COL1A1在绒山羊次级毛囊生长周期中的表达模式_冯娟.pdf
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1、通信作者,:收稿日期:;修回日期:基金项目:国家自然科学基金项目();国家自然科学基金项目();内蒙古自治区自然科学基金项目()作者简介:冯娟(),女(蒙古族),内蒙古锡林郭勒盟苏尼特右旗 人,硕 士,研 究 方 向 为 生 物 化 学 与 分 子 生 物 学,:文章编号:()在绒山羊次级毛囊生长周期中的表达模式冯娟,王东,王笑冰,张茹,夏慧岩,常嘉乐,刘雨静,肖红梅,(内蒙古农业大学生命科学学院,内蒙古呼和浩特 ;内蒙古自治区生物制造重点实验室,内蒙古呼和浩特 )摘要:为型 胶原蛋白(),在动物体内广泛存在。为了解其在绒山羊次级毛囊生长周期中的表达模式,利用实时荧光定量 技术、免疫组化技术、
2、蛋白质印迹技术,从基因和蛋白水平分别对次级毛囊生长个不同时期的 基因表达量及表达差异、表达部位进行了检测。结果表明,基因在绒山羊次级毛囊的生长期(月)表达量最高,退行期(月)表达量其次,休止期(月)表达量相对最低。主要表达于次级毛囊的外根鞘。由此说明,通过调控绒山羊次级毛囊生长从而促进绒毛的生长。关键词:绒山羊;次级毛囊;免疫组化;蛋白质印迹中图分类号:文献标志码:绒山羊是我国一种经驯化形成的肉绒两用的宝贵生物资源,其绒毛柔软轻盈,保暖效果极佳,是纺织业重要的原料之一,在国际上也享有盛誉,具有极大的经济价值。绒毛是次级毛囊的产物,其品质和产量与次级毛囊的 形 态 发生 和 生 长 有 密 切
3、关系。受上皮细胞与真皮间质细胞之间相关基因、蛋白等信号因子的调控和环境因素的影响,次级毛囊的生长呈周期性变化,经历休止期、生长期和退行期三个阶段。胶原蛋白家族是结构蛋白中很重要的一类,在 细 胞 外 基 质 中 起 粘 附 作 用。()基因编码型胶原蛋白的前 链,其三螺旋结构包括两条 链和一条 链。型 胶原蛋白存在于结缔组织中,是一种形成原纤维的胶原蛋白,也是大多数动物发育不可或缺的蛋白之一,在骨骼、角膜、真皮和肌腱中含量较丰富。它不仅能维持骨结构的完整性,而且能促进上皮细胞进行活跃的运动和快速生长。单细胞转录组测序分析发现,基因是绒山羊绒毛细度的相关因子。本研究以内蒙古阿尔巴斯绒山羊为研究对
4、象,利用实时荧光定量 技术、免疫组化技术、蛋白质印迹技术对 在绒山羊次级毛囊生长周期中的表达模式进行研究,以期为进一步探索绒毛生长机制和提高羊绒品质提供理论基础。材料与方法材料样品供试次级毛囊样品采自 年月日出生的龄期只内蒙古阿尔巴斯雌性绒山羊,于 年月(生长期)、年 月(退行期)、年月(休止期)分别采集体侧距肩胛骨 处的皮肤组织。主要试剂及仪器二 乙 基 焦 碳 酸 酯(,)、磷酸盐 缓 冲液(,)、氯仿、异丙醇、琼脂糖、无水乙醇、双氧水购于生工生物工程股份有限公司(上海),缓冲液、购于博迈德生物技术有限公司(北京),核酸染料、购于酷来搏科技有限公司(北京),蛋白浓度测定试剂盒、二氨基联苯胺
5、(,)显色试剂盒购于索莱宝科技有限公司(北京),多聚甲醛购于碧云天生物技术有限公司(上海),辣根过氧化物酶(,)、标记山羊抗兔 、标记的山羊抗大鼠 、山羊抗小鼠二抗购于赛维尔生物科技有限公司(武汉),生物组织摊烤片机购于俊杰电子有限公司(武汉),双垂直电泳仪购于北京六一生物科技有限公司 年月第期兽医导刊 (北京),酶标仪购于查士利华微生物应用技术有限公司 (上海)。方法引物设计根据 数据库中 和 基因的 序列,利用 软件设计 引物,引物序列见表,送爱博生物股份有限公司合成。总 提取根据 法提取阿尔巴斯绒山羊月、月、月皮肤组织的总 ,提取的 用 紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和浓度。表
6、引物序列 基因 上游引物 ()下游引物 ()合成及 检测以检测后的 为模板,依次加入总 (),(),剩下的用 水补至,轻 柔 混 匀 后 在 仪 上 反 转 录 合 成 。反应程序为:,稀释后于 冰箱备用。以 为内参,设置 体系:,上下游引物各,。反应程序为 ,循环,循环。利用 技术对 基因进行 检测。每组设置个重复。免疫组化将 年月、年 月、年月所取的阿尔巴斯绒山羊新鲜皮肤组织样品用 清洗后放入组织固定液中固定过夜,经逐级脱水、石蜡包埋后,用组织切片机切成厚度 的组织切片,烘烤 后,通过脱蜡、热修复抗原、灭活内源性酶、血清封闭等过程,将孵育的一抗稀释滴加到实验组,对照组以等量的 滴加,于冰箱
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