BJS 201907 鳕鱼及其制品中裸盖鱼、油鱼和南极犬牙鱼源性成分检测.pdf
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1、 1 鳕鱼及其制品中裸盖鱼、油鱼和南极犬牙鱼源性成分检测 BJS 201907 1 范围 本方法规定了鳕鱼及其制品中裸盖鱼(Anoplopoma fimbria)、油鱼(Lepidocybium flavobrunneum, Ruvettus pretiosus) 和南极犬牙鱼 (Dissostichus eleginoides, Dissostichus mawsoni)源性成分的实时荧光PCR检测方法。 本方法适用于鳕鱼、鳕鱼片、鳕鱼扒等生鲜或速冻鳕鱼产品(不包含鱼丸、鱼糕、鱼饼、鱼肠、鱼豆腐、鱼肝油等加工产品)中裸盖鱼、油鱼和南极犬牙鱼源性成分的定性检测。 2 原理 使用商业化DNA提取
2、试剂盒,获得适用于实时荧光PCR检测的DNA。分别使用裸盖鱼、油鱼或南极犬牙鱼特异性引物探针,通过实时荧光PCR反应,获得Ct值,根据Ct值判断样品是否检出裸盖鱼、油鱼或南极犬牙鱼源性成分。 3 试剂和材料 除另有规定外,本方法中所用试剂均为分析纯,水应符合GB/T 6682的一级水要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。 3.1 引物探针序列 3.1.1 裸盖鱼源性成分NADH2基因 裸盖鱼源成分5 端引物:5 -AGGGACCACCCTAACATTCG-3 裸盖鱼源性成分3 端引物:5 -GTGGGTGGTGATGCTGTGCT-3 裸盖鱼源性成分探针:5 -FAM-CAGCTCTCA
3、CTGACTACTCGCATGA-BHQ1-3 3.1.2 油鱼源性成分Cytb基因 油鱼源性成分5 端引物:5 -TAACTTCGGATGACTCATCCG-3 油鱼源性成分3 端引物:5 -AGTAAAGGCCTCGTCCAATGT-3 油鱼源性成分探针:5 -FAM-CATCCGAAACCTTCATGCAAACGGC-BHQ1-3 3.1.3 南极犬牙鱼源性成分CK基因 南极犬牙鱼源性成分5 端引物:5 -CTGAATATGTAGGTGCATACG-3 南极犬牙鱼源性成分3 端引物:5 -TTGCTCTTTGTGTTTCGGTT-3 南极犬牙鱼源性成分探针:5 -FAM-TCCATTAG
4、GTAAGCGAGCGGGAAGA-BHQ1-3 3.1.4 内参照基因真核生物 18SrRNA 2 内参照5 端引物:5 -TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA-3 内参照3 端引物:5 -AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT-3 内参照探针:5 -FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAAC-BHQ1-3 3.2 商业化 DNA 提取试剂盒。 3.3 商业化 PCR 反应预混液。 4 仪器和设备 4.1 实时荧光 PCR 仪。 4.2 微量紫外分光光度计。 4.3 恒温水浴锅。 4.4 高速冷冻离心机:离心力 18,000 g 以上。
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