DB45∕T 2581-2022 番茄黄化曲叶病毒RT-PCR检测方法(广西壮族自治区).pdf
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1、ICS65.020.01CCS B 1645广西壮族自治区地方标准DB45/T 25812022番茄黄化曲叶病毒 RT-PCR 检测方法Detection method of tomato yellow leaf curl virus by RT-PCR technique2022-08-25 发布2022-09-30 实施广西壮族自治区市场监督管理局发 布DB45/T 25812022I前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由广西壮族自治区农业农村厅提
2、出并宣贯。本文件由广西壮族自治区农业农村厅归口。本文件起草单位:广西壮族自治区农业科学院蔬菜研究所。本文件主要起草人:甘桂云、蒋雅琴、李韦柳、康德贤、王益奎、李文嘉、蔡健和、韦福征、黎炎、吴永官。DB45/T 258120221番茄黄化曲叶病毒 RT-PCR 检测方法1范围本文件界定了番茄黄化曲叶病毒RT-PRC检测方法所涉及的术语和定义, 规定了番茄黄化曲叶病双生病毒RT-PCR检测方法的仪器与试剂、采样与样品处理、病毒DNA提取与检测、PCR扩增检测、结果描述及判定的要求。本文件适用于广西壮族自治区行政区域内番茄及其近缘属种植株番茄黄化曲叶病毒的检测。2规范性引用文件本文件没有规范性引用文
3、件。3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1番茄黄化曲叶病Tomato Yellow Leaf Curl番茄黄化曲叶病由番茄黄化曲叶病毒(Tomato Yellow Leaf Curl Virus)引起,主要症状是植株生长缓慢,节间缩短,植株明显矮化,叶片变小,顶端叶片发黄并且上卷,整片叶萎缩、褶皱,坐果量减少,果实变小产生畸形,不能正常转色,果实产量和商品性大幅度降低。4仪器与试剂4.1检测仪器包括但不限于以下内容:PCR 仪;电泳仪;凝胶成像系统;高速台式冷冻离心机(最高转速 1 5000 r/min 以上);紫外分光光度计;超净工作台;冰箱(4 和-80 两种);通风橱;微量可调移
4、液器(0.5 L10 L,10 L100 L,20 L200 L,200 L1000 L);配套移液器吸头,Eppendorf 离心管(1.5 mL);PCR 管;研钵。DB45/T 2581202224.2检测试剂除特别说明外,下列试剂均为分析纯。如下:a)DNA 提取液:100 mmol/L Tris-HCl(pH8.0),20 mmol/L EDTA,1.4 mol/L NaCl,2(w/v)CTAB,4PVP,40 mmol/L 巯基乙醇;b)TE 缓冲液:含 10 mmol/L Tris-HCl (pH8.0),1 mmol/L EDTA-Na2 (pH8.0);c)50TAE 电泳
5、缓冲液:242 g Tris,57.1 mL 冰醋酸,100 mL 0.5 mol/L EDTA(pH8.0)定容至1 000 mL,使用时配制成 1TAE 稀释缓冲液;d)溴化乙锭 (EB,1 mg/mL):戴手套(双层)谨慎称取 EB 20 mg 于棕色试剂瓶中,加入 20 mL 无菌水,溶解后用黑色袋子包好贮于 4 备用,每 100 mL 凝胶加 50 L EB;e)苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1);f)氯仿:异戊醇(24:1);g)异丙醇;h)70乙醇:用无水乙醇和双蒸水配制;i)琼脂糖凝胶。注:用于DNA提取的移液器吸头、PCR管应经高压灭菌((1212) ,15 min)处理并
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