DB53∕T 1067-2021 纯种绿孔雀鉴定技术规程(云南省).pdf
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1、ICS 65.020.30 CCS B4153云南省地方标准DB53/T 10672021纯种绿孔雀鉴定技术规程Technical specification for identification of pure Pavo muticus2021 - 09 - 30 发布2021 - 10 - 14 实施云南省市场监督管理局发 布DB53/T 10672021I目次前言.III1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14形态鉴定.14.1鉴定材料.14.2鉴定内容.24.3形态特征.24.4绿孔雀与蓝孔雀性状差别.24.5疑似绿孔雀个体形态鉴定.25分子鉴定.25.1鉴定材料.35.2鉴定
2、原理.35.3样品采集.35.4DNA 制备.35.5基因组重测序.45.6参考基因组选择.45.7纯种鉴定.4附录 A(资料性)蓝孔雀和绿孔雀性状对比图. 5附录 B(资料性)DNA 样品的提取与检测. 6附录 C(资料性)试剂及仪器设备.8附录 D(资料性)鉴定结果样表.9DB53/T 10672021III前言本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由云南省林业与草原局、云南省市场监督管理局共同提出。本文件由云南省林业标准化技术委员会(YNTC02)
3、归口。本文件主要起草单位:中国科学院昆明动物研究所、云南省标准化研究院。本文件主要起草人:董锋、黄艳梅、单鹏飞、李建春、王洁、李杰、吴飞、伍和启、高建云、岩道、常江、杨晓君。DB53/T 106720211纯种绿孔雀鉴定技术规程1范围本文件规定了纯种绿孔雀(Pavo muticus)鉴定技术的形态鉴定、分子鉴定。本文件适用于绿孔雀的纯种鉴定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中, 注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 30989-2014 高通量基因测序技术规
4、程GB/T 35892 实验动物 福利伦理审查指南3术语和定义GB/T 30989界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1物种鉴定 species identification通过形态特征、分子鉴定,确定检测样本是否为纯种个体的过程。3.2基因组 genome一种生物体具有的所有遗传信息的总和。来源:GB/T 30989-2014,3.23.3参考基因组序列 reference genome sequence通过对某个物种的基因组进行从头测序,利用生物信息学分析方法进行拼接、组装,而获得的基因组序列信息。3.4基因组重测序 genome resequencing针对有参考基因组序列的物种的
5、不同个体进行基因组测序,以获取个体或群体间的差异性信息。3.5小片段基因组文库 small-insert genomic library片段大小在1 kb以下的普通DNA文库(200 bp、350 bp、500 bp等),可用于基因组重测序。4形态鉴定4.1鉴定材料DB53/T 106720212供鉴定的个体应为绿孔雀亚成体或成体。4.2鉴定内容鉴定内容见表 1。表 1绿孔雀形态学鉴定内容性状鉴定项目整体性状体型、体色冠羽性状冠羽颜色、形状、羽轴结构面部性状眼先颜色、裸皮颜色、形状颈胸、背部性状羽色、形状4.3形态特征4.3.1整体性状4.3.1.1个体较大,雄性体重 3850 g5000 g
6、,雌性体重 1060 g1160 g,体羽主要呈金翠绿色。4.3.1.2雄鸟头顶具一簇直立的冠羽,下背具闪耀紫辉的铜钱状花斑;尾屏发达,长可达 1 m,羽端有一闪耀蓝色和翠绿色相嵌的眼状斑;尾羽黑褐色,形短而隐于尾屏下;初级覆羽和初级飞羽棕黄色。4.3.1.3雌鸟无尾屏,初级飞羽外翈有黑色横斑,背羽多呈黑褐色而密布棕褐色斑纹,羽色也较淡钝,不如雄鸟艳丽。4.3.2冠羽性状4.3.2.1冠羽颜色:羽缘具翠绿色宽缘,中央呈辉蓝色。4.3.2.2冠羽形状:簇状。4.3.2.3羽枝结构:羽轴两侧由羽基至顶端均着生羽小枝。4.3.3颊部性状4.3.3.1眼周裸皮呈浅钴蓝色,颊部裸皮呈浅钴黄色。4.3.3
7、.2眼先雄性蓝黑色,雌性棕褐色。4.3.4颈胸背性状颈胸部及上背部呈金铜色的铜钱状花斑,羽基暗紫蓝色,常展露于外,羽缘闪翠绿色。4.4绿孔雀与蓝孔雀性状差别绿孔雀与蓝孔雀整体形态对比参见附录A图A.1。 绿孔雀与蓝孔雀之冠羽、 颊部以及颈胸背性状对比见附录A图A.2。4.5疑似绿孔雀个体形态鉴定将待检个体与纯种绿孔雀按4.3、4.4条要求进行逐一观察、比对及记录,全部性状符合纯种绿孔雀形态学特征,判定为疑似绿孔雀。5分子鉴定DB53/T 1067202135.1鉴定材料经形态鉴定为疑似绿孔雀或无法进行形态鉴定的个体的血液、羽毛样品等。5.2鉴定原理绿孔雀与蓝孔雀(Pavo cristatus)
8、存在显著的基因组水平遗传分化,可通过计算和统计待检样品基因组中两物种的遗传组成贡献率判断其种质资源状况。5.3样品采集5.3.1样品采集中的动物福利应符合 GB/T 35892 的要求。5.3.2血液采集使用一次性真空采血管(添加 EDTA-K2)采血 50 L100 L。血样短期保存于-20 冰箱,长期保存于-80 冰箱。5.3.3血液不可获取时,可用无菌塑胶手套收集自然脱落飞羽、尾羽或尾上覆羽等。剪取如图 1 所示的羽根部分,短期保存于-20 冰箱,长期保存于-80 冰箱。图 1用于 DNA 提取的羽毛部分示意图5.4DNA 制备可采用传统DNA提取方法(参见附录B中B.1)或商业试剂盒提
9、取DNA,常用试剂和仪器参见附录C,用于建库的DNA宜符合如下要求:a)使用 1%琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像系统 (DNA 完整性胶检测见附录 B 中 B.2) 检测 DNA 完整性,凝胶电泳条带清晰且应在 2 kb 以上(如图 2 示例);b)使用紫外分光光度计检测 DNA 纯度和浓度(检测方法参见附录 B 中 B.3),在 260 nm 和 280 nm的紫外线吸收值比值(OD260/280)在 1.82.0 之间,浓度不低于 50 ng/uL,总质量不低于 3g。DB53/T 106720214图 2琼脂糖凝胶电泳 DNA 条带示意图注:其中M代表DNA分子量标准Marker,16代表待检
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