不同提取方法和检测试剂在新...毒核酸检测中的应用效果评价_付艳群.pdf
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1、不同提取方法和检测试剂在新型冠状病毒核酸检测中的应用效果评价付艳群,刘丹,刘娟,罗永新(通信作者),龚晓彬新余市人民医院 检验科(江西 新余 338000)摘要目的:探讨不同提取方法联合检测试剂在新型冠状病毒核酸检测中的应用价值。方法:选取 2022 年 1 月至2022 年 12 月国家卫健委临检中心和江西省临检中心下发的新冠核酸样本 50 份作为检测样本,均为阳性样本,分别采用不同核酸提取方法及检测试剂开展核酸检测,即磁珠法+试剂 A、磁珠法+试剂 B、核酸释放剂法+试剂 A、核酸释放剂法+试剂 B,比较不同试剂组合对阳性样本的检出情况,包括不同基因检出率、双基因同时检出率、有效检出率。结
2、果:磁珠法+试剂 A 与磁珠法+试剂 B 双基因同时检出率、有效检出率相比,差异无统计学意义(P005);核酸释放剂法+试剂 A 与核酸释放剂法+试剂 B 双基因同时检出率、有效检出率相比,差异无统计学意义(P005);磁珠法+试剂 A、磁珠法+试剂 B 双基因同时检出率、有效检出率高于核酸释放剂法+试剂 A、核酸释放剂法+试剂 B,差异有统计学意义(P005)。结论:磁珠法核酸提取在新型冠状病毒核酸检测中价值更高,且两种试剂检测结果相当,试剂 B 能缩短扩增时间,磁珠法核酸提取配合试剂 B 更利于疾病早期筛查。关键词:新型冠状病毒;核酸检测;提取方法;检测试剂;应用效果中图分类号:511文献
3、标识码:A文章编号:10062882(2023)0354504DOI:1014035/jcnkihljyy202303015Evaluation of the Application of Different Extraction Methods and Detectioneagents in the Detection of Novel Coronavirus Nucleic AcidFu Yanqun,et alLaboratory of Xinyu People s Hospital(Xinyu Jiangxi 338000)Abstract Objective:To explore t
4、he application value of different extraction methods combined with detection reagents in the de-tection of novel coronavirus nucleic acid Methods:From January 2022 to December 2022,50 COVID19 nucleic acid samples issuedby the National Health Commission s Clinical Examination Center and Jiangxi Provi
5、ncial Clinical Examination Center were selected astest samples,all of which were positive samples Different nucleic acid extraction methods and test reagents were used for nucleic aciddetection,namely,magnetic bead method+reagent A,magnetic bead method+reagent B,nucleic acid release agent method+rea
6、gentA,nucleic acid release agent method+reagent B,and the detection of positive samples by different reagent combinations(内文见下页)5徐占领经椎间孔选择性神经根阻滞术治疗神经根型颈椎病的临床疗效J慢性病学杂志,2020(2):230232 6丁得方,陈思宇,李荣春超声引导下颈神经根脉冲射频联合小针刀对老年神经根型颈椎病患者疼痛程度及颈椎关节活动度的影响J中国老年学杂志,2022,42(7):16661670 7陈娇,冯旭,曾晨,等超声引导下颈神经根阻滞治疗神经根型颈椎病疗
7、效的 Meta 分析J 中华疼痛学杂志,2022,18(2):265272 8卜寒梅,王平,杨光,等神经根型颈椎病根性疼痛疗效评价方法研究进展 J 中国中西医结合杂志,2021,41(3):380384 9陈志瑞,吴彬彬,杨明浩,等颈后路脊柱内镜治疗神经根型颈椎病 1 年随访研究 J 中国疼痛医学杂志,2020,26(11):832837 10沈忠恩B 超引导下颈神经根阻滞治疗低位神经根型颈椎病的临床研究 J 浙江创伤外科,2019,24(3):626628收稿日期:20230410545黑龙江医药Heilongjiang Medicine Journal Vol36 No3 2023基金项目
8、:新余市科技计划项目(项目编号:20223090837)were compared,Including the detection rate of different genes,the simultaneous detection rate of two genes,and the effective detec-tion rate esults:There was no significant difference in the detection rate and effective detection rate between magnetic bead method+reagent
9、A and magnetic bead method+reagent B(P005);There was no statistically significant difference in the simultaneous detec-tion rate and effective detection rate between the nucleic acid release agent method+reagent A and the nucleic acid release agentmethod+reagent B(P005);The simultaneous detection ra
10、te and effective detection rate of magnetic bead method+reagent A,magnetic bead method+reagent B were higher than that of nucleic acid release agent method+reagent A,nucleic acid release a-gent method+reagent B,and the difference was statistically significant(P005)Conclusion:Nucleic acid extraction
11、by mag-netic bead method is more valuable in the detection of novel coronavirus nucleic acid,and the results of the two reagents are sim-ilar eagent B can shorten the amplification time,and the magnetic bead method combined with reagent B is more conducive toearly disease screeningKey words:Novel co
12、ronavirus;Nucleic acid test;Extraction method;Test kit;Application effect新型冠状病毒是一种可引起肺部急性感染的新型病毒,具有传染性强、发病率高、传播范围广等特点,自 2019 年出现以来,已引起全世界各地广泛性传播,给世界经济、学习及生活造成严重影响12。新型冠状病毒肺炎发生后可引起发热、乏力、干咳或嗅觉减退等一系列症状,相较于其他病毒性肺炎、流行性感冒等症状方面无明显特异性,不易引起患者早期重视。同时,该病毒存在较强变异性,在进入人体后可产生相应突变,不仅潜伏期更长,且传染性更强,故早期防治尤为重要34。目前,早期快速
13、、准确的检测是疾病防治工作开展的重点,迫切需要寻找一种高效、准确的检测方式尤为重要。实时荧光 TPC 病毒核酸检测为当前新型冠状病毒肺炎的金标准,通过采集口咽部、呼吸道或粪便等标本开展核酸检测,具有高灵敏度、出结果快等特点,能够为防治新型冠状病毒肺炎提供重要技术支撑56。但核酸提取为诊断关键环节,选取适宜的提取方法才可确保满足快速筛查及诊治需求。磁珠法及核酸释放剂法均较为常用,对比两者效果对核酸检测的开展具有重要意义。同时,不同检测试剂在检测结果、时间方法也存在一定差异,寻找准确高、检测时间短的试剂至关重要。鉴于此,本研究旨在分析不同提取方法及检测试剂在新型冠状病毒核酸检测中的应用价值,报道如
14、下。1资料与方法11一般资料选取 2022 年 1 月至 2022 年 12 月国家卫健委临检中心和江西省临检中心下发的新冠核酸样本 50 份,均为阳性样本。研究获医学伦理委员会审批同意(伦理审查批件编号:MYY20220527040)。12仪器与试剂广州达安公司提供的 SWIFT 96 核酸提取仪和含核酸释放剂提取管。广州达安公司提供的试剂 A:新型冠状病毒2019nCoV 核酸检测试剂盒(国械注准 20203400063),试剂B:新型冠状病毒 2019nCoV 核酸检测试剂盒(国械注准20203400749),检测仪器为上海宏石公司的 SLAN96P 全自动荧光定量分析仪。13方法于接收
15、样本的当日开展检测工作,按照新冠病毒感染的防范要求做好生物安全防护,之后依据核酸提取及检测试剂的不同,分为 4 种组合,即磁珠法+试剂 A、磁珠法+试剂 B、核酸释放剂法+试剂 A、核酸释放剂法+试剂 B。核酸提取:(1)磁珠法:将核酸样本充分混匀后,吸取 200L 加入 96 深孔磁珠结合板,之后放入提取仪,选择相应程序进行自动提取。(2)核酸释放剂法:采集咽拭子或鼻拭子置于核酸释放剂提取管中,充分混匀,静置 15min,之后按照试剂盒要求进行。(3)核酸扩增:选用 SLAN96P 全自动荧光定量分析仪开展核酸扩增,按检测试剂说明书进行反应体系配置及程序设定。试剂 A:其 PC 反应体系共
16、40L,由 PC 反应液 A、PC 反应液 B、核酸模板样本量组成,分别为 17L、3L、20L。先设定 PC 扩增参数:50 15min,1 个循环;9515min,1 个循环;9415s、5545s(采集荧光),45 个循环。结果判读:FAM 和 VIC 通道 Ct40 且扩增曲线呈 S 形曲线,则判定为阳性;FAM 和 VIC 通道无扩增曲线或 Ct40,且Cy5 通道呈 S 形扩增曲线,判定为阴性;处于两者间则需复查。试剂 B:其 PC 反应体系共 30L,由 PC 反应液 A、PC 反应液 B、核酸模板样本量组成,分别为 17L、3L、10L。设定 PC 扩增参数:502min,1
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