T∕CNHFA 131-2023 斑马鱼模型用于保健食品辅助降血脂功能的筛查方法.pdf
《T∕CNHFA 131-2023 斑马鱼模型用于保健食品辅助降血脂功能的筛查方法.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《T∕CNHFA 131-2023 斑马鱼模型用于保健食品辅助降血脂功能的筛查方法.pdf(14页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、 ICS 67.050 CCS X 83 中 国 营 养 保 健 食 品 协 会 团 体 标 准 T/CNHFA 1312023 斑马鱼模型用于保健食品辅助降血脂功能的 筛查方法 Screening Method for Auxiliary Lipid-lowering Function of Health Food with Zebrafish Model 2023-05-30 发布 2023-06-01 实施 中 国 营 养 保 健 食 品 协 会 发 布 学兔兔 标准下载T/CNHFA 1312023 1 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分:标准化文
2、件的结构和起草规则的规定起草。本文件由杭州环特生物科技股份有限公司提出。本文件由中国营养保健食品协会归口。本文件起草单位:杭州环特生物科技股份有限公司、北京东方红航天生物技术股份有限公司、东阿阿胶保健品有限公司、漳州片仔癀药业股份有限公司、广西壮族自治区亚热带作物研究所、浙江养生堂天然药物研究所有限公司、广东太阳神集团有限公司、新时代健康产业集团、云南云科特色植物提取实验室有限公司、广东青云山药业有限公司、浙江方格药业有限公司、健合(中国)有限公司、华熙生物科技股份有限公司、黑龙江飞鹤乳业有限公司、完美(广东)日用品有限公司、云南贝泰妮生物科技集团股份有限公司、中食都庆(山东)生物有限公司、首
3、都医科大学附属北京中医医院、北京市药品检验研究院、上海疾控中心。本文件主要起草人:朱晓宇、徐懿乔、谢瑶、孙阳恩、陈志亮、檀小辉、唐秀观、张正方、刘婷婷、史珅、杨怡雯、缪着、徐霄龙、范妙璇、杨文良、洪新宇。学兔兔 标准下载T/CNHFA 1312023 2 斑马鱼模型用于保健食品辅助降血脂功能的筛查方法 1 范围 本文件规定了采用斑马鱼模型对保健食品降血脂功能的筛查方法。本文件不适用于筛查不能溶解、乳化或制备成均匀分散的悬浮液的受试样品。2 规范性引用文件 GB/T 39649 实验动物 实验鱼质量控制 GB/T 21807 化学品 鱼类胚胎和卵黄囊仔鱼阶段的短期毒性试验 术语和定义 试验溶液
4、3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 斑马鱼 Zebrafish 脊椎动物,生物分类学上属于脊椎动物门、硬骨鱼纲、鲤鱼目、鲤科、斑马鱼属、斑马鱼种,可用于教学和科研的模式动物。3.2 受精后天数 Day(s)Post-fertilization,dpf 受精卵受精后的天数。3.3 无可观察效应浓度 No Observed Toxic Effect Concentration,NOEC 与模型对照相比,对试验生物未产生显著毒性效应的最高受试样品浓度。4 原理 通过饲喂斑马鱼高糖高脂饲料(葡萄糖和蛋黄粉)可形成脂代谢紊乱斑马鱼模型,同时给予斑马鱼受试样品,可检测受试样品对高甘油三酯血
5、症和高胆固醇血症的影响,并可判定受试样品对脂质的吸收、脂蛋白的形成、脂质的降解或排泄产生的影响。本试验用油红O对斑马鱼甘油三酯进行染色,用体视显微镜拍摄斑马鱼尾静脉并用图像处理软件计算光密度总和,光密度总和与斑马鱼体内的甘油三酯含量呈正相关,甘油三酯含量越高,光密度总和越大;用胆固醇荧光探针对斑马鱼胆固醇进行染色,用荧光显微镜拍摄斑马鱼尾静脉并用图像处理软件计算荧光强度总和,荧光强度总和与斑马鱼体内胆固醇的含量呈正相关,胆固醇含量越高,荧光越强。根据斑马鱼体内甘油三酯、胆固醇的含量来判定受试样品是否具有辅助降甘油三酯或辅助降胆固醇功能。学兔兔 标准下载T/CNHFA 1312023 3 5 试
6、剂和材料 5.1 胆固醇荧光探针 胆固醇荧光探针用二甲基亚砜配制成1 mg/mL母液,-20储存。推荐斑马鱼静脉注射剂量为2 ng/尾(每尾斑马鱼注射2 nL浓度为1 mg/mL的胆固醇荧光探针)。5.2 油红O 油红O用丙二醇配制成浓度为5 mg/mL染液备用,常温储存。5.3 高脂饲料(蛋黄粉溶液)蛋黄粉用标准稀释水配制15%溶液,超声10 min,使用时用标准稀释水进行稀释,终浓度为0.15%。5.4 高糖饲料(葡萄糖溶液)葡萄糖用标准稀释水配制30%溶液,使用时用标准稀释水进行稀释,终浓度为3%。5.5 3-氨基苯甲酸乙酯甲基磺酸盐(C9H11NO2.CH4O3S,MESAB)将MES
7、AB与Na2HPO4 12H2O以1:5的总质量比混合,配制成4 mg/mL溶液,放置在4储存。使用时用标准稀释水进行稀释,终浓度为0.16 mg/mL。5.6 甲基纤维素 甲基纤维素用超纯水配制成体积分数为3%的液体胶状物:将甲基纤维素缓慢加入沸水中,边加边搅拌,甲基纤维素完全溶解后,继续搅拌至冷却到室温;用锡箔纸密封烧杯口,放置在4储存。5.7 标准稀释水 配制方法见附录A。5.8 阳性对照药 阿托伐他汀钙用二甲基亚砜配成11.6 mg/mL溶液,超声10 min后,12000 g,10 min离心取上清,-20 分装储存。使用时终浓度为11.6 g/mL。5.9 漂白液 甲酰胺 200
8、L,柠檬酸钠缓冲液(20)200 L,30%H2O2 1.3 mL,加入2.3 mL超纯水,常温储存。5.10 柠檬酸钠缓冲液(20)(pH 7.0)NaCl 175 g,柠檬酸钠 88 g,加入1 L超纯水,常温储存。学兔兔 标准下载T/CNHFA 1312023 4 6 仪器和设备 6.1 生化培养箱 带有温控和进风装置,温度控制范围5 50,精度0.1。6.2 电子天平 分度值为0.0001 g。6.3 水质检测设备 盐度计(电导率测定仪)、硬度计、pH计、溶解氧测定仪。6.4 体视显微镜 6.5 体视荧光显微镜 需配有红色荧光通道。7 试验准备 7.1 斑马鱼胚胎准备 按照GB/T 3
9、9649的规定执行斑马鱼质量控制。使用野生型AB品系斑马鱼。在体视显微镜下挑选每孔30尾发育正常的5 dpf斑马鱼胚胎,置于50 mL烧杯中进行孵育,水温控制在26-28.5。7.2 受试样品储备液制备 按照表1的方法对不同类型受试样品进行前处理。受试样品储备液宜用标准稀释水配制,受试样品难以用水溶解时可考虑使用助溶剂或分散剂。推荐的溶剂:丙酮、乙醇、甲醇、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、三甘醇。适合的分散剂:聚氧乙烯化脂肪酸甘油酯、吐温80、0.01%的纤维素甲醚、聚氧乙烯化氢化蓖麻油。表 1 不同类型受试样品前处理方法 样品类型 前处理方法 原料类 依次经过粉碎、提取、超声、均质等步骤制得受试样
10、品 固体类 颗粒剂 依次经过粉碎、溶解、超声、均质制得受试样品 片剂 依次经过去除包衣、内容物粉碎、溶解、超声、均质制得受试样品 硬胶囊 依次经过去除胶囊壳、内容物粉碎、溶解、超声、均质制得受试样品 粉剂 依次经过溶解、超声、均质制得受试样品 硬糖/软糖 依次经过粉碎、提取、溶解、超声、均质制得受试样品 袋泡茶 依次经过加热水、提取、溶解制得受试样品 液体类 直接稀释的方式溶解得到受试样品 学兔兔 标准下载T/CNHFA 1312023 5 8 试验程序 8.1 暴露条件 8.1.1 造模 选取发育正常的5 dpf 斑马鱼,置于50 mL烧杯中,每烧杯30尾斑马鱼,用标准稀释水定容至25 mL
11、。5 dpf早上9:30给予斑马鱼高脂饲料,下午17:00在标准稀释水中用筛网将高脂饲料洗脱3次,更换为高糖饲料,孵育过夜。在斑马鱼6 dpf早上9:30,在标准稀释水中用筛网将高糖饲料洗脱3次。重复5 dpf相同的方式,给予斑马鱼高脂、高糖饲料处理。在斑马鱼7 dpf早上9:30,在标准稀释水中用筛网将高糖饲料洗脱3次,将烧杯中的斑马鱼转移至6孔板,结束暴露。8.1.2 给药 在斑马鱼5 dpf早上9:30在给予高脂饲料的同时给予受试样品,下午17:00在高脂饲料洗脱后给予高糖饲料的同时给予受试样品,孵育过夜。在斑马鱼6 dpf,重复5 dpf 相同的方式,给予斑马鱼受试样品处理。在斑马鱼7
12、 dpf 早上9:30,在标准稀释水中用筛网将高糖饲料洗脱3次,将烧杯中的斑马鱼转移至6孔板,结束暴露。给药持续时间为48 h。如果受试样品富含营养物质,试验溶液容易腐败变质,可考虑在高脂饲料处理过程中进行换液,换液频率可根据水质情况调整。必要时,受试样品给予时间可延长至96 h(造模时间对应地延长至96 h)。8.1.3 光照 暴露期间避光处理,避免光照对受试样品稳定性的影响。8.1.4 温度 2628.5。8.1.5 溶解氧 6 mg/L饱和溶解氧。8.1.6 pH 6.87.5。8.2 预实验 8.2.1 试验分组 a)正常对照组:用标准稀释水处理的未饲喂高糖高脂饲料的正常斑马鱼。b)模
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- TCNHFA 131-2023 斑马鱼模型用于保健食品辅助降血脂功能的筛查方法 CNHFA 131 2023 斑马 模型 用于 保健食品 辅助 血脂 功能 方法
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【pa****e】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【pa****e】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。