SC∕T 7022-2020 对虾体内的病毒扩增和保存方法(水产).pdf
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1、ICS 65.020.30 41 :才叫中华人民共和国水产行业标准SC/ T 7022-2020 对虾体内的病毒扩增和保存方法In vivo proliferation and preservation method of viruses with penaeid shrimp 2020-08-26发 布2021-01-01实施二中华人民共和国农业农村部发布; 本标fHIII1叫7/Ci标刊i化技术委bi会(SAC/TC156)川rlo本标捕,也iJJFftt|1网水产科学研究Jll1梅水JZU研究所.本标月i斗:22:起fA人:11J:宜、杨冰、JA1Jf、邱元、李l二、怅!大革11、梁!色
2、。SC/T 7022-2020 SC/T 7022一2020对虾体内的病毒扩增和保存方法1 范围标准给IL了对虾体l人l (JJ耐高扩增平保存的缩Ill各fl 、试剂和l材料、r.异,U平II设备,规定了川虾体内的州市扩增trl保存的操作在骤。本标准适用于x,JYfF体坷的协,:年扩增平II,(,飞t=.2 规范性引用文件3 4 试剂和材料4. 2 1、N缓冲液:见附录Ar:j:i(I、5 器材和设备5. 1 匀浆r.tL5. 2 高j冷的离心机。5. 3 超速冷冻离心机。5. 4 电子显微镜。6 操作步骤6. 1 实验动物选择6. 1. 1 选界养成m阶段的SPF凡纳院xJ虾(Litenae
3、us vannmei)或其他品和11 SPF x,l虾,暂养7 d。6. l. 2 随机挑取对虾个体,按GB丁28630. J、GB丁28630.2、GB/T 28630. :, GB丁28630. 4, G 13丁SC/T 7022- 2020 28630.5、G/丁25878或OIE(水生动物f虫病i:1!Jr于Jllt)第二;j分(I(J要求逃行州EiL检测,liffJ认实验动物无特定11J.JJt。6. 2 病毒扩增6.2 1 采川肌肉在则为式,11iJX.J 川、制报j体iGH-I稀粹的州市)f10L/g,注射后创头在1、l虾体内短忻作胃1)1级仪拔出。也IIf使川病iJij:位il
4、l千j反向iliJ汤.!.i且i业JIJ病df感染组织ill行投ul1方式,不1 ,;J.j(.J虾病t姑娘染力式见农1。按非l的病存TII71似E.(E对虾体内ill行有效的?可tlt打呐。表1对虾体内的病毒扩增方法参数说明祸,1i超i主肉(.、阶段梢,:J.11;:tm.r-liJ.且向j且梢,!柿子1i- ,:;扩J白1:侦川的ETJ心)JIAi心阶段H!川的病,在粒子靶m织,l心)J(X!()冉l捕,!i名iJ、太小Jfj状!l旦旦2方式(XJ.,),fIIJ)甘心11 11;1nn;ll、l时间1ll1ll mll1 白斑r,;介11病Ai(70-170)X 树叶1状躁、W,III先
5、l、二应JUlIMEM 30000布13082000和120( 飞.v气V)(210-.120) ,f1IMi币组织:成投ni!告染ttb:F.& i1i 111 肥、.wltll织、ilIl:JJUlIJ tU J ml.l;f)itJi;: ,:;: 20-22 一llf刑事?t1il守、1先FL应启i或llt叫出145 000启1210140000呐1180 (111门NV),;hfi组织!ff古且lfUUlJ.小死.10 I-m体肌肉、绵绵!u织.JII肌肉口M205 000 同1180 286 200和120病,:;(IMNV)ilt巴、淋巳 椒TlDX 1业I挑.Fr:t;-;介1
6、il:l2 J卜mf.牛鲍、l1!Iflt细织、淋巴肌肉tHI205 000刷1120 I:ll 000启1120 的,在crSV)如il:和叮1:,F 1:1.U-;宇成投Ili.:J.:梢1:1:1,1;1 1 (1 10-50) X 们状胞、i!iIfIl组织、血淋IUlfJm射100 0001同1901(YHVI) (150-180) U和淋巴剧川等100 000刷190I) 11虹彩IUlI安JtUJ、1与,:1 (1lIVI) 150-160 +而i小选I也组织.血淋巴投1山!.x反1:1)36 :lOO和12050200冉1180汹肠偷夕t血flrl忖呐苟17. 1-:l7. 6
7、 -I-rJj体跑、附版、111脚跟、JUlI士JtiM或J:l0 000布1240l(O 000)白12110(CMNV) 淋巴?l:r投1I16. 2 2 )(,Hfr农Jtll:lJ(J d豆感染的典型临床症状11中,技6.J. 2 W骤检测,确忘;/iIi 阳性后,取濒死)(.11.r JlJ =FNi 75粗捉。6. 3 病毒粗提6.3. 1 收病自感染的创组织切成小干0.5cmX O. 5 crnX O. 5 crn的组织块。6.3.2 JJI人JO1体积百!冷的TN缓冲液,冰浴 1 JO 000 r/min匀浆JOs,iflu6-J浆1次-:1汰。6. 3. 3 6-J浆后,茬儿
8、乍J.直il裂i刷,TJ队:J1II人适irlJj冷的rN级il液,搅拌均匀。6 3. 4 寄生j浆液分装于肉心位;rlJ l,:j j韭冷冻JZi心机I000 Xg, lIOCrLl心10rnino 6.3.5 收集上沽,经400日筛il过i后,ji-J冰的的饶杯i,。6. 3. 6 .,j,k;布料子大l匀-f220 11m, Jj.过?但依次经1.0 fm平110.45f-m U(I(JJj.探过Ji百分浆,ift州,11;粒子小r220 nm.泌过l蓝侬次绞1.0rn,0.451.1111平11O. 22 fm孔径(I(JN过J1l J百分装。6.4 病毒纯化(以wssv为例l6. 4
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