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贵州山羊大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验.pdf
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1、10 2023.11试验研究0 引言大肠杆菌广泛存在于自然界中,致病性大肠杆菌是能引起人和动物共同感染的重要人兽共患病病原1。我国羔羊的大肠杆菌病于内蒙和新疆在1952年首次报收稿日期:2023-08-28基金项目:毕节试验区梅花鹿及黑山羊特色产业提质增效配套技术集成与示范应用(黔科合服企20204009);梅花鹿及黑山羊常见疫病防治示范应用(黔科合服企20204009(003);羊原种场主要疫病净化技术研究(黔科合支撑2022一般140);贵州省科技支撑项目:羊新发病毒性疫病的诊断和防控技术研究(黔科合支撑2023一般084)作者简介:杨莉(1975-),女,汉族,贵州习水人,本科,副研究员
2、,从事畜禽疫病及微生物研究工作。杨莉,李婷,陈雪娇,等贵州山羊大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验J现代畜牧科技,2023,102(11):10-13doi:10.19369/ki.2095-9737.2023.11.003YANG Li,LI Ting,CHEN Xuejiao,et alIsolation,Identification and Drug Sensitivity Test of Escherichia Coli from Guizhou GoatJModern Animal Husbandry Science&Technology,2023,102(11):10-13贵州山羊大肠杆菌
3、的分离鉴定及药敏试验杨莉1,李婷1,陈雪娇2,徐景峨1,韩勇1,周伟3,陶孟旭3,李正兴4,杨茂生1,李美娟1,蒲龄1,周国松5,张涛1,田宇杰1,卢昱希1,周思旋1(1.贵州省畜牧兽医研究所,贵州 贵阳 550005;2.贵州师范学院乌当校区,贵州 贵阳 550006;3.贵州省兴仁县动物疫病预防控制中心,贵州 兴仁 561409;4.贵州省纳雍县动物疫病预防控制中心,贵州 纳雍 553399;5.贵州省晴隆县动物疫病预防控制中心,贵州 晴隆 561400)摘要:为分离贵州山羊大肠杆菌和了解其耐药情况,通过对贵州贵阳、晴隆、纳雍、威宁和兴仁山羊场进行无菌采集肛门拭子、病死山羊的肝等347份样
4、品,大肠杆菌的分离培养、24种生化试验反应、16S rDNA PCR鉴定和21种抗生素药敏试验等,分离、生化和16S rDNA PCR鉴定出264株山羊大肠杆菌,贵州每个山羊场对氨苄西林和头孢硫脒产生高度耐药,对复方新诺明、头孢西丁、头孢呋辛、头孢他啶和米诺环素耐药,其他抗生素药敏感,这为贵州省控制和预防山羊大肠杆菌病提供科学依据。关键词:山羊;大肠杆菌;PCR;耐药性中图分类号:S852.61文献标识码:Adoi:10.19369/ki.2095-9737.2023.11.003Isolation,Identification and Drug Sensitivity Test of Esc
5、herichia Coli from Guizhou GoatYANG Li1,LI Ting1,CHEN Xuejiao2,XU Jinge1,HAN Yong1,ZHOU Wei3,TAO Mengxu3,LI Zhengxing4,YANG Maosheng1,LI Meijuan1,PU Ling1,ZHOU Guosong5,ZHANG Tao1,TIAN Yujie1,LU Yuxi1,ZHOU Sixuan1(1.Guizhou Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine,Guiyang Guizhou 550005
6、,China;2.Wudang Campus of Guizhou Normal University,Guiyang Guizhou 550006,China;3.Animal Disease Prevention and Control Center of Xingren County,Xingren Guizhou 561409,China;4.Animal Disease Prevention and Control Center of Nayong County,Nayong Guizhou 553399,China;5.Animal Disease Prevention and C
7、ontrol Center of Qinglong County,Qinglong Guizhou 561400,China)Abstract:In order to isolate Escherichia coli from Guizhou goat and understand its drug resistance,more than 347 samples including anal swabs and liver samples from diseased goat were collected aseptically from goat farms in Guiyang,Qing
8、long,Nayong,Weining,and Xingren,GuizhouThe isolation and cultivation of Escherichia coli,24 biochemical test reactions,16S rDNA PCR identification,and 21 antibiotic susceptibility tests were conducted Biochemical and 16S rDNA PCR identified 264 strains of Escherichia coli from goatEach goat farm in
9、Guizhou developed high resistance to ampicillin and cefotaxime,followed by resistance to compound sulfamethoxazole,cefoxitin,cefuroxime,ceftazidime,and minocyclineOther antibiotic drugs were sensitive,providing scientific basis for the control and prevention of Escherichia coli disease in goat in ou
10、r provinceKeywords:goat,Escherichia coli,PCR,resistance112023.11试验研究道2。目前,羊大肠杆菌病在我国各地养羊地区都有发生,成为危害养羊业健康发展的一个疫病。羊大肠杆菌病也称为新生羔羊腹泻病,是一种传染性极强的病症。该病多发生于出生数日到4周龄的羔羊,大肠杆菌病的潜伏期短且传染性极强,羔羊感染后发病迅速,死亡率高,如不及时发现和采取挽救措施,会对羊场的安全造成威胁和带来严重的经济损失3。由于大肠杆菌抗原性复杂,血清型较多,血清型间几乎没有交叉保护作用,给本病的免疫预防造成很大困难4-5。在临床上防控难度大,大肠杆菌属于条件致病菌,
11、可引起动物和人的多种疾病,是动物细菌性疾病的主要病原菌,也是危害人类健康的主要病原菌之一。因此为弄清贵州省羔羊腹泻主要病原,进行羊大肠杆菌分离、鉴定和药敏试验很有必要,将为贵州省该病预防和治疗提供技术保障。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 病料病料来贵州贵阳、晴隆、纳雍、威宁、兴仁等8个羊场,无菌采集肛门拭子和病死羊的肝等347份样品。1.1.2 试剂LB肉汤(LB broth)培养基和LB琼脂(LB agar)培养基(广东环凯微生物科技有限公司),麦康凯琼脂(MacConkey agar)培养基,伊红美蓝琼脂培养基(Eosin-Methylene Blue medium)和三糖铁琼脂培养
12、基(TSI)等购自上海博微生物科技有限公司,DL2000 DNA Marker、Premix Taq(EX Taq version2.0 plus dye)、Goodlove染液等购天根生化有限公司,琼脂糖(Biowest agarose,regular)购自西班牙Biowest公司。微生物鉴定药敏分析试剂板(24种生化试剂和21种药敏试验)购置杭州大微生物科技有限公司生产。1.1.3 仪器离心机(大龙国产)、振荡器(大龙国产)、金属水浴器(大龙国产)、扩增仪(日本进口)。1.2 方法1.2.1 分离菌株将采集的拭子样品和病死肝置于LB液体培养基中于恒温振荡培养箱37 过夜振荡培养24 h后,
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