基于HPLC-Q-TOF-MS、指纹图谱和含量测定的精气神口服液质量评价研究.pdf
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1、基于 HPLC-Q-TOF-MS、指纹图谱和含量测定的精气神口服液质量评价研究郑超,石德志,汤志锋,张云羽,钟绍辉,肖莲莲,刘华兰,廖楠汐,嵇晶,郑云枫,程建明(南京中医药大学药学院,江苏省经典名方工程研究中心,江苏 南京 210023)摘要:目的 建立精气神口服液 HPLC-ELSD 指纹图谱及其活性成分的含量测定方法。方法采用 HPLC-Q-TOF-MS 技术对精气神口服液化学成分进行分析,应用相似度评价对数据进行研究。采用 Agilent TC-C18(250 mm4.6 mm,5 m)色谱柱,以乙腈(A)-水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,建立精气神口服液 HPLC-ELSD 指纹图谱
2、并进行含量测定。结果HPLC-Q-TOF-MS 共鉴定出 75 个化合物;通过 10 批样品 HPLC-ELSD 指纹图谱标定了 14 个共有峰,通过对照品比对,共指认了斯皮诺素、酸枣仁皂苷 A、人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1、人参皂苷 Rd、人参皂苷 Rf、人参皂苷 Rg38 个色谱峰。为进一步控制口服液的整体质量,选取其中斯皮诺素、人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re 和人参皂苷 Rb14 个活性成分,进行含量测定,各活性成分线性关系良好,建立的方法灵敏度高,稳定性和准确度良好。结论 建立的含量测定与指纹图谱同时测定的方法准确、稳定,可全面评价与控制精气神口服液的质量。关键
3、词:精气神口服液;指纹图谱;HPLC-Q-TOF-MS;化学成分;含量测定中图分类号:R284文献标志码:A文章编号:1672-0482(2023)09-0860-10DOI:10.14148/j.issn.1672-0482.2023.0860引文格式:郑超,石德志,汤志锋,等.基于 HPLC-Q-TOF-MS、指纹图谱和含量测定的精气神口服液质量评价研究J.南京中医药大学学报,2023,39(9):860-869.Study on Quality Evaluation of Jingqishen Oral Liquid Based on HPLC-Q-TOF-MS Fingerprint
4、and Content Determina-tionZHENG Chao SHI De-zhi TANG Zhi-feng ZHANG Yun-yu ZHONG Shao-hui XIAO Lian-lian LIU Hua-lan LIAO Nan-xi JI Jing ZHENG Yun-feng CHENG Jian-ming School of Pharmacy Nanjing University of Chinese Medicine Jiangsu Province Engineering Research Center of Classical Prescription Nan
5、jing 210023 China ABSTRACT OBJECTIVETo establish HPLC-ELSD fingerprint of Jingqishen JQS oral liquid and the content determination method of its active ingredients.METHODS An Agilent TC-C18 250 mm4.6 mm 5 m chromatographic column was used and acetonitrile A-water solution B was adopted as the mobile
6、 phase for gradient elution to establish the HPLC-ELSD fingerprint of JQS oral liquid.The chemical composition of JQS oral liquid was analyzed by HPLC-Q-TOF-MS technology.The similarity evaluation was applied to study the data.RESULTS A total of 75 compounds were identified and 14 common peaks were
7、calibrated by the fin-gerprint of 10 samples.Through comparison with reference standards a total of 8 chromatographic peaks were identified Spinosin Ju-068南京中医药大学学报 2023 年 9 月第 39 卷第 9 期J Nanjing Univ Tradit Chin Med Vol.39 No.9 Sep.2023收稿日期:2023-07-03基金项目:南京中医药大学校企合作项目(2021112)第一作者:郑超,男,硕士研究生,E-mai
8、l:20210865 通信作者:郑云枫,男,教授,主要从事中药/天然药物活性成分、质量控制及产业化研究,E-mail:zyunfeng ;程建明,男,研究员,主要从事中药药剂学研究,E-mail:320320 juboside A Ginsenoside Rg1 Ginsenoside Re Ginsenoside Rb1 Ginsenoside Rd Ginsenoside Rf Ginsenoside Rg3 were identified.In order to further control the overall quality of oral liquid 4 active ing
9、redients Spinosin Ginsenoside Rg1 Ginsenoside Re and Ginsenoside Rb1 were selected for content determination.Each active ingredient had a good linear relationship and the estab-lished method had high sensitivity good stability and accuracy.CONCLUSIONThe methods of content determination and finger-pr
10、int measurement established in this study are accurate and stable and they control the quality of the JQS oral liquid comprehensive-ly.KEYWORDS JQS oral liquid fingerprint HPLC-Q-TOF-MS chemical composition content determination 精气神口服液由黄精、人参、大枣、酸枣仁、莲子5 味药食同源类中药再加入小分子肽组成,用于快速恢复体力,益气固本,宁心安神。研究表明:黄精1-3
11、、人参4-6、大枣7-8均富含多糖和皂苷类成分,可以缓解身体疲劳,侧重于补气;而酸枣仁9和莲子10侧重于安神;小分子肽除本身具有抗疲劳功能之外,还可以发挥载体的作用,将中药中的各种营养物质载在自己的本体上,输送到机体所需部位,被机体更好地吸收,以满足机体所需11。质量控制是确保药食同源食品安全有效的核心环节,然而,目前存在研究内容不全12、评价指标缺乏功能针对性13等问题,限制了药食同源食品的精准化与多样化发展14。为完善药食同源食品质量控制研究的不足,有研究策略指出药食同源食品应兼具食品和中药双重属性,可以在食品属性评价的基础上进行中药属性评价,并创新性地将药食同源食品的中药属性评价分为质控
12、性评价和功能性评价15。其中,质控性评价是对药食同源食品中质控性成分的检测,检测指标包括药典检测成分、指纹图谱、特征图谱及质量标志物,用于确定药食同源食品中原料中药的真伪优劣,防止非法添加和替代;功能性评价则是通过对中药类保健食品中功能性指标成分的含量检测,评价其有效性14。本研究在此基础上,通过 HPLC-Q-TOF-MS 技术分析精气神口服液的化学成分组成,并建立指纹图谱和含量测定同时测定的方法,为精气神口服液的质量控制和产品开发奠定基础。1 材料1.1 仪器1260 型高效液相色谱仪、蒸发光散射检测器(美国 Agilent 公司),BT125D 型十万分之一电子分析天平(德国 Sarto
13、rius 公司),HPLC-Q-TOF-MS 型质谱仪(Analyst1.6 色谱工作站和 Peak View 等质谱分析软件),KQ-500DE 型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。1.2 试药黄精(批号:220403)、人参(批号:220305)、大枣(批号:220404)、酸枣仁(批号:220412)、莲子(批号:220413)购自南京仙林泰康鼓楼医院药房,所有药材由南京中医药大学药学院严辉副教授鉴定。大豆肽粉(批号:20211204-1)购自辽宁太爱肽生物工程技术有限公司。人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1、人参皂苷 Rd、人参皂苷 Rf、人参皂苷 Rg3、酸
14、枣仁皂苷 A、斯皮诺素对照品(中国食品药品检定研究院,批号:110703-202034、110754-202028、110704-202129、111818-202104、111719-201806、110804-201504、110734-201914、111869-202005,纯度:94.0%、93.9%、94.3%、97.3%、96.8%、99.5%、96.0%、94.8%);精气神口服液(S1 S10,批 号:20230511、20230512、20230513、20230514、20230515、20230516、20230517、20230518、20230519、2023052
15、0,规格:30 mL袋-1,实验室自制)。甲醇、乙腈(美国 TEDIA 公司),以上试剂均为色谱纯;水为超纯水(Unique-R10 多功能超纯水系统制备)。2 方法与结果2.1 HPLC-Q-TOF-MS 成分分析2.1.1 色 谱 条 件 Agilent TC-C18色 谱 柱(4.6 mm250 mm,5 m),流动相乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0 30 min,15%23%A;30 40 min,23%29%A;4075 min,29%53%A;7580 min,53%70%A),柱 温30,流 速1.0 mLmin-1,蒸发光散射检测器(ELSD)蒸发温度为 90,气体流量为 1
16、.6 Lmin-1。2.1.2 质谱条件 电喷雾离子源(ESI),采用正负离子扫描检测,质量扫描范围 m/z 501 500;喷雾电压 45 kV;雾化气压力 60 psi;辅助气压力 60 psi;气帘气压力 40 psi;离子源温度 600;锥孔电压100 V;碰撞空射出电压 40 eV。2.1.3 供试品溶液的制备精密吸取精气神口服液 20 mL,水饱和正丁醇萃取 3 次(每次 20 mL),合并正丁醇萃取液,用 2%NaOH 碱洗 2 次,每次50 mL,再用蒸馏水50 mL 洗2 次,弃去水液,正丁醇层置水浴锅上蒸干,残渣加甲醇溶解至 5 mL 量瓶168郑超,等:基于 HPLC-Q
17、-TOF-MS、指纹图谱和含量测定的精气神口服液质量评价研究 第 9 期中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,过 0.45 m 微孔滤膜,即得。2.1.4 精气神口服液化学成分分析使用上述色谱、质谱条件对供试品溶液进行正、负离子全扫描,获得正、负离子模式下的总离子流图(Total ion chro-matogram,TIC 图),见图 1。将数据导入 PeakView软件,从精气神口服液中共鉴别了 75 个化合物,具体见表 116-20。图 1 精气神口服液正(A)、负(B)离子模式下的总离子流图Fig.1 Total ion chromatogram of JQS oral liquid in pos
18、itive(A)and negative(B)ion modes表 1 精气神口服液 HPLC-Q-TOF-MS 分析Table 1 HPLC-Q-TOF-MS analysis results of JQS oral liquid峰号分子式tR/min加合离子类型m/z(理论值)m/z(实测值)误差/10-6主要碎片离子化合物来源1C24H42O212.45M-H-665.214 6665.213 6-1.5665.222 6,485.130 8,383.129 5水苏糖四水合物HJ、DDT2C18H32O162.50M-H-503.161 8503.162 10.6503.164 8,17
19、9.056 5,59.015 8甘露三糖HJ、DZ3C12H22O112.55M-H-341.108 9341.108 90.0179.056 6,119.035 3,89.025 2,59.016 5麦芽糖HJ4C5H11NO22.60M+H+118.086 3118.086 73.9118.087 7,59.080 5,58.073 3L-缬氨酸LZ、DDT5C5H10O53.27M-H-149.045 6149.046 24.172.960 3,69.042 9,59.015 4,57.038 0D-木糖HJ、DZ6C9H11NO33.584.54M-H-M+H+180.066 6182
20、.081 2180.067 2182.081 33.20.8143.862 1,136.077 3182.081 9,138.056 3,136.041 3L-酪氨酸LZ7C18H19NO35.64M+H+298.143 8298.143 7-0.4298.144 0,192.101 8(+)-千金藤碱DZ8C9H11NO25.88M+H+166.086 3166.086 40.7166.086 9,148.076 7L-苯丙氨酸LZ、DDT9C21H20O97.46M-H-415.103 4415.103 3-0.3415.102 7,295.0608,267.0664豆苷DDT10C29H
21、44O611.60M-H-487.306 5487.304 3-4.5487.307 7远志皂苷SZR11C9H8O212.73M+H+149.059 7149.059 80.7121.066 4,77.044 1,51.031 1反式肉桂酸HJ12C10H12O13.77M+H+149.096 1149.096 31.6149.096 0,105.073 5,91.058 9茴香脑HJ13C16H18N2O313.91M+H+287.139 0287.138 8-0.6269.128 9,209.107 45-(9H-carbolin-1-yl)-pentane-1,2,5-triolHJ1
22、4C44H70O1614.85M+H+855.473 7855.466 3-8.6855.459 8,823.435 3,659.403 6重楼皂苷HJ15C28H32O1516.12M-H-607.166 8607.166 8-0.1607.169 3,544.309 1,427.102 6斯皮诺素SZR268南京中医药大学学报 2023 年 9 月第 39 卷第 9 期(续表一)峰号分子式tR/min加合离子类型m/z(理论值)m/z(实测值)误差/10-6主要碎片离子化合物来源16C38H34O220.04M-H-521.248 6521.250 63.9521.330 4,521.25
23、7 62,2-(1,4-Phenyl-ene)bis3-butyl-5-(4-ethynylphenyl)fu-ranSZR17C42H74O1521.81M-H-817.495 5817.495 90.5817.502 7,671.439 5,653.428 3Quinquenoside F1RS18C18H19NO222.12M+H+282.148 9282.148 6-0.9265.122 1,250.098 8N-去甲荷叶碱DZ19C40H70O822.59M-H-677.499 8677.496 5-4.9677.501 5,659.491 2,225.160 8肉豆蔻酸SZR20C
24、9H8O323.77M+H+165.054 6165.054 6-0.2137.063 0,105.035 9,77.043 68-HydroxychromogenHJ21C36H62O928.84M+H+639.446 7639.442 5-6.5639.444 1,441.370 6,423.361 4人参皂苷 F1RS22C36H64O1028.90M-H-655.442 7655.442 1-0.8655.446 6,493.390 9,101.026 3-D-GlucopyranosideHJ23C19H21NO230.30M+H+296.164 5296.164 60.2296.1
25、63 9,265.122 8,250.099 1荷叶碱SZR24C42H72O1331.06M+H+785.504 6785.499 3-6.7785.498 2,767.487 3,441.370 2Pseudoginsenosided Rg3HJ25C49H70O931.10M-H-801.494 7801.499 66.1801.508 0,655.443 8,637.450 71-O-23-Carboxy-pentamethyl-tetracosaundecaenoyl-2-O-(12-methyltridecanoyl)-D-xylopyranoseHJ26C45H72O1831.1
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