基于TLR4_NF-κB通路探究调控MIP-2对肺炎老龄大鼠的干预效果.pdf
《基于TLR4_NF-κB通路探究调控MIP-2对肺炎老龄大鼠的干预效果.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《基于TLR4_NF-κB通路探究调控MIP-2对肺炎老龄大鼠的干预效果.pdf(5页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、也J页.Acta Med Port,2019;32(10):661鄄70郾9摇 Reich SG,Savitt JM郾 Parkinson忆s disease也J页.Med Clin North Am,2019;103(2):337鄄50郾10摇 Simon DK,Tanner CM,Brundin P郾 Parkinson disease epidemiology,pathology,genetics,and pathophysiology 也 J页.Clin Geriatr Med,2020;36(1):1鄄12郾11摇 章红妍,刘全颖,许梦秋,等 郾 帕金森病患者血清微小 RNA鄄128
2、、221 的表达水平变化及其临床意义也J页.卒中与神经疾病,2020;27(6):778鄄81,808郾12摇 陈红利,梁会娟,李燕 郾 黄连碱上调 miR鄄146a鄄5p 后通过 PI3K/AKT 通路减轻由 MPP+诱导的帕金森病细胞模型损伤也J页.中华神经医学杂志,2020;19(1):2鄄8郾13摇 范文秀,马思晨,张亚洁,等 郾 miR鄄214鄄3P 在卵巢癌中的表达及临床意义也J页.医学研究杂志,2021;50(3):95鄄9郾14摇 陈乃洁,钟佳男,唐岚芳,等 郾 松果菊苷对帕金森病模型大鼠纹状体 GRP78 及 MANF 表达的影响也J页.中西医结合心脑血管病杂志,2020;1
3、8(2):244鄄6郾15摇 许吉怡,赵程,王铁山,等 郾 T 细胞相关炎症因子在帕金森病发病中的作用也J页.中国神经免疫学和神经病学杂志,2021;28(2):131鄄3,145郾16摇 王倩,秦伟伟,龙治华,等 郾 帕金森病患者血清 Cys C 与炎症因子氧化应激反应的关系也J页.中国实用神经疾病杂志,2019;22(2):149鄄53郾17摇 焦晓路,何秀萍 郾 PI3K/AKT 及 FAS/FASL 信号通路在卵巢癌中作用研究进展也J页.中国生育健康杂志,2020;31(6):596鄄9郾18摇 朱垠,郑浩轩 郾 Fas/FasL 信号通路对大肠癌恶性生物学特性的影响也J页.现代消化及
4、介入诊疗,2020;25(8):989鄄93郾19摇 王玉玲,高华,蒋森,等 郾 Fas/FasL 信号通路与帕金森病大鼠多巴胺能神经元的相关性研究也J页.实用心脑肺血管病杂志,2020;28(4):82鄄5郾20摇 李艳,黄萱,肖兰,等 郾 miR鄄214鄄3p 对人卵巢癌细胞顺铂耐药及EGR1 表达的影响也J页.安徽医科大学学报,2020;55(10):1525鄄9郾也2022鄄06鄄19 修回页(编辑摇 张艳利)基于 TLR4/NF鄄资B 通路探究调控 MIP鄄2 对肺炎老龄大鼠的干预效果鲍敏摇 甄海宁摇 何芳摇 丁敏摇 林玫摇 袁竹青摇 陈亚隽摇 薛欣欣(武汉市第三医院呼吸与危重症医学
5、科,湖北摇 武汉摇 430060)摇 摇 也摘摇 要页摇 目的摇 分析基于 Toll 样受体(TLR)4/核转录因子(NF)鄄资B 通路探究调控巨噬细胞炎症蛋白(MIP)鄄2 对肺炎老龄大鼠的干预效果。方法摇 选取 60 只健康雄性老龄大鼠,随机选取 15 只作为健康组,其余 45 只大鼠采用气管插管法制备肺炎老龄大鼠模型,最终 43 只老龄大鼠建模成功,随机分为模型组 15 只,上调组、下调组各 14 只。建模后上调组注射含10 滋l MIP鄄2 的上调慢病毒悬液,下调组注射 10 滋l MIP鄄2 的下调慢病毒悬液。空白组、模型组不做处理,1 w 后观察各组老龄大鼠变化。鉴定 MIP鄄2
6、转染效率,对比各组肺系数、肺含水量,酶联免疫吸附试验检测白细胞介素(IL)鄄6、IL鄄1茁、肿瘤坏死因子(TNF)鄄琢 水平,流式细胞仪检测 CD3+、CD4+、CD8+水平,Western 印迹法检测 TLR4/NF鄄资B 通路蛋白相对表达量。结果摇 与模型组比较,上调组 MIP鄄2 表达、IL鄄6、IL鄄1茁、TNF鄄琢、CD8+水平、TLR4、NF鄄资B 蛋白、肺系数、肺含水量较高,CD3+、CD4+水平较低,差异有统计学意义(P0郾 05);下调组肺系数、肺含水量、MIP鄄2 表达、IL鄄6、IL鄄1茁、TNF鄄琢、CD8+水平、TLR4、NF鄄资B 蛋白表达较低,CD3+、CD4+水
7、平较高,差异有统计学意义(P0郾 05);与上调组比较,下调组 CD3+、CD4+水平较高,肺系数、肺含水量、IL鄄6、IL鄄1茁、TNF鄄琢、CD8+水平、TLR4、NF鄄资B 蛋白表达量较低,差异有统计学意义(P0郾 05)。结论摇 下调 MIP鄄2 干预肺炎老龄大鼠,肺系数、肺含水量减轻,炎症反应改善,免疫功能提升,TLR4/NF鄄资B 通路蛋白得到调控,进而肺炎严重程度减轻,起到肺保护作用。也关键词页摇 肺炎;Toll 样受体 4;核转录因子鄄资B;巨噬细胞炎症蛋白鄄2;肺系数;炎症反应也中图分类号页摇 R563郾 1摇 也文献标识码页摇 A摇 也文章编号页摇 1005鄄9202(20
8、23)17鄄4294鄄05;doi:10郾 3969/j郾 issn郾 1005鄄9202郾 2023郾 17郾 053基金项目:武汉市医学科研项目(No.WX19C06)第一作者:鲍敏(1972鄄),女,硕士,副主任医师,主要从事肺损伤研究。摇 摇 老年肺炎首发症状为呼吸困难、嗜睡、脱水等,严重危害老年人健康也1 4页。相关统计显示,肺炎在各种致死病因中居第 5 位,而在老年人中致死率高居首位,因此,提高该疾病检出率,及早作出针对治疗,可提高临床疗效,减少死亡率,改善预后也5 7页。临床研究认为,肺炎的发生与多种因素相关,巨噬细胞炎症蛋白(MIP)鄄2 在肺炎发病过程中起重要作用,MIP鄄2
9、 属于趋化因子家族成员,可活化中性粒细胞参与炎症反应,其被证实与肺炎发病相关也8,9页。本研究建立肺炎老龄大鼠模型,分析下调 MIP鄄2 对肺炎老龄大鼠 Toll 样受体(TLR)4/核转录因子(NF)鄄资B 信号通路的影响,明确 MIP鄄2 是否经TLR4/NF鄄资B 信号通路参与该病的发生发展。4924中国老年学杂志 2023 年 9 月第 43 卷1摇 材料与方法1郾 1摇 材料摇 选取健康雄性老龄大鼠 60 只也北京维通利华实验动物技术有限公司,使用许可证号:SYXK(京)2017鄄0033页,鼠龄 22 25 个月,平均(23郾 5依1郾 6)个月;体质量 337 352 g,平均(
10、344郾 5依6郾 0)g。在相对湿度 45%65%、温度(22郾 6 依2郾 4)益的环境中适应性喂养 1 w。本试验获得医院伦理委员会审批。主要试剂:MIP鄄2 慢病毒载体(上海吉玛公司)、小鼠抗大鼠白细胞介素(IL)鄄6、IL鄄1茁、肿瘤坏死因子(TNF)鄄琢 抗体(Hyclone 公司)、大鼠抗小鼠 CD3+、CD4+、CD8+抗体(Invitrogen 公司)、兔抗大鼠 TLR4、NF鄄资B、内参磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)抗体(Selleck 公司)。1郾 2摇分组及建模摇 60 只健康雄性老龄大鼠,随机选取 15 只作为健康组,将剩余的 45 只大鼠麻醉后,固定四肢和牙齿,止血
11、钳夹住舌头固定,上中牙切点悬挂,使用钝圆针头经口插入气管,滴入感染液0郾 28 ml/kg,保持原位 20 min,以便感染液充分流入肺泡,从而引起肺部感染。第 2 天若老龄大鼠出现体温升高、呼吸急促、弓背、四肢瘫软、饮水降低等症状说明肺炎老龄大鼠建模成功。最终 43 只老龄大鼠建模成功,随机分为模型组 15 只,上调组、下调组各 14 只。1郾 3摇MIP鄄2 慢病毒载体构建及滴定摇使用 Gen鄄Bank 查找序列获得 MIP鄄2 序列,构建 MIP鄄2 上调、下调转染质粒,做慢病毒滴度测定。建模完成后上调组尾部注射 MIP鄄2 上调病毒悬液 10 滋l,下调组尾部注射 MIP鄄2 下调慢病
12、毒悬液 10 滋l。健康组、模型组大鼠不做处理,1 w 后观察老龄大鼠变化。1郾 4摇miRNA鄄208 转染效率鉴定摇在 MIP鄄2 转染完成 24 h 后,实时荧光定量 PCR 检测 MIP鄄2 转染效率,每组随机挑选 5 只老龄大鼠,麻醉后处死,迅速取肺组织,提取肺组织 RNA,逆转录获得 cDNA。以GAPDH 为内参照,MIP鄄2 上游序列 5忆鄄CAGAGTCCT鄄GATGCTCCTTGC鄄3忆,下游:5忆鄄CCAGTCTTATCTTGGGGTCGA鄄3忆;GAPDH 上 游 序 列 5忆鄄GAACTAAAT鄄CAAGATTGTCAGCAA鄄3忆,下 游:5忆鄄GGCATGGACT
13、鄄GTGGTCATGA鄄3忆。1郾 5摇 肺系数、肺含水量检测摇各组大鼠禁食12 h,称体质量并记录,麻醉大鼠,腹主动脉取血,静置30 min,2 000 r/min 离心 10 min,-37 益保存。处死大鼠,摘取肺组织,称质量,计算肺系数。肺系数=也肺质量(mg)/体质量(g)页伊100%。取各组各 3 只大鼠肺组织,烘干箱烘干,称量干肺重量,计算肺含水量。肺含水量=也(肺质量-干肺质量)/体质量页伊100%。剩余肺组织放入 4%的多聚甲醛中固定,石蜡包埋保存,以便后续检测。1郾 6摇 苏木素鄄伊红(HE)染色摇取出包埋后肺组织标本,流水冲洗 20 min,不同浓度酒精脱水,二甲苯透明,
14、切片机连续切片,温水烫平,置于载玻片上,恒温箱烘干,二甲苯脱蜡,苏木素染色,氨水分色,自来水冲洗40 min,伊红染色,酒精脱水,树胶封片,置于显微镜下(北京莱博联泰科技有限公司,型号:E200)观察其肺组织病理学变化。1郾 7摇 酶联免疫吸附试验检测炎症因子水平摇稀释待检血清,每孔加 60 滋l 待测血清,封反应孔,37 益温育 50 min,弃反应液,每孔注满洗涤液,浸泡1 min,甩干,每孔加30 滋l 生物素化抗体,封反应孔,37 益 温育 30 min,洗涤,每孔加 30 滋l 酶标抗体,37 益温育 30 min,避光加显色剂显色 15 min,加终止液,检测 IL鄄6、IL鄄1茁
15、、TNF鄄琢 水平。1郾 8摇 流式细胞仪检测免疫功能因子水平摇抗凝处理待测标本,分为两管,分别加入 CD3+、CD4+、CD8+单克隆抗体,室温孵育 30 min,两管分别加融血剂,完全溶血后离心处理,弃上清液,洗涤液清洗,两管分别加固定剂,加仪器缓冲液悬浮细胞,置入 FACS专用管,流式细胞仪(北京中科盟科技有限公司,型号:BD FACSAria域)检测 CD3+、CD4+、CD8+水平。1郾 9摇 Western 印迹法检测 TLR4/NF鄄资B 通路蛋白相对表达量摇 细胞裂解液裂解蛋白样品,测定蛋白浓度,十二烷基硫酸钠鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS鄄PAGE),水浴加热至蛋白变性充分,冷
16、却至室温,电泳,聚偏氟乙烯(PVDF)膜转模,洗涤,加封闭液,室温封闭 60 min,加 1 颐1 000 比例稀释的 Western 一抗,4 益孵育 60 min,回收一抗,洗涤,加 1 颐1 000 稀释并由辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗,4 益孵育 60 min,回收二抗,洗涤,显色、成像,以 GAPDH为内参,计算 TLR4、NF鄄资B 蛋白表达量。1郾 10摇 统计学处理摇 采用 SPSS25郾 0 软件,计量资料经 levene 法检测具备方差齐性,Shapiro鄄wilk 检验符合正态分布,以(x依s)表示采用重读测量方差分析,多组间比较采用方差齐性检验,两组间比较采用独立
17、样本 t 检验。2摇 结摇 果2郾 1摇 各组肺部组织病理学观察摇 如图 1 所示,健康组肺组织结构正常,无病变;模型组、上调组肺组织受损,肺泡失去含气状态,炎性浸润明显,纤毛上皮出现坏死、脱落;下调组肺泡寒气状态、炎性浸润现象明显改善。5924鲍敏等摇 基于 TLR4/NF鄄资B 通路探究调控 MIP鄄2 对肺炎老龄大鼠的干预效果摇 第 17 期图 1摇 各组肺部组织病理学(HE 染色,伊200)2郾 2摇 转染效率鉴定摇 与健康组(0郾 27依0郾 06)比较,模型组、上调组、下调组 MIP鄄2 表达量(0郾 62依0郾 11、0郾 87依0郾 15、0郾 38依0郾 09)升高,有统计学
18、差异(F=35郾 668,P0郾 05,n=5);与模型组比较,上调组 MIP鄄2 表达量升高,下调组 MIP鄄2 表达量降低,有统计学差异(t=3郾005、3郾776,P0郾05),说明 MIP鄄2 转染成功。2郾 3摇 各组肺系数、肺含水量比较摇与健康组比较,模型组、上调组、下调组肺系数、肺含水量水平较高,具有统计学差异(P0郾 05);与模型组比较,上调组肺系数、肺含水量水平较高,下调组肺系数、肺含水量水平较低,具有统计学差异(P0郾 05);与上调组比较,下调组肺系数、肺含水量较低,有统计学差异(P0郾 05)。见表 1。2郾 4摇 各组炎症因子水平比较摇 与健康组比较,模型组、上调组
19、、下调组 IL鄄6、IL鄄1茁、TNF鄄琢 水平较高,具有统计学差异(P0郾 05);与模型组比较,上调组 IL鄄6、IL鄄1茁、TNF鄄琢 水平较高,下调组 IL鄄6、IL鄄1茁、TNF鄄琢 水平较低,具有统计学差异(P0郾 05);与上调组比较,下调组 IL鄄6、IL鄄1茁、TNF鄄琢 水平较低,具有统计学差异(P0郾 05)。见表 1。2郾 5摇 各组免疫功能比较摇与健康组比较,模型组、上调组、下调组 CD3+、CD4+水平较低,CD8+水平较高,具有统计学差异(P0郾 05);与模型组比较,上调组 CD3+、CD4+水平较低,CD8+水平较高,下调组CD3+、CD4+水平较高,CD8+
20、水平较低,具有统计学差异(P0郾 05);与上调组比较,下调组 CD3+、CD4+水平较高,CD8+水平较低,有统计学差异(P 0郾 05)。见表 1。表 1摇 各组肺系数、肺含水量、炎症因子水平、免疫功能比较(x依s)组别n肺系数(mg/g)肺含水量(%)IL鄄6(pg/ml)IL鄄1茁(pg/ml)TNF鄄琢(pg/ml)CD3+(%)CD4+(%)CD8+(%)健康组 103郾 78依0郾 3573郾 61依2郾 4816郾 49依2郾 3825郾 57依3郾 6422郾 15依3郾 2462郾 17依6郾 2541郾 15依5郾 2124郾 97依3郾 09模型组 105郾 28依0郾
21、 511)81郾 62依3郾 051)55郾 74依6郾 421)85郾 17依9郾 741)68郾 21依7郾 481)37郾 69依3郾 581)25郾 54依3郾 481)36郾 71依4郾 481)上调组95郾 96依0郾 571)2)86郾 11依3郾 241)2)68郾 73依7郾 811)2)112郾 68依14郾 251)2)85郾 17依9郾 261)2)26郾 27依2郾 491)2)17郾 68依2郾 111)2)42郾 73依5郾 111)2)下调组94郾38依0郾421)2)3)78郾83依2郾571)2)3)27郾68依4郾161)2)3)43郾71依5郾481)2
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 基于 TLR4_NF 通路 探究 调控 MIP 肺炎 老龄 大鼠 干预 效果
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。