湘黄鸡鸡蛋中氟苯尼考的残留消除规律研究_贺宇文.pdf
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1、现代农业科技2023 年第 7 期动物科学湘黄鸡鸡蛋中氟苯尼考的残留消除规律研究贺宇文1隆雪明1刘曙光1谭美英1*李 裕1郑四清2黄 勇1李艳平1张 敏1王鹏超1(1湖南省兽药饲料监察所,湖南长沙 410006;2耒阳市畜牧水产事务中心,湖南耒阳 421800)摘要为了研究湘黄鸡鸡蛋中氟苯尼考的残留消除规律,本试验采用氟苯尼考的标准治疗剂量拌料给药饲喂产蛋高峰期的湘黄鸡,连续用药 5 d,从给药前 1 d 开始收集鸡蛋以备检测,连续收集 30 d,使用液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中氟苯尼考及其代谢产物氟苯尼考胺的含量。结果表明,在停药第 15 天时,湘黄鸡鸡蛋中氟苯尼考、氟苯尼考胺的残留量低于
2、现行农业农村部指定检测方法的检出限。关键词湘黄鸡;鸡蛋;氟苯尼考;氟苯尼考胺;消除规律中图分类号S831.4文献标识码A文章编号 1007-5739(2023)07-0172-03DOI:10.3969/j.issn.1007-5739.2023.07.047开放科学(资源服务)标识码(OSID):氟苯尼考(Florfenicol,又名氟甲砜霉素)为甲砜霉素的单氟衍生物,与氯霉素、甲砜霉素同属于酰胺醇类抗生素。氟苯尼考是动物专用的广谱抗菌药,通过作用于细菌 70S 核糖体的 50S 亚基,抑制肽酰基转移酶活性进而阻断核糖体上肽链合成。对革兰阳性菌、革兰阴性菌、支原体、衣原体、螺旋体、立克次体等
3、均有抑制效果,而且毒副作用比氯霉素小,广泛用于畜、禽、水产动物的疾病治疗。在鸡的养殖中,氟苯尼考最常用于治疗呼吸道感染。湘黄鸡(又名黄郞鸡)是优良的湖南省地方鸡种,属肉蛋兼用型,在湖南省内分布较广1。湘黄鸡有着与其他鸡种不同的特点:体型小,成年母鸡体重一般仅为 1.3 kg;体脂低;呈味氨基酸特别是谷氨酸含量高;运动能力强,多数是山野林地圈养2。湘黄鸡曾被国家外贸部评为“名贵项鸡”,在湖南省内和粤港澳市场享有很高声誉3。近年来,湖南省内抽检,有多例湘黄鸡鸡蛋检出氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺的情况。因此,通过试验了解湘黄鸡在使用标准治疗剂量的氟苯尼考时其鸡蛋中氟苯尼考的消除规律,可为监管部门分析
4、湘黄鸡使用氟苯尼考时可能带来的食品安全风险提供科学数据,也可为湘黄鸡养殖户提供参考,以规范用药和弃蛋期,保证进入市场的湘黄鸡鸡蛋产品质量。1材料与方法1.1供试材料1.1.1试验动物。供试产蛋期湘黄母鸡购自湖南省耒阳市某专业湘黄鸡养殖场。1.1.2仪器设备。超高效液相-串联质谱仪,型号:5500QTRAP(SCIEX 公司);离子源:ESI()。高速冷冻离心机(德国 Eppendorf 公司)。MV5 氮吹仪(54 位,美国 LabTech 公司)。1.1.3药品、标准品、试剂。动物试验用 2%氟苯尼考粉为市售商品,使用前用高效液相色谱法确认其含量为 2.05%。所使用的氟苯尼考标准品、氟苯尼
5、考胺标准品、氟苯尼考-D3 标准品、氟苯尼考胺-D3 标准品均为天津阿尔塔科技有限公司产品。乙酸乙酯(色谱纯)、正己烷(色谱纯)、乙腈(色谱纯)均为 Merck 公司产品。氨水(分析纯)、甲酸(分析纯)为国药集团产品。50%乙腈水溶液:去离子水和乙腈等体积混合。0.5%甲酸乙腈水溶液:取 2.5 mL 甲酸,用 50%乙腈水溶液溶解并定容至 500 mL。饱和正己烷:取 500 mL正己烷,用 50%乙腈水溶液混合至饱和。1.2试验设计采用半开放的养殖场地,对外购的 90 只产蛋期湘黄母鸡进行全群圈养。采用自动喂料器、自动喂水器给料给水,使其在新鸡舍适应 1 个月以上。确定全群采食、产蛋率稳定
6、时开始试验。按照 中华人民共作者简介贺宇文(1964),男,湖南双峰人,副教授,从事畜禽水产养殖与质量安全研究工作。*通信作者收稿日期 2022-09-01172和国兽药典(2020 年版)中氟苯尼考治疗给药剂量添加到饲料中,即 50 mg/(kg BWd),用药周期为 5 d。从用药前 1 d 开始收集鸡蛋,连续收集 30 d。每天16:00 左右将当天收集的鸡蛋,随机选取 18 枚用于检测。因为用药当天的鸡蛋残留量个体差异大,所以对用药第 1 天的鸡蛋样品进行测定。1.3样品前处理方法1.3.1样品制备。每 3 枚鸡蛋去壳匀浆混匀制成 1 个样品,每天共 6 个样品,放入-80 冰箱冻存。
7、最后将全部样品取出,一并进行检测。1.3.2提取与净化。准确称取 5.0 g 匀质的鸡蛋样品置于 50 mL 离心管中,加入 10 L 氟苯尼考-D3、氟苯尼考胺-D3 内标溶液,15 mL 乙酸乙酯和 0.5 mL 氨水,涡旋提取 1 min,转速 8 000 r/min 离心 5 min,上清液转入另一个 50 mL 离心管。重复提取 1 次,合并上清液。取 6 mL 上清液放入 15 mL 离心管,50 氮吹至近干,用 1 mL 0.5%甲酸乙腈水溶液复溶,涡旋 30 s,加入 5 mL 饱和正己烷涡旋 1 min,转速 8 000 r/min 离心 1 min,弃去上层正己烷。重复操作
8、 3 次。取下清液过 0.22 m 滤膜,装入进样瓶中。将用药前 1 d 的样品作为阴性对照,添加氟苯尼考和氟苯尼考胺标准品制成阳性添加样品。阳性添加样品使用同样的提取与净化方法进行处理。1.4上机测定方法1.4.1色谱方法参数。采用美国 Waters ACQUITYUPLC C18色谱柱(2.1 mm100.0 mm,1.7 m),流动相为水溶液(A)-乙腈(B)。梯度洗脱程序:01.0 min,流动相 A 为 95%,B 为 5%;1.03.0 min,流动相 A 由95%降至 5%,保持 2 min;5.1 min 时,流动相 A 由 5%增至 95%,保持至 6.0 min。流速 0.
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