虎杖苷调节AMPKα_mTOR信号通路对慢性肾衰竭大鼠细胞自噬和肾纤维化的影响.pdf
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2、.现代生物医学进展():.张菲霁.围绝经期女性心血管疾病相关性调查研究.中国卫生产业():.李广红侯丽军王辉等.绝经后女性 型糖尿病患者血清雌激素的临床意义.泰山医学院学报():.奚玲李璐张日华等.雌激素对雌性大鼠脂质代谢及血糖影响的研究.南京医科大学学报():.(收稿:修回:)虎杖苷调节/信号通路对慢性肾衰竭大鼠细胞自噬和肾纤维化的影响 武汉市中医医院肾病科(武汉)通讯作者吕 奇 刘 涛 刘 练 摘 要 目的:探讨虎杖苷()对慢性肾衰竭()大鼠细胞自噬、肾纤维化及腺苷酸激活蛋白激酶()/雷帕霉素()信号通路的影响 方法:将 只 大鼠随机选择 只作为对照组(组)其余构建 大鼠模型并随机分为模型
3、组(组)、虎杖苷组(组/)、阳性肾康灵组(阳性组./)、组 激活剂 组(组/)每组 只 给药结束后试剂盒检测血清尿素氮()、肌酐()的浓度、染色观察肾组织损伤和细胞凋亡情况 检测自噬蛋白、及/通路蛋白表达 结果:与 组相比 组肾组织出现肾小管结构异常管腔扩张细胞肿胀胶原沉积等损伤、水平、胶原沉积分数、细胞凋亡率、蛋白水平显著升高(.)、/水平显著降低(.)与 组相比 组、阳性组肾组织损伤明显改善、水平、胶原沉积分数、细胞凋亡率、蛋白水平显著降低(.)、/水平显著升高(.)而 可减弱 对 大鼠肾损伤的改善作用 结论:可能通过调控/通路促进细胞自噬减轻肾纤维化改善 大鼠肾损伤关键词 虎杖苷 腺苷酸
4、激活蛋白激酶/雷帕霉素通路 自噬 肾纤维化 慢性肾衰竭 慢性肾衰竭()是一种肾脏疾病其特征是功能丧失并导致血液中有毒代谢物的积累 近年中国中西医结合肾病杂志 年 月第 卷第 期 .来 的发病率和死亡率逐年上升给我们的社会带来了沉重的经济负担 末期的主要治疗方式是血液透析和肾移植虽然肾移植取得了巨大进展但肾脏来源始终有限而血液透析治疗使 患者感染性心内膜炎的风险增加 因此从草药或食用药材中开发新型有效药物来治疗或缓解 极其重要 虎杖苷()是一种从虎杖根中分离出来的白藜芦醇葡糖苷活性成分 研究发现 可以减轻小鼠肝纤维化和糖尿病肾纤维化 雷帕霉素()是一种保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶通过调节核糖体蛋
5、白来激活蛋白质合成 研究发现抑制 信号通路可以改善肾切除大鼠的 而关于 是否可以通过调控/信号通路对 大鼠细胞自噬和肾纤维化产生影响还尚未有报道 因此本研究旨在探究 对 大鼠的细胞自噬和肾纤维化的影响及其作用机制材料与方法 动物 只 级雄性 大鼠()周购自滨州医学院生产许可证号:(鲁)本实验严格遵守动物福利和原则并通过武汉市中医医院实验动物伦理委员会的批准(批号:)主要试剂 虎杖苷(货号:)购自滁州仕诺达生物科技有限公司 染色试剂盒(货号:)购自无锡云萃生物科技有限公司 细胞凋亡试剂盒(货号:)购自北京康瑞纳生物科技有限公司尿素氮()(货号:)、肌酐()(货号:)检测试剂盒购自温州科淼生物科技
6、有限公司(货号:)、(货号:)、(货号:)、(货号:)、(货号:)抗体购自英国 公司 构建及分组随机选取 只大鼠作为对照组(组)其余大鼠用腺嘌呤建模每日按 /的剂量灌胃腺嘌呤溶液持续 周若血清、浓度显著上升则表明造模成功建模成功后将大鼠随机分为模型组(组)、虎杖苷组(组)、阳性肾康灵组(阳性组)、组 激活剂 组(组)每组 只 组通过腹腔注射 /肾康灵组小鼠灌胃./肾康灵药液 组在注射 的基础上通过腹腔注射/组和 组大鼠给予等量的生理盐水 每天早上 点给予小鼠注射或灌胃每天 次连续 周 标本采集 给药结束后通过尾静脉抽取大鼠 血液经离心机分离得到血清保存在 冰箱以备肾功能检测 麻醉处死大鼠后取出
7、肾组织纵剖为两半一半多聚甲醛固定后用于 染色、染色和 凋亡检测剩余的用于 检测 试剂盒检测血清肾功能指标 参照、试剂盒的说明书使用酶标仪检测 下的吸光度绘制标曲根据标曲计算血清、的浓度 染色观察肾病理形态 取固定的肾组织样本脱水、包埋、切成 左右的石蜡切片用苏木精和伊红()染色后在光学显微镜下观察 染色观察肾组织纤维化 用肾组织切片脱蜡、复水后按照 染色试剂盒说明书对肾组织切片进行 染色通过光镜观察 使用 软件计算胶原容积分数:胶原容积分数()(蓝染面积/视野总面积)染色观察细胞凋亡情况取上述的肾组织切片进行 染色用苏木素复染后在显微镜下观察肾细胞凋亡情况凋亡细胞呈棕黄色 检测蛋白表达取大鼠肾
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