高尿酸血症对雌性大鼠生殖功能的影响.pdf
《高尿酸血症对雌性大鼠生殖功能的影响.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《高尿酸血症对雌性大鼠生殖功能的影响.pdf(4页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、第5 9卷 第4期2 0 2 3年0 8月青 岛 大 学 学 报(医 学 版)J OUR NA LO FQ I N G D AOUN I V E R S I T Y(ME D I C A LS C I E N C E S)V o l.5 9,N o.4A u g u s t 2 0 2 3 收稿日期2 0 2 2-0 4-0 2;修订日期2 0 2 3-0 5-2 7 基金项目国家自然科学基金资助项目(8 1 6 7 1 6 2 5);教育部产学合作协同育人项目(2 2 0 6 0 5 4 0 2 0 2 1 7 1 9);北京大学人民医院研究与发展基 金 项 目(R D G S 2 0 2
2、2-1 4);青 岛 市 医 药 卫 生 科 研 指 导 项 目(2 0 2 2W J Z D 1 3 6);山东省医药卫生科技发展计划(2 0 2 2 2 2 0 1 0 8 0 1)第一作者宋淼(1 9 9 7-),男,硕士研究生。通信作者邢士超(1 9 8 0-),男,博士,副教授,硕士生导师。E-m a i l:x i n g s h i c h a o q d u.e d u.c n。王笑峰(1 9 7 1-),女,博士,副教授,硕士生导师。E-m a i l:w a n g x f 2 1 21 6 3.c o m。高尿酸血症对雌性大鼠生殖功能的影响宋淼1,邹通1,徐礼斌2,龚雪琳
3、1,王笑峰1,邢士超1(青岛大学,山东 青岛 2 6 6 0 2 1 1 基础医学院病原生物学系;2 口腔医学院)摘要 目的 探讨高尿酸血症(HUA)对雌性大鼠生殖功能的影响。方法 利用腺嘌呤、高酵母饲料和氧嗪酸钾(尿酸酶抑制剂)进行9个周的HUA模型建立。通过阴道脱落细胞涂片观察大鼠动情周期;留取完整子宫、卵巢称质量,计算器官系数;采用苏木精-伊红(HE)染色观察卵巢的病理变化;采用实时荧光定量P C R(q P C R)方法检测卵巢组织中吻素1(K I S S 1)和吻素1受体(K I S S 1 R)mR NA表达。结果 HUA雌性大鼠模型构建成功。与正常大鼠相比,HUA雌性大鼠动情间期
4、明显缩短(F=1 4.0 0 0,P0.0 1),卵巢系数显著下降(t=2.3 7 7,P0.0 5),卵巢组织中K I S S 1和K I S S 1 RmR NA表达显著增高(t=3.4 5 6、5.4 0 8,P0.0 5)。结论 HUA可造成雌性大鼠K I S S 1系统紊乱,引起动情间期缩短和卵巢系数降低。关键词 高尿酸血症;不育,女(雌)性;大鼠,W i s t a r;生殖;亲吻素 中图分类号 R 5 8 9.9;R 3 3 9.2 文献标志码 A 文章编号 2 0 9 6-5 5 3 2(2 0 2 3)0 4-0 5 5 1-0 4d o i:1 0.1 1 7 1 2/j
5、m s.2 0 9 6-5 5 3 2.2 0 2 3.5 9.1 1 0 开放科学(资源服务)标识码(O S I D)网络出版 h t t p s:/l i n k.c n k i.n e t/u r l i d/3 7.1 5 1 7.r.2 0 2 3 0 9 1 2.1 0 3 0.0 0 2;2 0 2 3-0 9-1 3 1 9:0 8:5 0E F F E C T SO FH Y P E R U R I C EM I AO NR E P R O D U C T I V EF U N C T I O NI NF EMA L ER A T S S ONG M i a o,Z O UT
6、 o n g,XUL i b i n,G ONGX u e l i n,WANGX i a o f e n g,X I NGS h i c h a o(D e p a r t m e n t o fP a t h o g e n i cB i o l o g y,S c h o o l o fB a s i cM e d i c i n e,Q i n g d a oU n i-v e r s i t y,Q i n g d a o2 6 6 0 2 1,C h i n a)A B S T R A C T O b j e c t i v e T oi n v e s t i g a t et
7、h ee f f e c t so fh y p e r u r i c e m i a(HUA)o nr e p r o d u c t i v ef u n c t i o ni nf e m a l er a t s.M e t h o d s A HUA m o d e lw a s e s t a b l i s h e db yn i n ew e e k s o f h i g h-y e a s t f e e d i n gw i t ha d e n i n e a n do t e r a c i l p o t a s s i u m(au r i c a s e i
8、n h i b i-t o r).T h er a t e s t r o u sc y c l ew a sd e t e r m i n e dt h r o u g ho b s e r v i n gt h es m e a r so f e x f o l i a t e dv a g i n a l c e l l s.T h e i n t a c tu t e r u sa n do v a r i e sw e r ew e i g h e dt oc a l c u l a t e t h eo r g a nc o e f f i c i e n t s.P a t h
9、o l o g i c a l c h a n g e s i nt h eo v a r i e sw e r eo b s e r v e dw i t hh e m a t o x y l i n-e o s i n(HE)s t a i n i n g.T h emR NAe x p r e s s i o no fk i s s p e p t i n1(K I S S 1)a n dk i s s p e p t i n1r e c e p t o r(K I S S 1 R)i nt h eo v a r i e sw a sm e a s u r e du s i n gq u
10、 a n t i t a t i v er e a l-t i m eP C R.R e s u l t s T h e f e m a l e r a tHUAm o d e lw a s s u c c e s s f u l l yc o n s t r u c t e d.C o m p a r e dw i t hn o r m a l r a t s,t h ef e m a l er a t sw i t hHUAs h o w e da s i g n i f i c a n t l ys h o r t e r i n t e r e s t r u s i n t e r
11、v a l(F=1 4.0 0 0,P0.0 1),a s i g n i f i c a n t l y l o w e r o v a r i a nc o e f-f i c i e n t(t=2.3 7 7,P0.0 5),a n ds i g n i f i c a n t l yh i g h e rmR NAe x p r e s s i o no fK I S S 1(t=3.4 5 6,P0.0 5)a n dK I S S 1 R(t=5.4 0 8,P0.0 5)i nt h eo v a r i a n t i s s u e.C o n c l u s i o n
12、HUAc a nd i s r u p t t h eK I S S 1s y s t e mi n f e m a l e r a t s,r e s u l t i n g i na s h o r t e n e d i n t e r e-s t r u s i n t e r v a l a n dar e d u c e do v a r i a nc o e f f i c i e n t.K E Y WO R D S h y p e r u r i c e m i a;i n f e r t i l i t y,f e m a l e;r a t s,W i s t a r;r
13、 e p r o d u c t i o n;k i s s p e p t i n s 尿酸是嘌呤代谢的终末产物。在我国,高尿酸血症(HUA)的患病率为1 3.3%,其中女性的患病率为7.9%1-2。近年来,女性不孕率不断升高,这与饮食、生活习惯和环境等因素密切相关3。研究表明,HUA与女性生殖障碍之间存在密切联系,但其机制尚不清楚4-5。在中枢神经系统中,亲吻肽(K i s s-p e p t i n)通过调节促性腺激素释放激素(G n RH)影响下丘脑-垂体-性腺轴6。K i s s p e p t i n蛋白由吻素1(K I S S 1)基因所编码,通过与吻素1受体(K I S S 1
14、 R)结合,发挥其生物学功能7。K i s s p e p t i n和其受体K I S S 1 R基因敲除的小鼠无正常的动情周期,且卵巢更小,存在生育困难8-9。本实验通过构建HUA雌性大鼠模型,观察雌鼠动情周期、器官湿质量系数、卵巢病理变化及卵巢组织中K I S S 1和K I S S 1 RmR NA的表达,探究HUA对雌鼠生殖功能的影响。现将结果报告如下。1 材料和方法1.1 实验材料健康成年雌性W i s t a r大鼠1 4只,1 2周龄,体质量为(2 4 02 0)g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司。腺嘌呤(北京索莱宝生物科技有限公 5 5 2青 岛 大 学 学 报(医 学
15、 版)5 9卷司);氧嗪酸钾(生工生物工程股份有限公司);质量分数为0.1 0的高酵母饲料(北京博泰宏达生物技术有限公司);毛细玻璃管(华西医科大学仪器厂);真空采血管(康卫仕医疗器械有限公司);低温离心机(赛默飞科技有限公司);P C R试剂盒(塞维尔生物科技有限公司)。1.2 实验方法1.2.1 动物分组及处理 采用随机数字法将大鼠分为HUA组和对照组,每组7只。HUA造模参考李传伟等1 0的方法。HUA组大鼠饮食分为两个阶段:第1阶段,饲喂高酵母饲料,并且用4 0g/L的腺嘌呤溶液按照1 0 0m g/(k gd)的剂量灌胃;在检测到大鼠血尿酸(S UA)水平显著下降时,进入第2阶段,继
16、续饲喂高酵母饲料,腺嘌呤剂量减半,同时每日1 2:0 0给予大鼠腹腔注射氧嗪酸钾,用量为1 0 0m g/(k gd)。整个实验持续9周。对照组大鼠饲喂普通饲料,并且给予等体积的蒸馏水进行灌胃。两组大鼠均每间隔1周内眦取血0.5 m L,以35 0 0r/m i n离心1 0m i n,取血清,采用生化分析仪检测S UA。1.2.2 动情周期观察 在确认造模成功后(第7周),每天8:0 0和2 0:0 0,抓取大鼠放置于手心,将沾有生理盐水的细小棉棒缓慢地插入大鼠阴道后稍停留,并轻轻旋转,缓慢地拔出,将阴道内含物均匀地涂抹在载玻片上,待自然干燥后,用亚甲蓝染色5m i n,显微镜下观察。参考印
17、丹丹等1 1的方法,根据细胞种类和比例的变化来判断动情周期,直至观察一个完整的动情周期。1.2.3 器官湿质量系数测定 在造模第9周后处死大鼠,留取完整的子宫、卵巢,吸干表面水分后称质量,计算器官系数。子宫(卵巢)系数=子宫(卵巢)质量(m g)/大鼠体质量(g)1 0 0%。1.2.4 卵巢组织病理学观察 卵巢称质量后,取部分组织立即置于4 0g/L甲醛中进行固定,制备组织蜡块,切片(5m),行苏木精-伊红(HE)染色,显微镜下观察。1.2.5 卵巢组织K I S S 1和K I S S 1 RmR NA表达检测 剩余部分卵巢组织用t r i z o l提取mR NA,逆转成为c D NA后
18、,使用P C R试剂盒进行实时荧光定量P C R(q P C R)检测。所用引物及其序列见表1。采用2-C t法计算目的基因的相对表达量。1.3 统计学方法应用G r a p h P a dP r i s m8.0软件进行统计学分析。计量资料以xs表示,两组不同时间S UA和动情周期比较采用重复测量方差分析,其他两组间比较采用t检验。P0.0 5认为差异有显著意义。2 结 果2.1 两组S UA水平比较在模型构建第1、5、7、9周时,HUA组大鼠的S UA水平均显著高于对照组(F=9.4 3 02 8.9 1 0,P0.0 5),表明HUA大鼠模型造模成功。见表2。表1 P C R引物及其序列
19、(5 3)引物名称 上游序列 下游序列K I S S 1G C T G C T G C T T C T C C T C T G T G T GGA C T G T T G G C C T G T G G G T T C A GK I S S 1 RC T T T C C T T C T G T G C T G C G T A C C CC GA GA C C T G C T G GA T G T A G T T GA CG A P DHG G C A C A G T C AA G G C T GA GAAT GA T G G T G G T GAA GA C G C C A G T A表2 两
20、组大鼠S U A水平比较(n=3,c/m o lL-1,xs)组别第1周第3周第5周第7周第9周对照组9 6.0 02 1.0 09 1.6 31 7.0 46 9.5 31 9.3 08 8.2 72 1.5 07 1.2 7 6.7 9HUA组 1 4 5.9 01 8.7 0*1 1 9.7 01 8.8 2 1 1 5.8 01 4.9 6*1 9 3.0 02 6.0 0*1 6 3.3 03 1.1 3*注:F组别=2 7.6 0 5,P=0.0 0 6,F时间=7.9 1 2,P=0.0 0 1,F组别*时间=6.5 5 8,P=0.0 0 3。与对照组比较,*F=9.4 3 0
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 尿酸 雌性 大鼠 生殖 功能 影响
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。