过表达lncRNA AC079466.1通过内质网应激信号通路对非小细胞肺癌细胞凋亡的影响.pdf
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1、 ,:;网络出版时间:网络出版地址:过表达 通过内质网应激信号通路对非小细胞肺癌细胞凋亡的影响冯梦林,卫心怡,王楠娅,王萍,段冷昕(河南科技大学基础医学与法医学院,河南 洛阳 ;吉林大学第一医院肿瘤中心,吉林 长春 ):文献标志码:文章编号:()中国 图 书 分 类 号:;摘要:目的初步探讨 在非小细胞肺癌(,)组织和细胞中的表达,及其过表达对 和 细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。方法收集 例 患者癌组织及相应的癌旁组织,检测 在组织和细胞中的表达。转染过表达质粒为 组,转染空质粒为 组,无转染为 组。、流式细胞术、检测过表达 对 和 细胞活力、凋亡、迁移和侵袭的影响;检测过表达 对内质网应
2、激相关因子 、,以及 、表达的影响。结果与癌旁组织相比,癌组织中 的表达水平明显降低;与 细胞相比,在 和 细胞的表达量明显降低。与 组和 组相比,组 和 细胞的活力、迁移、侵袭能力均明显下降,凋亡率明显升高,内质网应激相关因子 、,以及 、表达均明显上调。结论过表达 可明显抑制 和 细胞的活力、迁移和侵袭能力,并促进细胞的收稿日期:,修回日期:基金项目:国家自然科学基金资助项目()作者简介:冯梦林(),女,硕士生,研究方向:分子药理学,:;段冷昕(),女,博士,教授,硕士生导师,研究方向:分子药理学,通信作者,:凋亡,其机制可能与促进内质网应激介导的细胞凋亡有关。关键词:长链非编码 ;非小细
3、胞肺癌;增殖;凋亡;侵袭;内质网应激开放科学(资源服务)标识码():非 小 细 胞 肺 癌(,)是一种以代谢异常为特征的致死性疾病,占所有肺癌病例的 。近年来,尽管对 采用联合化疗和放射治疗,但由于不良预后与恶性肿瘤细胞的侵袭性,以及患者的耐药性,其治愈率仍很低,年生存率仅为 。因此,探索 的发生发展机制,寻找早期诊断标志物,用于诊断和预防 具有重要意义。长链非编码 (,)为长度大于 个核苷酸、不编码蛋白质的 转录物。最初被认为是“垃圾序列”,没有特定的生物学功能,很多研究发现 在癌组织中异常表达与肿瘤的发生发展密切相关 。课题组前期通过 测序发现,在肺癌中具有差异性表达,且有文献报道,在肝癌
4、和胃腺癌中的表达同样具有差异性 ,但其调控作用及机制未知,且其在肺癌中的相关作用尚未明确。本 研 究 旨 在 探 讨 在 组织和细胞中的表达,初步研究 中国药理学通报 ;():作为肺癌标志物,用于指导临床诊断以及作为治疗靶点的潜能。材料 组织与细胞本研究收集了 例来自吉林大学第一医院肿瘤外科接受手术的 患者的组织标本,同时留取肿瘤组织及距肿瘤 以上的癌旁组织,置于 超低温冰箱中保存。所有患者知情同意,研究经吉林大学第一医院伦理委员会批准。正常肺上皮细胞系 ,以及 细胞系 、,均为河南科技大学基础医学院科研中心实验室留存。主要试剂 细胞培养液、噻唑蓝()、双染试剂盒,购自 公司;胎牛血清,购自浙
5、江天航生物科技股份有限公司;转染试剂,购自 公司;提取试剂盒,购自 公司;反转录试剂盒,购自 公司;试剂盒,购自康为世纪生物科技股份有限公司;基质胶,购自 公司;一抗葡萄糖调节蛋白 (,)、蛋白激酶 样内质网激酶(,)、转录激活因子 (,)、及二抗,购自 公司;一抗真核生物起始因子 (,)、增强子结合蛋白同源蛋白(,),购自 公司;一抗 ,购自沈阳万类生物科技有限公司;一抗 ,购自 公司。仪器全波长酶标仪(美国 公司);实时荧光定量 仪(公司);流式细胞仪(美国 有限公司);全自动化学发光图像分析仪(上海天能科技有限公司)。方法 质粒载体的构建通过 网站检索可知,是个多外显子的 ,具有 个转录
6、本,最长的转录本长度为 ,包含 个外显子,其中外显子 具有调控作用。将 扩增的 序列亚克隆到 真核表达载体中,构建 过表达质粒。细胞培养及分组使用含 胎牛血清的 培养液培养 、细胞。细胞生长到约 时,使用胰蛋白酶消化,接种至 孔板中,每孔细胞数为 个。细胞分组如下:组(细胞)、组(转染空质粒)、组(转染 过表达质粒)。使用 质粒和 转染试剂进行细胞转染,放置培养箱中培养,转染 更换新鲜培养液,后荧光倒置显微镜下观察转染效果,收集细胞进行后续实验。检 测 组 织 和 细 胞 中 的表达采用总 提取试剂盒提取 组织,以及 、细胞的总 ,按照试剂盒说明书合成 ,应用 试剂盒,配制反应体系,每个样品设
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