DB51∕T 1679-2013 水稻纹桔病菌对井冈霉素抗药性室内测定技术规程(四川省).pdf
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1、ICS DB51 四川省地方标准 DB 51/ XXXXX2013 水稻纹枯病菌对井冈霉素抗药性 室内测定技术规程 (报批稿) 2013 - XX - XX 发布 2013 - XX - XX 实施四川省质量技术监督局 发 布 DB51/ XXXXX2013 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 仪器及用具 . 1 3 试剂和材料 . 1 4 方法 . 1 5 数据统计及分析 . 2 6 结果判定 . 2 附录 A(资料性附录) 试验药剂计算方法. 4 附录 B(资料性附录) 水稻纹枯病田间症状描述. 5 DB51/ XXXXX2013 II 前 言 本标准由四川省农业厅提出并归口
2、。 本标准起草单位:四川省农业科学院植物保护研究所。 本标准主要起草人:李洪浩、吴婕、向运佳、彭化贤、刘波微、席亚东、温静、王晓黎、黄晶。 DB51/ XXXXX2013 1 水稻纹枯病菌对井冈霉素抗药性 室内测定技术规程 1 范围 本标准规定了水稻纹枯病菌对井冈霉素抗药性室内测定技术。 本标准适用于四川省水稻纹枯病菌室内对井冈霉素的抗药性评价。 2 仪器及用具 冰箱、超净工作台、称量纸、打孔器(直径5mm)、电炉、电子天平、高压消毒锅、酒精灯、接菌针、刻度试管、滤纸、镊子、培养皿、容量瓶、烧杯、生化恒温箱、锥形瓶、手术刀或剪刀、吸管、移液器。 3 试剂和材料 除非另有说明,在本标准中仅使用确
3、认的分析纯试剂和无菌蒸馏水。 马铃薯、葡萄糖、琼脂、井冈霉素原药A和70%酒精。 4 方法 4.1 含药培养基的制作 取适量井冈霉素原药A,用无菌蒸馏水溶解配制成母液,再分别用无菌蒸馏水稀释成系列浓度的药液。在无菌操作条件下,根据试验处理将预先融化的灭菌PDA培养基定量加入无菌锥形瓶中,按照药液与培养基体积比1:9,从低浓度到高浓度依次定量吸取药液,分别加入上述锥形瓶中,充分摇匀。然后分别倒入3个培养皿中,每皿15mL,制成相应浓度的含药平板。 试验药剂计算方法见附录A。 4.2 水稻纹枯病菌样品的采集 在水稻抽穗期采集带有典型水稻纹枯病症状的病稻秆,装入纸质袋内,记载采集地点、时间、品种名称
4、和采集人。水稻纹枯病田间症状描述见附录B。 4.3 水稻纹枯病菌的分离和培养 水稻纹枯病菌必须是从当年采集样品中分离获得的分离物。 用剪刀将水稻叶片的病健部剪成直径为4mm5mm的小块,放入无菌蒸馏水中清洗30s,再放入70%酒精中清洗15s,重复两次后再用无菌蒸馏水清洗,用无菌滤纸吸去样品上的水分后,将样品转入马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板上,置于恒温箱(261)内培养。24h后切取样品周围含有菌丝的培养基,置于马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板上,置于恒温箱(261)内培养备用。 DB51/ XXXXX2013 2 4.4 抗性测定 采用生长速率法测定,用已灭菌的打孔器(直径5mm)在菌龄相同、培养2
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