卵巢癌组织中TTF-1、C...及其与淋巴管生成关系的研究_张鑫.pdf
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1、20232023 年3 月第 54 卷第 3 期年3 月第 54 卷第 3 期191研究论著研究论著新医学 新医学 卵巢癌组织中 TTF-1、CyclinD1 的表达及其与淋巴管生成关系的研究张鑫 严倩文 王路祎【摘要】目的探讨甲状腺转录因子 1(TTF-1)和细胞周期蛋白 D1(CyclinD1)在卵巢癌组织中的表达情况,分析其与淋巴管生成的关系。方法收集 60 例卵巢癌组织样本和 20 例经病理检查证实的正常卵巢组织。制备组织切片进行 TTF-1、CyclinD1 和 D2-40 免疫组织化学(免疫组化)染色,基于半定量积分法评价 TTF-1、CyclinD1 染色结果。依据 Weidne
2、r 评价方法评估 D2-40 染色结果,计算淋巴管密度(LVD)。结果TTF-1 和 CyclinD1 的阳性表达率在卵巢癌组织中分别为 58%和 83%,均高于其在正常卵巢组织中的 5%和 10%(P 均 0.001)。病理分期 期、淋巴结转移阳性、腹膜转移阳性、T3T4 期、N1 期和 M1 期的卵巢癌组织中 TTF-1 及 CyclinD1 的阳性表达率较高(P均 0.05)。病理分期 期、淋巴结转移阳性、腹膜转移阳性的卵巢癌组织 LVD 较高(P 均 0.05)。卵巢癌组织中 TTF-1、CyclinD1阳性表达者的 LVD 均高于阴性表达者(P 均 0.05)。结论TTF-1 与 C
3、yclinD1 在卵巢癌组织中呈现高表达。卵巢癌病情较重、出现淋巴管生成和转移者的 TTF-1 和 CyclinD1 表达较高。TTF-1 和 CyclinD1 可作为卵巢癌干预的潜在新靶点。【关键词】卵巢癌;甲状腺转录因子 1;细胞周期蛋白 D1;淋巴管密度;淋巴管生成Expression levels of TTF-1 and CyclinD1 and their relationship with lymphangiogenesis in ovarian cancer Zhang Xin,Yan Qianwen,Wang Luyi.Department of Pathology,the
4、First People s Hospital of Foshan,Foshan 528000,ChinaCorresponding author,Zhang Xin,E-mail:【Abstract】Objective Toinvestigatetheexpressionlevelsofthyroidtranscriptionfactor-1(TTF-1)andCyclinD1inovariancancerandanalyzetheirrelationshipwithlymphangiogenesis.Methods Theovariancancertissuesampleswerecoll
5、ectedfrom60patientswithovariancancerandcorrespondingovariantissuesamplesfrom20patientspathologicallydiagnosedwithbenignovariantumorsandnormalovariantissuewerecollectedasthecontrolgroup.TissuesectionswerepreparedforimmunohistochemicalstainingofTTF-1,CyclinD1andD2-40.ThestainingresultsofTTF-1andCyclin
6、D1wereevaluatedbasedonsemi-quantitativeintegrationmethod.D2-40stainingresultswereassessedaccordingtoWeidnerevaluationmethod.Lymphaticvesseldensity(LVD)wascalculated.Results ThepositiveexpressionratesofTTF-1andCyclinD1were58%and83%intheovariancancertissues,whichwerehigherthan5%and10%inthenormalcancer
7、tissues(allP 0.001),respectively.ThepositiveexpressionratesofTTF-1andCyclinD1weresignificantlyincreasedintheovariancancertissueswithpathologicalstage-,lymphnodemetastasis,peritonealmetastasis,T3-T4stage,N1stageandM1stage(allP 0.05).TheLVDofovariancancertissueswithpathologicalstage-,lymphnodemetastas
8、isandperitonealmetastasiswassignificantlyincreased(allP 0.05).TheLVDofovariancancertissueswithpositiveexpressionofTTF-1andCyclinD1wassignificantlyhigherthanthatofovariancancertissueswithnegativeexpression(bothP 0.05).Conclusions TTF-1 andCyclinD1arehighlyexpressedinovariancancertissues.Patientswiths
9、evereovariancancer,lymphangiogenesisandmetastasishavehighexpressionofTTF-1andCyclinD1,whichmaybepotentialnewtargetsforovariancancerinterventions.【Key words】Ovariancancer;Thyroidtranscriptionfactor1;CyclinD1;Lymphaticvesseldensity;Lymphangiogenesis基金项目:佛山市卫生健康局医学科研课题(20210196)作者单位:528000 佛山,佛山市第一人民医院
10、病理科通信作者,张鑫,E-mail:DOI:10.3969/j.issn.0253-9802.2023.03.006卵巢癌是女性生殖系统的三大恶性肿瘤之一,流行病学数据显示我国每年新发卵巢癌患者约 5.2万例,因卵巢癌死亡的患者约 2.2 万例,是病死率最高的妇科恶性肿瘤11-22。由于肿瘤复发和转移以20232023 年3 月第 54 卷第 3 期年3 月第 54 卷第 3 期192新医学 新医学 及化学治疗(化疗)耐药等原因,卵巢癌的 5 年生存率仅约 30%,许多患者在就诊时已经出现了腹膜转移33。因此,探索有效的基因生物标志物以帮助早期发现肿瘤转移,对于提高治疗效果、改善卵巢癌患者预后
11、尤为重要。甲状腺转录因子 1(TTF-1)也称为 NKX 同源框-1(NKX2-1),位于人类染色体 14q13.3,是由 3 个外显子和 2 个内含子组成的、单基因编码的、含有一个同源结构域的转录因子44。细胞周期蛋白 D1(CyclinD1)基因定位于人染色体11q13,是细胞周期素家族中最主要的成员之一,对细胞周期起正向调控作用55。文献报道,TTF-1 在肺癌的发生、发展中发挥重要作用,CyclinD1则在肺癌、食管癌等恶性肿瘤中呈过表达,但关于这两个基因对卵巢癌影响的研究很有限,作用机制尚未阐明66-77。本研究拟通过分析卵巢癌组织中 TTF-1、CyclinD1 蛋白的表达及其与临
12、床分期、淋巴管密度(LVD)等指标之间的关联,探讨其与临床病理特征和淋巴管转移间的相关性,为早期诊断卵巢癌转移和开展治疗提供参考。材料与方法一、标本来源本研究的标本来自 2018 年 1 月至 2020 年 12月在本院就诊的 60 例卵巢癌患者,患者年龄为(48.79.5)岁。另收集 20 例经病理检查证实的正常卵巢组织作为对照,患者年龄为(46.89.1)岁。2 组标本来源患者的年龄比较差异无统计学意义(t=0.780,P=0.438)。本研究方案通过医院伦理委员会批准(批件号:L 2022第 18 号),患者均已签署知情同意书。二、纳入与排除标准卵巢癌患者纳入标准:年龄 18 岁;接受手
13、术治疗,病理结果证实为卵巢癌;手术前未经任何治疗;患者依从性佳,按期复查,随访资料完整。对照者纳入标准:年龄 18 岁;因卵巢占位、子宫肌瘤、功能性子宫出血接受卵巢切除治疗,病理结果证实为良性卵巢肿瘤或正常卵巢组织;患者依从性佳,按期复查,随访资料完整。排除标准:患有难以控制的糖尿病、肝肾功能不全、心血管疾病、脑血管疾病、血液系统疾病、自身免疫性疾病等全身性疾病;孕产妇或患有其他严重精神或心理疾病。三、主要试剂与材料鼠抗人 TTF-1、CyclinD1、D2-40 单克隆抗体均购自北京中杉科技有限公司,辣根过氧化物酶标记 IgG-HRP 购自北京福盛科技有限公司,Dako REALTM 免疫组
14、织化学(免疫组化)染色试剂盒购自基因科技(上海)有限公司,磷酸盐缓冲液(PBS)购自上海金桥生物科技有限公司。四、免疫组化染色组织标本经 10%甲醛溶液固定后,石蜡包埋,以5 m厚进行连续切片,制备成组织切片。将切片置于烘箱内烘烤 1 h 后,再经脱蜡及水化,0.3%H2O2孵育30 min,PBS冲洗5 min,共3次。加柠檬酸抗原修复液,加热 10 min 去除内源性过氧化物酶,自然冷却至室温。加入一抗(1100 TTF-1或1200 CyclinD1或1200 D2-40),4孵育过夜,PBS 冲洗 5 min,共 3 次,加入生物素标记的二抗,室温孵育 20 min,PBS 冲洗后 D
15、AB 显色,苏木素复染,中性树胶封片。五、染色结果评价由2名具有副主任医师或以上职称的病理科医师基于双盲原则对所有染色切片按半定量积分法进行评价:首先在 400 倍光镜下,随机选取 10 个视野分析阳性细胞百分比,视野内的阳性细胞百分比70%为3分,30%阳性细胞百分比70%为 2 分,5%阳性细胞百分比 30%为 1 分,阳性细胞百分比 5%为 0 分;然后评价染色强度,胞浆或核膜呈棕褐色为 3 分,呈棕黄色为 2 分,呈浅黄色为 1 分,仅细胞核呈蓝色为 0 分。把阳性细胞百分比评分与阳性细胞染色强度评分相加获得总分,总分在 03 分为阴性,46 分为阳性。六、LVD 测定由 2 名具有副
16、主任医师或以上职称的病理科医师基于双盲原则对所有切片进行评估。依据Weidner的评价方法,首先在低倍镜下寻找肿瘤细胞周围的 D2-40 阳性淋巴管密集区域(热区),然后在 200 倍光镜下,随机选取 5 个视野,计数淋巴管数量,最后计算平均值,作为 LVD88。七、统计学处理使用 SPSS 22.0 进行数据分析。计量资料经Shapiro-Wilk 检验均符合正态分布,以表示,20232023 年3 月第 54 卷第 3 期年3 月第 54 卷第 3 期193新医学 新医学 两组间比较采用 t 检验,多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用 LSD-t 检验。计数资料以例(%)表示,组间比
17、较采用 2检验或 Fisher 确切概率法。P0.05 为差异有统计学意义。结 果一、60 例卵巢癌患者的临床病理特征60 例卵巢癌患者中,根据国际妇产科联盟(FIGO)手术病理分期标准期 11 例、期 9 例、期35例、期5例;根据术后病理学检查结果,浆液性腺癌 31 例、黏液性腺癌 17 例、子宫内膜样癌 12 例;高分化癌 22 例、低分化癌 38 例;淋巴结转移阳性 35 例、阴性 25 例;腹膜转移阳性20 例、阴性 40 例。二、卵巢癌组织与正常卵巢组织的 TTF-1、CyclinD1 和 D2-40 表达情况TTF-1 阳性呈棕黄色细颗粒,主要表达于细胞的胞浆及基质血管内皮内,阳
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