SN∕T 5334.2-2020 转基因植物产品的数字PCR检测方法 第2部分:转基因大豆(出入境检验检疫).pdf
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1、以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 5334.22020转基因植物产品的数字 PCR 检测方法 第 2 部分:转基因大豆Protocol of digital PCR for quantitatively detecting genetically modified plants and their derived productsPart 2: Genetically modified soybean2020-12-30 发布2021-07-01 实施ICS 65.020.01CCS B 16中华人民共和国海关总署发 布以正式出版文本为准以正式出版文本为准SN/T
2、 5334.22020前 言SN/T 53342020转基因植物产品的数字 PCR 检测方法共分为 8 个部分:第 1 部分:通用要求及定义;第 2 部分:转基因大豆;第 3 部分:转基因玉米;第 4 部分:转基因油菜;第 5 部分:转基因棉花;第 6 部分:转基因马铃薯;第 7 部分:转基因苜蓿;第 8 部分:转基因甜菜。本文件为 SN/T 53342020 的第 2 部分。本文件按照 GB/T1.12020 给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:中国检验检疫科学研究院,中华人民
3、共和国大连海关技术中心,中华人民共和国沈阳海关技术中心,中华人民共和国广州海关技术中心、中华人民共和国青岛海关技术中心、中华人民共和国深圳海关食品检验检疫技术中心、中华人民共和国上海海关。本文件主要起草人:曹际娟,郑秋月,肖西志,刘津,朱鹏宇,付伟,杨莉莉,徐君怡。I以正式出版文本为准以正式出版文本为准1SN/T 5334.22020转基因植物产品的数字 PCR 检测方法 第 2 部分:转基因大豆1 范围本文件规定了进出口大豆中转基因品系特异性的数字 PCR(dPCR)定量检测方法。本文件适用于大豆种子、叶片中转基因成分定量检测。本文件检测限参见附录 A。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过
4、文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T 5334.1 转基因产品定量检测数字 PCR 方法 第 1 部分:通用要求及定义3 术语和定义SN/T 5334.1 界定的术语与定义适用于本文件。4 方法原理见 SN/T 5334.1。5 主要设备及试剂5.1 内源基因和外源基因:内源基因为大豆植物凝集素基因(Lectin) ;外源序列为 FG72、MON87769、MON87708、MON87705、DAS-44406-6、DAS-81419-2、356043、430
5、5423、CV127、GTS 40-3-2、A5547-127、MON89788、A2704-12 品系外源基因插入位点 5 端跨边界序列,以及 DAS68416-4 品系外源基因插入位点 3 端跨边界序列。引物及探针序列参见附录 A。5.2 其他设备及试剂要求见 SN/T 5334.1 的规定。6 方法操作步骤6.1 一般性操作步骤一般性操作步骤见 SN/T 5334.1 的规定。6.2 数字 PCR 反应体系数字 PCR 反应体系配制见表 1。以正式出版文本为准2SN/T 5334.22020表 1 数字 PCR 反应体系试剂1终浓度2ddPCR Super Mix1内参基因上游引物参见附
6、录内参基因下游引物参见附录内参基因探针参见附录品系上游引物参见附录品系下游引物参见附录品系探针参见附录DNA 模板60 ng水补足至反应体系 注: 推荐使用市面上现售的数字 PCR 平台进行实验,并针对市面上现售的不同数字 PCR 平台依据说明书调整反应体系的组分和最终体积,并保证表中所列组分的终浓度不变。6.3 数字 PCR 反应程序数字 PCR 反应程序见表 2。表 2 数字 PCR 反应程序反应温度/反应时间循环数热启动a955 min1热循环(扩增) b94见表 3见表 360见附录 a : 根据不同数字 PCR 平台的要求,可以对反应程序中热启动步骤进行修改,但是不得修改热循环(扩增
7、)步骤。 b : 根据不同数字 PCR 平台的要求,有可能要在热循环(扩增)步骤结束后进行后处理,本后处理步骤按照不同数字 PCR 平台说明书进行。表 3 不同转基因品系对应的变性时间及循环数基因 / 品系变性时间/s循环数Lectin1549FG721549MON877691549MON877081549MON877051549DAS-44406-61549DAS-81419-2154935604315443054231544CV1273044以正式出版文本为准3SN/T 5334.22020基因 / 品系变性时间/s循环数GTS 40-3-23044A5547-1271549MON8978
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