血浆miRNAs作为胃癌早期生物标志物的临床流行病学研究.pdf
《血浆miRNAs作为胃癌早期生物标志物的临床流行病学研究.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《血浆miRNAs作为胃癌早期生物标志物的临床流行病学研究.pdf(68页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、一、中劝要.1二、英翊要.5三、论文正文前言.1。材料与方法.15结果.24讨论.35总结.39参考文献.40(11五、附录附录一、论文缩略词表.63附录二、已发表论文.64六、飒.66南京医科大学硕士学位论文血浆miRNAs作为胃癌早期生物标志物的临床流行病学研究中文摘要胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率分别居恶性肿瘤第2 位和第3位,严重威胁我国居民的生命健康,是肿瘤预防及控制的重点之一。早期发现和早期诊断是早期治疗的基础,是提高胃癌患者生存期的关键环节。以胃镜为基础的筛查计划使得日本早期胃癌的诊断率提高了 3倍,胃癌患者的 预后得到有效改善。然而考虑到经济成本效益和人群接受
2、程度,这种筛查方案 并未在其他国家推广。近年来,血清胃蛋白酶原、胃泌素17以及其他蛋白类生 物标志物备受关注,但其灵敏度和特异度有限,未能得到推广应用。因此,鉴 定微创、高效、廉价、易测的新型生物标志物,仍将是提高胃癌防治水平的一 个重要研究方向。微小RNAs(microRNAs,miRNAs)作为一类新型的癌基因和抑癌基因在 肿瘤的发生、发展以及转移等方面扮演重要作用,是肿瘤研究领域的热点之一。成熟miRNAs通过与目标mRNA序列结合,导致mRNA的降解或者翻译的抑制,从而调控目标基因的生物学功能。单个miRNA分子能够调控数以百计功能各异 的目标基因,因而miRNAs可在生理病理的各个过
3、程中发挥重要的调节作用。靶组织来源的miRNAs在肿瘤临床诊断和预后预测中具有重要的指导意义,成 为重要的候选标志物。但是,由于靶组织取样困难,对病人生理和心理创伤较 大,在肿瘤的早期筛查中难以应用,旦对于晚期非手术患者也不易检测。2008年,国内外研究团队同步发现血浆/血清中广泛存在miRNAs,并且具 有含量丰富、性质稳定、易于精确定量检测等诸多特质。近年来,研究结果显 示循环miRNAs作为肿瘤生物标志物具有巨大应用前景。胃癌的研究已经报道 了其特异表达的循环miRNAs,但是不同研究结果缺乏一致性。例如有研究报南京医科大学硕士学位论文道通过Solexa测序技术筛选出一组胃癌血清差异表达
4、的miRNAs:miR-l miR20a、miR-27a、miR-34和m很423.5p;另有研究利用miRNA微阵列芯片 筛选发现胃癌患者血清中miR-187*、miR-371-5p和miR-378的表达水平显著高 于对照组。这些不一致的研究结果可能与检测平台、样本收集和处理流程以及 数据标化方法等有一定的关系,但研究对象的差异,特别是胃癌部位(贲门癌 和非贲门胃癌)以及肿瘤分期的差异可能也是产生循环miRNAs研究结果异质 性的重要来源。鉴于非贲门胃癌与贲门癌发生机制的差异,以及不同肿瘤分期可能存在循 环miRNAs表达差异,本研究以早期非贲门胃癌为切入点,采用四阶段的病例-对照研究设计,
5、筛选并验证了胃癌差异表达的血浆miRNAso第一阶段,利用 TaqMan低密度表达芯片(TaqMan Low Density Array,TLDA)比较40例早期非 贲门胃癌患者和40例健康对照混合血浆样本的miRNA表达谱,筛选差异表达 的miRNAs;第二阶段,通过单个样本反转录实时荧光定量PCR(Quantitative Reverse T ranscriptase-PC R.qRT-PC R)检测验证第一阶段筛选的差异表达 miRNAs;第三阶段,应用qRT-PCR在独立血浆样本中(包括48例早期非贲门 胃癌患者、54例胃部良性病变患者和48例健康对照)验证差异表达的miRNAs;第四
6、阶段,应用qRT-PCR检测上述差异表达的miRNAs在不同胃癌部位和不同 肿瘤分期血浆样本中(包括早期非贲门胃癌、晚期非贲门胃癌、早期贲门癌、晚期贲门癌和健康对照各18例)的表达情况。在四个阶段的研究设计中,对照 均与病例按照年龄和性别进行频数匹配,累计包括124例非贲门胃癌患者、36 例贲门癌患者、54例胃部良性病变患者以及106例健康对照。采用Mann-Whitney 秩和检验比较对照组与病例组之间血浆miRNAs表达水平的差异。本研究通过TLDA芯片筛选发现了一组早期非贲门胃癌差异表达的血浆 miRNAs,并选择了 5个表达稳定(在病例或对照中表达Ct值低于30)且表达 差异4倍以上的
7、候选miRNAs进行后续验证,包括miR-16、miR-25、miR-92a、miR-451和miR4865p;经过第二和第三阶段验证,我们发现这5个miRNAs 南京医科大学硕士学位论文在早期非贲门胃癌患者血浆中的表达水平均显著高于对照组(所有尸 miR-25 miR-92a、miR-451和miR-486-5p)单独诊断早期非贲门胃癌的ROC曲线下面 积(Area under the ROC Curve,AUC)分另ij为 0.768、0.694、0.732、0.790 和 0.779,miRNAs组合的AUC为0.812(灵敏度68.8%,特异度90.2%)。第三阶段与第 四阶段合并后的
8、结果显示,5个miRNAs单独诊断胃癌的AUC分别为0.733、0.871、0.817.0.850 和 0.771,miRNAs 组合的 AUC 为 0.909(灵敏度 84.2%,特异度 91.7%)o为了进一步评价上述5个胃癌差异表达的血浆miRNAs的来源,本研究分 别采集了 BGC823和MGC803两种胃癌细胞株在不同浓度和不同培养时间点的 细胞培养液,应用qRT-PCR检测了 5个miRNAs的表达情况。分析结果显示,miR-16 miR-25和miR92a在两种细胞培养液中的表达水平均随细胞数量和培 养时间的增加而升高,而miR-451和miR-486-5p的表达水平均无明显改变
9、,提 示胃癌患者血浆中高表达的miR-16、miR-25和miR-92a可能来源于胃癌肿瘤组 织,而血浆中高表达的miR-451和miR-486-5p可能并不直接来源于胃癌组织。本研究发现 miR-16、miR-25、miR92a、miR-451 和 miR-486-5p 在外周血 循环中的表达水平可用于早期胃癌的检测,具有较高的灵敏度与特异度,可作 为胃癌早期筛查和诊断的一类新型生物标志物。循环中高表达的miR-16、miR-25 3南京医科大学硕士学位论文和miR-92a可能来源于胃癌组织,而循环miR-451和miR-486-5p的来源有待进 一步阐明。本研究的发现有望为胃癌的早期筛查和
10、诊断提供新手段,同时为揭 示相关循环miRNAs的分泌机制,以及实现胃癌的早诊早治、促进胃癌的防治 奠定基础。关罐词:胃癌;miRNA;血浆;生物标志物4南京医科大学硕士学位论文A Clinical Epidemiological Study of Plasma miRNAs as Biomark ers for Early Detection of Gastric CancerAbstractGastric cancer(GC)is currently the third most common malignancy and the second leading cause of cance
11、r death in China.Early GC is typically small and asymptomatic,and the high mortality from GC is mainly due to late presentation.Therefore,early detection and treatment is an important way to reduce death from GC.Several tests have been applied in population screening,such as barium meal and endoscop
12、y,especially in Japan,with an ultimate goal of reducing mortality associated with GC.However,these approaches may be not eligible for mass screening and early detection of GC in most countries including China for the reasons such as acceptance,availability and cost.I n addition,non-invasive serologi
13、cal tests,such as serum pepsinogen and gastrin-17,however,have no sufficient sensitivity and specificity to facilitate the early detection.Therefore,efforts should be invested in the discovery of novel,reliable and non-invasive biomarkers for mass screening and early detection of GC.MicroRNAs(miRNAs
14、)are a class of small non-coding RNAs that can repress translation or promote degradation of target mRNAs of complementary sequences.A single miRNA can influence the expression of hundreds of target genes,and considerable researches consistently establish their central nodal roles in cancer developm
15、ent pathways.Although the molecular mechanisms of miRNAs are incompletely understood in the process of carcinogenesis,specific patterns of miRNA expression have been associated with almost every type of tumour,suggesting 5南京医科大学硕士学位论文diagnostic and prognostic potentials for miRNAs.Since the identifi
16、cation of circulating miRNAs in 2008,considerable researches consistently found that circulating miRNAs are not only stable but degradation-resistant which laid the foundation fbr ideal biomarkers.We and other groups have demonstrated that circulating miRNAs had the potential to be new biomarkers in
17、 patients with solid tumours fbr either early detection or evaluation of therapeutic efficiency.I n recent years,several studies have reported a series of circulating miRNAs differentially expressed in patients with GC,and most of these studies focussed on individual miRNAs selected from previous an
18、alyses on tissue samples and few with systematic miRNA profiling.However,the reported circulating miRNAs are not consistent among studies.Liu et al performed serum miRNA profiling in 20 GC patients and 20 normal controls using Solexa sequencing and identified a five-miRNA signature(miR-1,miR-20a,miR
19、-27a,miR-34 and miR-423-5p)for GC diagnosis with the area under the receiver operating characteristic(ROC)curve(AUC)of 0.800.Thereafter,another group analysed genome-wide serum miRNAs by miRNA microarray,and reported three miRNAs(miR-187*,miR-371-5p and miR-378)significantly elevated in GC patients
20、with the best AUC of 0.861 for miR-378.These two studies reported distinct serum miRNA profiles of GC.The inconsistency may be resulted from inclusion of different gastric tumour subtypes.For example,gastric non-cardia adenocarcinoma(GNCA)and cardia adenocarcinoma(GCA)have distinct clinical and epid
21、emiologic features and each form might be characterized by a distinct expression profile of miRNA.I n addition,identifying differential circulating miRNAs by contrasting controls with GC 6南京医科大学硕士学位论文patients of all tumour stages as a whole might lead to the risk of overrepresenting the aberrant miR
22、NAs from the early-stage GC patients.Therefore,large-scale,well-designed studies are needed to verify the clinical utility of circulating miRNAs for early detection of GC.Herein,we stringently designed a four-phase study to identify a panel of circulating miRNAs as early diagnostic biomarkers of GC
23、and evaluated their clinical usefulness in independent samples.I n the discovery phase,we systematically screened the miRNA expression profile in plasma of 40 GNCA patients(stage I)and 40 matched controls by TaqMan low density array(TLDA)chips.Differentially expressed miRNAs were further validated i
24、n individual sample in the training phase using qRT-PCR assay.Subsequently,in an independent validation phase,the identified miRNAs were evaluated in additional samples,including 48 GNCA patients(stage I),54 subjects with precancerous lesions of GC(PLGC)and 48 healthy subjects.Finally,the expression
25、 levels of the identified miRNAs were assessed in an external validation phase,including 18 stage I and 18 stage I I I/I V GNCA patients,and 18 stage I and 18 stage I I I/I V GCA patients.The differences of miRNAs among groups were tested using the Mann-Whitney unpaired test.With an effort to identi
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 血浆 miRNAs 作为 胃癌 早期 生物 标志 临床 流行病学 研究
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【曲****】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【曲****】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。