较高的价值关键词:miR-599;sMR;Hsp90;原发性肝癌;诊断价值中图分类号:R735.7文献标识码:A文章编号:1673-62
5、73(2023)01-103-05Diagnostic Value of Serum mir-599,SMR and Hsp90 in Early PrimaryLiver Cancer*HU Lin1,WANG Yu2,SHU Chang2,YU Jing-jing2,TAO Ran2,YANG Hui-yuan2,DOU Lei2(1 Wuhan Jinyintan Hospital,Wuhan,Hubei,430023,China;2 Tongji Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University ofScience and Tech
6、nology,Wuhan,Hubei,430030,China)ABSTRACT Objective:To analyze the diagnostic value of mir-599,SMR combined with Hsp90 in early primary liver cancer.Methods:76 patients with PHC admitted to our hospital from June 2020 to June 2022 were collected as PHC group,82 patients withchronic hepatitis B as CHB
7、 group,and 45 healthy people were selected as HC group.The expression of mir-599 was detected by fluores-cence quantitative PCR,the level of SMR was detected by ELISA,and the Hsp90 in serum was detected by chemiluminescence.Theexpression levels of serum mir-599,SMR and Hsp90 in the three groups were
8、 compared and analyzed.The correlation between serummir-599,SMR and Hsp90 in patients with liver cancer and tumor Clinicopathology was analyzed.The diagnostic efficacy of serummir-599,SMR and Hsp90 combined with Hsp90 in primary liver cancer and early primary liver cancer was evaluated by ROC curve.
9、Results:The expression of mir-599 in PHC group and CHB group was significantly lower than that in the control group,and the levels ofSMR and Hsp90 were significantly higher than that in the control group.There was significant difference in various indicators betweenPHC group and CHB group(P0.05).The
10、 expression of mir-599 and SMR in PHC group was correlated with child Pugh grade,portalvein tumor thrombus,lymph node metastasis and CNLC stage(P0.05);In PHC group,serum Hsp90 expression was correlated withchild Pugh grade,tumor number,tumor diameter,portal vein tumor thrombus,lymph node metastasis
11、and CNLC stage(P0.05).Takingnon liver cancer group(hc+ch patients)as the control group and PHC patients as the case group,ROC curve analysis was carried out.TheAUC of mir-599,SMR and Hsp90 were 0.728,0.782,0.765 and 0.867 respectively.Taking non liver cancer group(hc+ch patients)asthe control group
12、and PHC patients with BCLC stage a as the case group,ROC curve analysis was carried out.The AUC of mir-599,SMR and Hsp90 alone and in combination for the diagnosis of early primary liver cancer was 0.728,0.782,0.706 and 0.856.Conclu-*基金项目:国家自然科学基金项目(81600503);湖北陈孝平科技发展基金项目(CXPJJH11900002-011);同济医院院内
13、课题项目(2020HGRY002)作者简介:胡琳(1979-),女,本科,主管技师,研究方向:临床检验方向,电话:027-82200328,E-mail:通讯作者:杨蕙源(1991-),女,硕士研究生,主治医师,研究方向:肝脏外科,E-mail:;窦磊(1986-),博士研究生,副主任医师,研究方向:肝脏外科(收稿日期:2022-05-23 接受日期:2022-06-19)103现代生物医学进展Progress in Modern Biomedicine Vol.23NO.1JAN.2023sion:Serum mir-599,SMR and Hsp90 are differentially
14、expressed in primary liver cancer.The detection of serum mir-599,SMR com-bined with Hsp90 is of high value in the diagnosis of primary liver cancer and even early primary liver cancer.Key words:miR-599;SMR;Hsp90;Primary liver cancer;Diagnostic valueChinese Library Classification(CLC):R735.7Document
15、code:AArticle ID:1673-6273(2023)01-103-05前言原发性肝癌(Primary liver cancer,PHC)是消化系统常见的恶性肿瘤,肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)最为常见,每年新发病例高达 60 万例1。由于乙型和丙型肝炎感染的高发率,HCC 在亚洲也变得尤为普遍。由于 HCC 起病隐匿,潜伏期长,患者确诊时多为中晚期,预后较差。目前 HCC 的治疗主要依靠手术切除、肝移植、局部消融、化疗栓塞和分子靶向治疗,但这些策略效果并不理想,死亡率仍然很高2。因此寻找早期诊断 HCC 的分子指标成为国内外医学界学者研究的重点
16、。成人血液中热休克蛋白 90(Heat shock protein 90,Hsp90)是人体细胞中关键细胞信号网络的重要分子伴侣和主要调节蛋白,其可做作为肝癌的癌胚抗原和诊断标志物3。miR-599 是一种调控基因表达的非编码小 RNA,研究发现,miR-599 在肝癌、胃癌、宫颈癌及膀胱癌等多种肿瘤中表达水平异常。其中miR-599 被证明在 HCC 细胞系和组织中的表达显着下调。同时,下调可能针对 MYC,从而影响调节增殖、迁移和侵袭4。可溶性甘露糖受体(Soluble mannose receptor,sMR)作为模式识别受体介导激活 M2 样巨噬细胞的吞噬和自噬作用,促使其转变为产生
17、M1 细胞因子的抗肿瘤 M1 样表型参与 HCC 的发生及发展5。可见 miR-599、sMR 均在肝细胞癌的发生发展中起重要作用,但血清 miR-599、sMR 单独或联合 Hsp90 诊断早期原发性肝癌的研究却鲜有报道。本实验以 2020 年 6 月至 2022 年 5 月于我院收治的早期原发性肝癌患者 69 例为观察对象,旨在分析血清 miR-599、sMR 联合 Hsp90 检测对早期原发性肝癌的诊断价值。1 资料与方法1.1 一般资料收集 2020 年 6 月至 2022 年 6 月于我院收治的 PHC 患者76 例为 PHC 组,纳入标准:所有患者经病理检查确诊为HCC,所有肝癌患
18、者均符合 原发性肝癌诊疗规范(2019 版)6标准;患者初次就诊,且既往无相关放化疗治疗;患者及家属知情并签署知情同意书。慢性乙型病毒性肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者 82 例为 CHB 组,慢性乙型肝炎患者诊断符合 慢性乙型肝炎防治指南(2015 年版)7标准。同期选择于我院查体的健康人群 45 例为 HC 组,门诊检查:无肝胆疾病;无心、肝、肾等重要器官存在严重功能障碍;无恶性肿瘤及自身免疫性疾病;知情并签署知情同意书。研究对象排除标准:研究对象心、肝、肾等重要器官存在严重功能紊乱;患者合并血液系统疾病或自身免疫系统疾病;严重精神性疾病;患者拒绝本次实验或因其他
19、原因终止本次实验。PHC 组共 76 例,男 40 例,女 36 例,平均年龄为(52.366.79)岁,平均 BMI 值为(22.542.08)kg/m2。CHB 组共 82 例,男 46 例,女 36 例,平均年龄为(51.867.29)岁,平均 BMI 值为(21.872.27)kg/m2。HC 组共 45 例,男 26 例,女 19 例,平均年龄为(51.767.57)岁,平均 BMI 值为(22.172.36)kg/m2。各组受检者在年龄性别及 BMI 值等方面差异无统计学意义(P0.05)。本实验经医院伦理会同意。见表 1。表 1 各组患者一般资料分析(xs)Table 1 Ana
20、lysis of general data of patients in each group(xs)GroupsnAge(year)Sex(case)BMI(Kg/m2)MaleFemalePHC7652.366.79403622.542.08CHB8251.867.29463621.872.27HC4551.767.57261922.172.36F/x20.3520.2570.152P0.7270.0850.8871.2 方法(1)PHC 组患者术前空腹采集肘静脉血 2 mL,CHB 组和HC 组空腹采集肘静脉血 2 mL,于室温静置 20 min,以 3000r/min 的转速离心 10
21、 min,小心分离血清,放入-70环境冷藏备用。(2)miR-599 表达量检测:采 用 荧 光 定 量 PCR 检 测miR-599 表达量:反应体系:4.5 L 的 ddH2O,1.5 L 的逆转录缓冲液,1 L 的逆转录酶,0.2 L 的 dNTPs,3 L 的特异性引物,3 L 的总 RNA,反应条件:45 min 16,30 min 42,5 min90。生成 cDNA 为模板,进行定量 PCR 检测,反应体系 20 L,反应条件:10 min 95预变性,之后 40 个循环反应:10 s 95,45 s 60,15 s 72,检测 miR-599 表达量。(3)sMR、Hsp90
22、水平检测:运用检测试剂盒采用 ELISA法定量测定104现代生物医学进展Progress in Modern Biomedicine Vol.23NO.1JAN.20231.3 统计学方法本研究数据均采用 SPSS20.0 软件包进行统计学数据分析,计量资料比较采用(xs)表示,sMR 及 Hsp90 表达量呈偏态分布或方差不齐时,则用中位数法表示,组间比较采用 t检验;计数资料均采用百分比表示,组间比较采用 x2检验。采用 ROC 曲线分析 miR-599、sMR 及 Hsp90 对 PHC 及早期PHC 的诊断效能。统计所得结果以 P0.05 为有统计学意义。2 结果2.1 各组患者 mi
23、R-599、sMR 及 Hsp90 表达量比较PHC 组和 CHB 组患者 miR-599 表达量明显低于对照组,sMR 和 Hsp90 水平显著高于对照,PHC 组和 CHB 组各项指标差异具有统计学意义(P0.05)。见表 2。Note:compared with HC group,aP0.05;Compared with CHB group,bP0.05.表 2 各组患者 miR-599、sMR 及 Hsp90 表达量表达量比较(xs)Table 2 miR-599,sMR and Hsp90 of patients in each group Expression volume Exp
24、ression volume comparison(xs)GroupsnmiR-599sMR(pg/mL)Hsp90(ng/mL)PHC760.790.26ab176.48(125.48,265.54)ab206.37(8.65,586.64)abCHB820.870.21a76.24(46.37,112.69)a12.65(1.57,178.35)aHC451.010.0228.65(17.65,35.64)6.64(1.25,68.54)2.2 肝癌患者血清 miR-599、sMR 及 Hsp90 与肿瘤临床病理相关性PHC 组患者血清 miR-599 和 sMR 表达量与 Child-P
25、ugh分级、门静脉癌栓、淋巴结转移及 CNLC 分期具有相关性(P0.05);PHC 组患者血清 Hsp90 表达量与 Child-Pugh 分级、肿瘤个数、肿瘤直径、门静脉癌栓、淋巴结转移及 CNLC 分期存在一定关系(P0.05)。见表 3。表 3 肝癌患者血清 miR-599、sMR 联合 Hsp90 与肿瘤临床病理相关性Table 3 Serum miR-599,sMR and Hsp90 in patients with liver cancer Correlation with tumor clinicopathologyindexnmiR-599PsMR(pg/mL)PHsp90
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