SZDB∕Z 258-2017 肉食品中鸭源性成分实时荧光PCR检测方法.pdf
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1、ICS 67.120 X 22 SZDB/Z 深 圳 市 标 准 化 指 导 性 技 术 文 件 SZDB/Z 2582017 肉食品中鸭源性成分实时荧光 PCR 检测方法 Real-time PCR for detection of duck-derived ingredients in food 2017 - 09 - 12 发布 2017 - 10 - 01 实施深圳市市场监督管理局 发 布 SZDB/Z 2582017 I 目 次 前言 . II1 范围 . 12 规范性引用文件 . 13 术语和定义 . 14 缩略语 . 15 原理 . 16 试剂和材料 . 27 主要器械和设备 .
2、 28 检验步骤 . 29 质量控制 . 310 结果判定与表述 . 3附 录 A . 4 SZDB/Z 2582017 II 前 言 本文件按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本文件的附录A为资料性附录。 本文件由深圳市检验检疫科学研究院提出。 本文件由中华人民共和国深圳出入境检验检疫局归口。 本文件起草单位:深圳市检验检疫科学研究院、深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心、深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心。 本文件主要起草人:林彦星、曹琛福、黄超华、花群义、张彩虹、阮周曦、曾少灵、谢丽琪、陶虹、廖立珊。 SZDB/Z 2582017 1 肉食品中鸭源性成分实时荧光
3、PCR 检测方法 1 范围 本文件规定了肉食品中鸭源性成分的实时荧光PCR检测方法。 本文件适用于肉食品中鸭源性成分的定性检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件, 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法场地通用规范 GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 实时荧光 PCR real time PCR 在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的积累实时监控整个P
4、CR扩增过程。 3.2 Ct 值 cycle threshold 每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。 4 缩略语 COX3:细胞色素C氧化酶III(cytochrome c oxidase subunit III) DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuleic acid) dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(deoxy-ribonucleoside triphosphate) PCR:聚合酶链式反应(polymerase chain reaction) ROX:6-羧基-X-罗丹明(6-Carboxyl-X-Rhodamine) CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(cetyl
5、trithylammonium bromide) Tris:三(羟甲基)氨基甲烷tris (hydroxymethyl) aminomethane EDTA:乙二胺四乙酸(ethylene diaminetetraacetic acid) 5 原理 SZDB/Z 2582017 2 样品经研磨混匀后,提取 DNA,以 DNA 为模板,采用鸭线粒体 COX3 基因特异性检测引物和探针进行实时荧光 PCR 扩增,根据 Ct 值,判断样品中是否存在鸭源性成分。 6 试剂和材料 6.1 试剂 裂解液(参见附录 A),三氯甲烷,异丙醇,75%乙醇,双蒸水。 除另有规定外,试剂为分析纯或生化试剂,实验用水
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