基于IL-27_STAT1信号通路探讨五味子多糖对毛细支气管炎小鼠Th1_Th2失衡的影响.pdf
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1、 ,():单书健编著 重订古今名医临证金鉴咳嗽卷 北京:中国医药科技出版社,:赵学龙,谈瑄忠,李 文,等 乌蔹莓药学与临床研究现状及分析 中医药导报,():,():李潭,孙 一 涵,李 国 峰 根 皮 素 对 脂 多 糖 诱 导 的 细胞的体外抗炎作用机制 中国免疫学杂志,():任改 艳,张 步 有,黄 剑 林 槲 皮 素 对 诱 导 小 鼠 细胞炎症的保护作用 中成药,():,():,():郝鹏飞,丁生晨,卞 华,等 桔梗汤总皂苷对慢性阻塞性肺病大鼠 通路的影响 中国医院药学杂志,():;,():,():,():基于 信号通路探讨五味子多糖对毛细支气管炎小鼠 失衡的影响赵文锦,朱 珊,田新磊
2、,祝志朋,周怡锦(河南省中医院儿科,河南 郑州;河南中医药大学第二临床医学院儿科,河南 郑州)收稿日期:基金项目:河南省高等学校重点科研项目计划();河南省中医药青苗人才项目(豫卫中医函 )作者简介:赵文锦(),女,主治医师,从事中医药防治小儿呼吸、泌尿系统疾病方向研究。:,:通信作者:朱珊(),女,教授,从事中医药防治小儿呼吸、泌尿系统疾病方向研究。:,:摘要:目的 基于 信号通路探讨五味子多糖对毛细支气管炎小鼠 失衡的影响。方法 小鼠两侧鼻内滴 呼吸道合胞病毒()建立毛细支气管炎模型,对照组则鼻内滴入 细胞上清液,后将造模成功的小鼠随机分为模型组、阳性组(雾化吸入 布地奈德溶液)及五味子多
3、糖低、中、高剂量组(灌胃、五味子多糖),给予相应药物干预 周。染色观察肺组织病理形态,法检测肺泡灌洗液中、水平,流式细胞术检测、细胞比例,法检测肺组织、蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组小鼠肺泡结构不清晰,肺组织损伤评分升高();肺泡灌洗液中、水平,肺组织 细胞百分比、比例和、蛋白表达均降低();肺泡灌洗液中、水平,肺组织 细胞百分比升高()。与模型组比较,五味子多糖中、高剂量组小鼠肺组织损伤评分降低();肺泡灌洗液中、水平,肺组织 细胞百分比、比例、及 蛋白表达均升高();肺泡灌洗液中、水平,肺组织 细胞百分比降低(),且呈剂量依赖性。结论 五味子多糖可纠正毛细支气管炎模型小鼠 失衡,可能
4、与激活 信号通路有关。关键词:五味子多糖;毛细支气管炎;信号通路;失衡中图分类号:文献标志码:文章编号:():年 月第 卷 第 期中 成 药 ,(,;,):(),(),(,),;,;,();,();,(),();,();,():;毛细支气管炎是一种呼吸道感染疾病,严重时危及生命,发病率和死亡率较高,且主要危及婴幼儿,危害严重。目前治疗毛细支气管炎的方法以氧疗和对症治疗为主,尚未明确治疗药物,是临床上面 临 的 一 大 难 题。且 呼 吸 道 合 胞 病 毒()作为引起毛细支气管炎的常见病原体,其导致的发病机制目前尚不明确,可能与辅助性 细胞 (,)辅助性 细胞(,)失衡有关。五味子多糖具有抗氧
5、化、抗疲劳、增强免疫力、抗肿瘤等多种药理作用,可提高机体免疫,缓解 失衡现象,实现对肠黏膜屏障的保护,推测五味子多糖在毛细支气管炎中可能发挥类似作用。因此,本研究以 诱导小鼠建立毛细支气管炎模型,探讨五味子多糖对其的影响,并初步探讨机制。材料 动物 健康雄性 小鼠,级,周龄,体质量(),购自长春市亿斯实验动物技术有限责任公司 实验动物生产许可证号(吉),饲养于河南省中医药研究院 实验动物使用许可证号 (豫),在温度()、相对湿度()、光照 黑暗条件下饲养,自由饮水、摄食。本研究已通过河南省中医院动物研究中心委员会审核并批准(伦理号)。细 胞 人 宫 颈 癌 细 胞(编 号),中国科学院上海细胞
6、库。年 月第 卷 第 期中 成 药 试剂 由本院老师馈赠。五味子多糖(纯度大于 ,批号,上海融禾医药科技发展有限公司);布地奈德溶液(批号,北京泽平科技有限责任公司)。苏木素伊红(,)染色试剂盒(批号,北京索莱宝科技有限公司);小鼠白细胞 介 素(,)、干 扰 素(,)、酶联免疫吸附()试剂盒和、细胞信号转导子与转录激活子 (,)、甘油醛磷酸脱氢酶(,)抗 体(批号、,英国 公司);荧光素标记胞外抗体,荧光素标记胞内抗体、及其 匹 配 同 型 对 应 抗 体(批 号、,美国 公司)。仪器 光学显微镜(型号,北京金洋万 达 科 技 有 限 公 司);流 式 细 胞 仪 型 号,贝克曼库尔特商贸(
7、中国)有限公司;蛋白凝胶成像仪(型号 ,美国赛默飞世尔科技公司)。方法 病毒株处理常规培养 细胞,当密度达 时,将 接种于 细胞,待 病变达 时,收集病毒感染的细胞,在、条件下反复冻融 次,离心 ,取上清液,参考文献 报道采用空斑法测定病毒滴度,调整病毒滴度为 ,置于 冰箱保存备用。分组、造模及给药 将小鼠随机分为对照组、模型组、阳性组和五味子多糖低、中、高剂量组,每组 只。除对照组外,其余各组参考文献 报道建立毛细支气管炎模型。小鼠两侧鼻内滴 ,每天 次,对照组滴等量 细胞上清液,连续 ,造模第 天出现呼吸急促、活动减少、咳喘、口唇和四肢末梢发绀症状,提示造模成功。造模成功后,五味子多糖低、
8、中、高剂量组灌胃、五味子多糖溶液,阳性组雾化吸入 布地奈德溶液,对照组和模型组灌胃等量生理盐水,每天 次,连续 周。取材实验结束后,脱颈法处死小鼠,切开气管置入留置针,缝线固定后,用 磷酸缓冲液灌洗左肺,反复灌洗 次,回收率 以上,离心 ,上清置于 冰箱备用;右肺取一部分置于 多聚甲醛中固定,部分置于 冰箱保存,另一部分制成单细胞悬液。染色检测肺组织形态取 多聚甲醛固定的肺组织,经乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋后,切片(),苏木素染色,盐酸乙醇分化,伊红复染,乙醇脱水、二甲苯透明后封片,光学显微镜下观察肺组织形态。采用肺损伤评分评估损伤程度,评分标准为 分,肺组织完好,未出现炎性浸润;分,肺组
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