SN∕T 3498-2013 温泉鱼类志贺邻单胞菌病检疫技术规范.pdf
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1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 温泉鱼类志贺邻单胞菌病检疫技术规范犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲狆 狉 狅 狋 狅 犮 狅 犾 犳 狅 狉犘 犾 犲 狊 犻 狅 犿 狅 狀 犪 狊 狊 犺 犻 犵 犲 犾 犾 狅 犻 犱 犲 狊犳 狉 狅 犿犌 犪 狉 狉 犪 狉 狌 犳 犪 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书前言本标准按照 给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位: 中华人民共和国四川出入境检验检疫局、 四川农业大学、 中华人民共和国重庆出入境检验检疫局。本标准主要起草人: 余华、 杨光友、 王昱、 严
2、玉宝、 李应国、 岳川、 刘洋洋、 陈世界、 周岷江、 胡娟、崔鹏博。犛 犖犜 温泉鱼类志贺邻单胞菌病检疫技术规范范围本标准规定了温泉鱼类志贺邻单胞菌病的检疫技术规范。本标准适用于温泉鱼类志贺邻单胞菌病的临床诊断和分离鉴定。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件, 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件, 其最新版本( 包括所有的修改单) 适用于本文件。 分析实验室用水规格和试验方法临床诊断 临床症状鱼群出现厌食或不吃食; 病鱼静止不动或阵发性乱游、 乱窜, 或在池边摩擦, 最后衰竭而死; 鱼体出现体色异常, 呈现黑色; 死鱼有较明显的出血症状。
3、病理变化病鱼鳍条基部及鱼体两侧轻度充血, 体表侧线两侧出现白斑或溃疡斑, 随着病情的加重, 斑的颜色逐渐变深, 严重病情时斑的颜色呈现黑色; 鳃盖周围有出血点或出血斑; 鳃、 肝、 肾的颜色均较淡, 呈现灰白色; 肝脏出现出血点, 胆囊肿大; 腹腔内积有腹水, 腹水呈淡黄色透明或红色浑浊; 肠道出血或肠壁变透明, 可见肠内容物。疫病的详细描述参见附录。分离鉴定 设备和器械 生物安全柜。 普通光学显微镜。 高压灭菌锅。 恒温培养箱( ) 。 解剖器械。 全自动生化鉴定系统。 培养基和试剂以下所用的试剂, 除特别注明者外均为分析纯试剂; 水为符合 规定的二级水。 普通营养琼脂平板, 制备见附录的
4、。犛 犖犜 革兰氏染色液, 配制见 。 培养基, 配制见 。 试剂, 配制见 。 市售触酶试剂。 市售氧化酶试剂。 糖发酵试验管, 配制见 。 诊断纸片, 制作见 。 市售生化鉴定管( 具体名称见附录) 。 类志贺邻单胞菌的分离和鉴定 样品采集挑选 尾濒死的或带有上述症状的温泉鱼, 使用无菌水冲洗体表后, 用 的酒精棉球擦拭体表, 无菌操作解剖发病温泉鱼, 采用接种环从病鱼出血点或出血斑处、 肝脏、 脾脏和肾脏蘸取渗出物。 分离和纯化接种环划线接种到普通营养琼脂平板培养基, 恒温培养 。挑取数个可疑单菌落, 划线培养于普通营养琼脂平板上, 恒温纯化培养 。类志贺邻单胞菌于普通营养琼脂平板的纯菌
5、落生长良好, 形成边缘整齐、 表面湿润、 中央隆起、 光滑、 半透明、 灰白色至淡黄色的圆形菌落。 鉴定 染色镜检挑取疑似菌落涂片到干净的玻璃载玻片, 在酒精灯火焰上方固定, 滴加结晶紫染色液, 染 , 水洗; 滴加革兰氏碘液, 作用 , 水洗; 滴加 乙醇脱色, 约 ( 或将乙醇滴满整个涂片, 立即倾去,再用乙醇滴满整个涂片, 脱色 水洗; 滴加沙黄复染液, 复染 ; 水洗, 风干, 镜检。志贺邻单胞菌为革兰氏阴性直杆菌, 两端圆润, 染色呈红色。 初步生化试验 氧化酶试验挑取少许单菌落涂抹于无菌的白色的滤纸片上, 滴加盐酸四甲基对苯二胺( 或商品化) 氧化酶试剂于菌落之上, 呈深紫色到暗绿
6、色为阳性, 否则为阴性。 触酶试验挑取少许单菌落涂抹于干净的载玻片上, 滴加 滴 过氧乙酸( 或商品化) 触酶试剂, 出现大量气泡者为阳性, 否则为阴性。 运动性和吲哚试验取氧化酶、 触酶阳性菌落穿刺接种 培养基, 培养 , 观察。细菌沿穿刺线向两侧扩增者为具运动性, 否则为不具运动性; 往管中加入数滴三氯甲烷( 此时不要与火接触) , 后再向管中加数滴 试剂, 出现红色者为吲哚阳性, 否则为阴性。 糖发酵试验挑取吲哚阳性, 有运动活性的可疑菌落少许。分别接种葡萄糖、 麦芽糖发酵管( 见 ) 。 培犛 犖犜 养 。凡试验管颜色从紫色变为黄色, 表明细菌可发酵该种糖类, 则判为阳性。 犗 敏感性
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