儿茶素对阪崎肠杆菌的体外抑制作用.pdf
《儿茶素对阪崎肠杆菌的体外抑制作用.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《儿茶素对阪崎肠杆菌的体外抑制作用.pdf(6页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、第 卷第期陕西科技大学学报V o l N o 年 月J o u r n a l o fS h a a n x iU n i v e r s i t yo fS c i e n c e&T e c h n o l o g y D e c 文章编号:X()儿茶素对阪崎肠杆菌的体外抑制作用龚国利,胡乐梅,加欣宜,齐琦(陕西科技大学 食品科学与工程学院,陕西 西安 )摘要:阪崎肠杆菌(E n t e r o b a c t e r s a k a z a k i i)是一种食源性致病菌,易引发坏死性肠炎、脑膜炎和婴儿败血症等多种疾病儿茶素作为一种存在于茶叶等天然植物中的天然多酚类产物,具有良好的抗菌活
2、性本研究通过激光共聚焦扫描显微镜和场发射扫描电镜观察发现,儿茶素作用后Es a k a z a k i i细胞膜发生破损,细胞表面粘连凹陷,出现孔洞;在M I C浓度作用下,Es a k a z a k i i膜电位升高 ,胞内活性氧水平增加 倍,胞内AT P下降 倍,胞内p H下降 上述结果表明,儿茶素可通过破坏细胞膜完整性、改变细胞膜通透性来达到抑菌效果该研究为儿茶素作为天然抗菌剂的应用奠定理论基础关键词:儿茶素;阪崎肠杆菌;抑菌活性中图分类号:T S 文献标志码:AI n h i b i t o r ye f f e c t o f c a t e c h i no nE n t e r
3、 o b a c t e r s a k a z a k i ii nv i t r oG ONGG u o l i,HUL e m e i,J I AX i n y i,Q IQ i(S c h o o l o fF o o dS c i e n c e a n dE n g i n e e r i n g,S h a a n x iU n i v e r s i t yo f S c i e n c e&T e c h n o l o g y,X i a n ,C h i n a)A b s t r a c t:E n t e r o b a c t e r s a k a z a k i
4、 ii saf o o d b o r n eb a c t e r i u mt h a tc a u s e sd i s e a s e sa sd i v e r s ea sn e c r o t i z i n ge n t e r i t i s,m e n i n g i t i sa n d i n f a n t i l es e p s i s C a t e c h i ni sak i n do fn a t u r a lp o l y p h e n o lp r o d u c t se x i s t i n g i n t e aa n do t h e r
5、n a t u r a l p l a n t s,w h i c hh a sg o o da n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y I n t h i ss t u d y,l a s e r c o n f o c a l s c a n n i n gm i c r o s c o p ya n d f i e l de m i s s i o ns c a n n i n ge l e c t r o nm i c r o s c o p yo b s e r v a t i o n ss h o w e dt h a tt h ec e l
6、 lm e m b r a n eo fEs a k a z a k i iw a sd a m a g e da f t e rt h ea c t i o no fc a t e c h i n,a n dt h ec e l l s u r f a c ea d h e r e da n dp i t t e dw i t hh o l e s U n d e rM I Cc o n c e n t r a t i o n,Es a k a z a k i im e m b r a n ep o t e n t i a l i n c r e a s e db y ,i n t r a
7、c e l l u l a rr e a c t i v eo x y g e ns p e c i e s i n c r e a s e db y t i m e s,i n t r a c e l l u l a rAT Pd e c r e a s e db y t i m e s,a n di n t r a c e l l u l a rp Hd e c r e a s e db y T h e s er e s u l t si n d i c a t et h a tc a t e c h i nc a na c h i e v ea n t i b a c t e r i a
8、 le f f e c tb yd i s r u p t i n gc e l lm e m b r a n e i n t e g r i t ya n dc h a n g i n gc e l lm e m b r a n ep e r m e a b i l i t y T h i s s t u d y l a y sa t h e o r e t i c a l f o u n d a t i o nf o r t h ea p p l i c a t i o no f c a t e c h i na san a t u r a l a n t i b a c t e r i
9、a l a g e n t K e yw o r d s:c a t e c h i n;E n t e r o b a c t e r s a k a z a k i i;a n t i b a c t e r i a l a c t i v i t y收稿日期:基金项目:陕西省教育厅专项科研计划项目(J K );陕西省咸阳市秦创原科技创新专项项目(Z D Z X NY )作者简介:龚国利(),男,内蒙古丰镇人,教授,博士,研究方向:食品微生物学、微生物智造第期龚国利等:儿茶素对阪崎肠杆菌的体外抑制作用引言阪崎肠杆菌(E n t e r o b a c t e rs a k a z a k
10、i i)是一种无芽孢的革兰氏阴性(G)肠杆菌,兼性厌氧,有鞭毛,产黄色素,生长温度范围为 ,在低湿环境更易存活Es a k a z a k i i属于食源性条件致病菌,广泛存在于环境与食品中,例如,奶粉加工设备、家 用 吸 尘 器、奶 粉、奶 酪 制 品、香 肠、蔬菜、地表水、肥料等能引起坏死性肠炎、脑膜炎和婴儿败血症等严重的侵袭性疾病 F r i e d e m a n n汇总发现 年间报道了超百起新生儿Es a k a z a k i i感染病例,其感染总致死率为 ,其中脑膜炎、菌血症、坏死性小肠结肠炎的致死率分别为 、目前,食源性疾病日益成为全球公共卫生问题,其常用的防治手段是抗生素,但
11、随之而来的是耐药性问题的日趋严重 J P a r r aF l o r e s等分离的Es a k a z a k i i及克罗诺杆菌属均表现出对一种以上抗生素的耐药性因此,开发新型绿色抑菌剂是目前有待解决的问题,而植物源化合物被认为是天然抗菌剂的有效来源儿茶素,是一种多酚类化合物,属于类黄酮类,广泛分布于天然植物中,如茶叶等,具有抗癌,抗氧化,抗菌和抗炎等活性欧凯玉等 和A R e n z e t t i等 研究发现,绿茶儿茶素主要抑菌途径有:抑制毒力因子、破坏细胞膜和细胞壁、抑制胞内酶、D NA损伤以及铁螯合等 B h a t t a c h a r y a等 发现儿茶 素 可 通 过 损
12、 伤 细 胞 膜 来 抑 制 霍 乱 弧 菌N 对大肠杆菌和铜绿假单胞菌的研究中表明,表没食子儿茶素没食子酸酯(E G C G)与细胞膜结合产生HO导致细胞膜损伤,研究表明,E G C G能引起大肠杆菌内源性氧化应激增加,细胞膜内部活性氧累积 依据G B (食品安全国家标准食品添加剂茶多酚)规定,儿茶素是食品添加剂茶多酚的有效成分儿茶素可以应用在鸭肉保鲜中,鸭肉中常见的假单胞菌、李斯特氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌以及乳酸菌等都有很好的抑制作用 然而目前尚未发现儿茶素对阪崎肠杆菌的抑菌效果及作用机制的相关研究本文通过激光共聚焦扫描显微镜(C L S M)和场发射扫描电镜(F E G S EM)观察儿
13、茶素作用后Es a k a z a k i i细胞膜完整性和细胞形态,并通过测定儿茶素对Es a k a z a k i i的最小抑菌浓度、生长曲线、膜电位、胞内AT P水平、胞内活性氧含量和胞内p H,探究儿茶素对Es a k a z a k i i的抑制作用和可能的机制,为儿茶素作为新型抗菌剂提供可靠的理论依据材料和方法 实验材料 菌株阪崎 肠 杆 菌(E n t e r o b a c t e rs a k a z a k i i)B N C C ,购自中国微生物菌种保藏中心,冻存于 冰箱 实验试剂与仪器()主要试剂:儿茶素(纯度)、D C F H D A(上海生工生物工程股份有限公司)
14、,L B肉汤培养基、琼脂(北京奥博星生物技术有限公司),磷酸二氢钾、氯化钾、氯化钠、磷酸氢二钠、葡萄糖(天津市天力化学试剂有限公司),AT P检测试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司),D i B A C()、c F D A S E(美国s i g m a公司),S Y T O/P I试剂盒(赛默飞世尔科技公司)()主要仪器:TH Z A恒温振荡培 养箱,T G L M台式高速离心机(长沙英泰仪器有限公司),S y n e r g yH 多功能酶标仪(美国伯腾仪器有限公司),UV 紫外分光光度计(上海分析仪器有限公司),L S M 激光共聚焦扫描显微镜(德国卡尔蔡司集团),ML A 场发射扫描电
15、子显微镜(美国F E I公司)试验培养基与溶液配方L B液体培养基:gL B肉汤培养基、L水、p H自然;L B固体培养基:gL B肉汤培养基、g琼脂、L水、p H自然;P B S缓冲液:gK C l、gN a C l、gKHP O、gN aH P O、L水,p H 实验方法 儿茶素对Es a k a z a k i i的最小抑菌浓度测定将冻存于 的Es a k a z a k i i接种于L B固体培养基,培养过夜,挑取 个单菌落,接种于L B液体培养基中,r p m培养至菌体的对数生长期,得到菌悬液采用微量肉汤稀释法测定儿茶素对Es a k a z a k i i的最小抑菌浓度(M i n
16、 i m u mi n h i b i t i o nc o n c e n t r a t i o n,M I C)取菌悬液与儿茶素溶液各 L至 孔微量培养板中混合儿茶素通过二倍稀释法获得,终浓度分别为 m g/m L、m g/m L、m g/m L、m g/m L、m g/m L、m g/m L,以终浓度为m g/m L的氨苄青霉素钠为阳性对照,P B S处理为阴性对照陕西科技大学学报第 卷,r p m培养h后,用酶标仪测定在 n m处的菌体密度值 儿茶素对Es a k a z a k i i生长曲线的影响按 中方法得到Es a k a z a k i i菌悬液,将 L菌悬液加入到 孔微量
17、培养板中,再加入不同浓度的儿茶素,使其终浓度为M I C、M I C、/M I C、/M I C、/M I C、/M I C、/M I C、/M I C以P B S处理做对照,每小时用多功能酶标仪在 n m处测定菌体密度值,共监测 h 儿茶素对Es a k a z a k i i细胞形态的影响按 中方法得到Es a k a z a k i i菌悬液,离心(r p m,m i n,)收集细胞,用P B S溶液洗涤两次,用M I C和 M I C的儿茶素溶液重悬菌体,P B S溶液处理作为对照,于 ,r p m培养h,洗涤两次后收集菌体沉淀加入 的戊二醛溶液,静置 h洗涤两次,分别在、和 的乙醇水
18、溶液中静置脱 水 m i n 离 心,用 乙 酸 异 戊 酯 重 悬 后,冷冻 m i n 将样品进行冷冻干燥后固定在载物台上溅射喷金后,在F E G S EM下观察 儿茶素对Es a k a z a k i i细胞膜完整性的影响按 中 方 法 得 到 儿 茶 素 处 理 后 的Es a k a z a k i i菌体沉淀,用P B S溶液重悬,加入LS Y T O/P I混合染料,避光孵育 m i n,用P B S溶液洗涤次菌体后重悬吸取菌悬液滴于载玻片上,在C L S M下观察 儿茶素对Es a k a z a k i i细胞膜电位的影响按 中 方 法 得 到 儿 茶 素 处 理 后 的E
19、s a k a z a k i i菌 体 沉 淀,用P B S溶 液 重 悬 并 加 入mM D i B A C()膜电位荧光探针,黑暗孵育h分别吸取 L加入到 孔微量培养板中,测量荧光强度(激发波长 n m,发射波长 n m)儿茶素对Es a k a z a k i i胞内R O S水平的影响按 中 方 法 得 到 儿 茶 素 处 理 后 的Es a k a z a k i i菌 体 沉 淀,加 入 mM的 荧 光 探 针D C F H D A重悬,避光孵育h后,经P B S缓冲液洗涤两次并重悬,将 L菌悬液加入黑色 孔微量培养板中,使用多功能酶标仪在激发和发射波长分别 n m和 n m时测
20、量荧光强度 儿茶素对Es a k a z a k i i胞内AT P的影响按 中 方 法 得 到 儿 茶 素 处 理 后 的Es a k a z a k i i菌体沉淀,经P B S缓冲液洗涤两次,用AT P检测试剂盒测定 儿茶素对Es a k a z a k i ip Hi n的影响按 中方法得到Es a k a z a k i i菌悬液,离心(r p m,m i n,)收集菌体沉淀,用P B S缓冲液清洗两次在 m L的磷酸钾缓冲液中重新悬浮细胞颗粒,加入mMc F D A S E分子探针 振荡孵育 m i n,用P B S缓冲液涤两次,再加入葡萄糖(终浓度 mM),孵育 h,最后将Es
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 儿茶素 阪崎肠 杆菌 体外 抑制 作用
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。