西藏自治区首次发现螟黄赤眼蜂_钱谦.pdf
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1、39(1)241-244 中国生物防治学报 Chinese Journal of Biological Control 2023 年 2 月 收稿日期:2022-01-09 基金项目:国家自然科学基金(32102275,32172476);西藏自治区中央引导地方项目(XZ202001YD0014C);辽宁省教育厅科学研究经费项目(LR2019061,LJKZ0646);辽宁省自然科学基金(2020-BS-137)作者简介:钱谦,硕士研究生,E-mail:。*共同通信作者,周金成,博士,讲师,E-mail:;张欢欢,助理研究员,E-mail:;董辉,博士,教授,E-mail:。DOI:10.16
2、409/ki.2095-039x.2022.05.007 西藏自治区首次发现螟黄赤眼蜂 钱 谦1,赵 艳1,刘荣莉1,周金成1,2,相 栋3,张欢欢3*,张礼生2,董 辉1*(1.沈阳农业大学植物保护学院,沈阳 110866;2.中国农业科学院植物保护研究所,北京 100081;3.西藏自治区农牧科学院蔬菜科学研究所,拉萨 850032)摘要:为发掘西藏地区本土的赤眼蜂资源,本研究利用灭活米蛾卵卡在西藏林芝嘎玛地区的梨园采集到一个赤眼蜂种群。采用 ITS2 序列比对鉴定所采集的赤眼蜂种类,并测定该蜂的生物学指标。结果表明:西藏林芝嘎玛地区所诱集的赤眼蜂鉴定为螟黄赤眼蜂 Trichogramma
3、 chilonis Ishii,羽化率为 80%,雌性比为57.14%,耐饥饿时间为 1.08 d,后足径节长度为 157.6 m。本研究将为发掘西藏地区赤眼蜂资源提供参考,并为利用赤眼蜂在西藏自治区开展生物防治实践奠定基础。关 键 词:赤眼蜂;ITS2 序列;分子鉴定 中图分类号:S476.3 文献标识码:A 文章编号:1005-9261(2023)01-0241-04 The First Record of Trichogramma chilonis Ishii in Tibet Region QIAN Qian1*,ZHAO Yan1,LIU Rongli1,ZHOU Jincheng1
4、,2*,XIANG Dong3,ZHANG Huanhuan3*,ZHANG Lisheng2,DONG Hui1*(1.College of Plant Protection,Shenyang Agricultural University,Shenyang 110161,China;2.Institute of Plant Protection,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100081,China;3.Institute of Vegetable,Tibet Academy of Agriculture and Anim
5、al Husbandry Sciences,Lhasa 850032,China)Abstract:To investigate native species of Trichogramma in Tibet region,the present study collected populations of Trichogramma spp in the orchard locating in Gama district,Nyingchi city of Tibet region.The Trichogramma spp was identified as Trichogramma chilo
6、nis Ishii by the alignment of ITS2 sequence.The emergence rate of offspring was 80%.The female ratio was 57.14%.The duration of starvation tolerance was 1.08 day.The hind tibia length of female offspring was 157.6 m.The results are expected to provide reference for the investigation of native Tricho
7、gramma species in Tibet,and support the application of Trichogramma in the biological control program in Tibet.Key words:Trichogramma;ITS2;molecular identification 西藏自治区具有高寒干燥的气候特点,平均海拔 4000 m 以上,生态环境脆弱,被称为“世界上最后一方净土”1。化学农药的不合理使用,不仅造成环境污染及农药残留问题,还会使害虫产生抗药性,并破坏自然天敌的控制作用,导致西藏自治区农业生态系统失衡2。有鉴于此,开展生物防治等绿
8、色防控措施替代传统化学防治是西藏自治区农业有害生物防治的必由之路。赤眼蜂 Trichogramma spp.,属于膜翅目 Hymenoptera 赤眼蜂科 Trichogrammatidae,是一类广泛用于防治多种鳞翅目害虫的寄生性天敌3。我国记录有 219 种赤眼蜂科昆虫,但关于西藏自治区的赤眼蜂种类 242 中 国 生 物 防 治 学 报 第 39 卷 记录较少3,4。赤眼蜂种类的形态鉴定主要依据雄性外生殖器、触角等进行区分。由于赤眼蜂个体极小(成虫体长约0.5 mm),此法鉴别依赖于特定分类专家5。分子鉴定可提供更准确便利的方法6。李正西和沈佐锐6,7通过 ITS2 序列进行测序比对,对
9、松毛虫赤眼蜂 Trichogramma dendrolimi Matsumura、螟黄赤眼蜂Trichogramma chilonis Ishii 等赤眼蜂种类进行鉴定。Jeong 等8利用 ITS2 序列对赤眼蜂种类进行鉴定。分子鉴定已成为区分赤眼蜂种类的重要方法。本研究通过 ITS2 测序比对,对采集的西藏林芝嘎玛地区赤眼蜂进行鉴定,并测定其羽化率、雌性比例、耐饥饿时间和个体大小等生物学指标。研究结果将为发掘西藏自治区赤眼蜂资源提供参考,并为利用赤眼蜂于西藏自治区开展生物防治奠定基础。1 材料与方法 1.1 蜂种采集 赤眼蜂蜂种的采集时间为 2019 年 9 月,采集地点位于西藏自治区林芝
10、市巴宜区布久乡嘎玛村梨园(94.37 E,29.48 N)。将灭活米蛾卵卡悬挂在植物枝干上,共 100 张卵卡,3 日后将米蛾卵卡取回转移至指型管,置于恒温光照培养箱(25 1,RH 75%5%,光周期 16L:8D)(Panasonic,MLR-352H-PC,Japan)内。将羽化后的单头雌蜂引入指型管中,每日饲喂 10%蜂蜜水,以新鲜米蛾卵为替代寄主连代饲养,获得单雌种群。将母代蜂取出单头单管分装于 75%酒精中,20 保存备用。1.2 蜂种鉴定 1.2.1 形态鉴定 将西藏林芝嘎玛地区赤眼蜂标本置于体视显微镜(Nikon SMZ25,Japan)下拍照,参照庞雄飞等9以及胡红英等10的
11、方法进行形态鉴定。1.2.2 分子鉴定 采用 Chelex 法提取单头赤眼蜂的总 DNA11。使用 ITS2 序列的通用引物8,12(Forward:5-TGTGAACTGCAGGACACATG-3;Reverse:5-GTCTTGCCTGCTCTGCTCTGA-3)对样品的 ITS2 目标片段进行 PCR 扩增。扩增体系为 25 L:包含 1.0 L 模板 DNA,双向引物各 0.8 L,2EsTaqMasterMix酶 12.5 L,ddH2O 9.9 L。反应程序参照 Jeong 等8的研究。PCR 产物经 1.5%的琼脂糖凝胶电泳后,在UVItec 凝胶成像系统(UVItec,UK)下
12、观察结果。产物纯化后,送生工生物工程股份有限公司完成双向测序。采用 MEGA-X 软件对序列拼接。运用 NCBI GenBank 中的 BLAST 对目标序列进行对比12。下载GenBank 中同源性高的 ITS2 序列,使用邻接法(Bootstrap1000 replicates)构建系统进化树。1.3 赤眼蜂的生物学指标 将约 100 头初羽化雌蜂(连代饲养 10 代)接入含有过量米蛾卵的卵卡寄生 24 h 后除去雌蜂。待米蛾卵变黑后(即被赤眼蜂寄生),将单粒黑卵切下后分装于指形管,共切下 80 粒黑卵。将黑卵转移至恒温光照培养箱(25 1,RH 75%5%,光周期 16L:8D)(Pan
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