DB32∕T 3628-2019 木霉固态菌种生产技术规程(江苏省).pdf
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1、ICS 65.080 B 13 备案号: DB32 江苏省地方标准 DB32/T 36282019 木霉固态菌种生产技术规程 Technical regulation for production of solid Trichoderma spp. spawn 2019 -07 -11 发布 2019 -08 -01 实施 江苏省市场监督管理局 发 布 DB32/T 36282019 I 前 言 本标准按GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准由南京农业大学提出并归口。 本标准起草单位:南京农业大学。 本标准主要起草人:沈其荣、刘东阳、黄启为、李荣、凌宁。 DB32/T 3628201
2、9 1 木霉固态菌种生产技术规程 1 范围 本标准规定了木霉固态菌种生产中所涉及的生产场地要求、生产流程、产品检测、建立生产档案、包装及贮存运输要求等技术环节。 本标准适用于木霉固态菌种的生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件, 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 191 包装储运图示标志 GB 3095 环境空气质量标准 GB 3838 地表水环境质量标准 GB 20287 农用微生物菌剂 NY/T 883 农用微生物菌剂生产技术规程 3 术语与定义 下列术语和定义适用于
3、本文件。 3.1 固态菌种 solid spawn 生长在固态培养基料上的菌种。 3.2 微生物接种剂 microbial inoculant 一种或一种以上的目的微生物经工业化生产增殖后直接使用, 或经浓缩或经载体吸附而成的活菌制品。 3.3 固体培养基 solid medium 以富含木质纤维素或淀粉类天然物质为主要原料, 添加适量的有机氮源及无机盐类, 具一定水分含量的培养基。 4 生产场地要求 DB32/T 36282019 2 4.1 生产基地选择 生产基地应远离居住区、城区等,并且交通便利,生态环境优良,周边植被覆盖率高。生产地块集中连片并位于原料收集区较近的地方。车间保温保湿性能
4、良好,同时具备通风性能。 4.2 生产环境 厂区空气质量达到大气环境质量标准GB 3095中II类标准要求。 发酵用水达到地表水质量标准GB 3838中III类水质要求,冷却水及其他用水应达到标准IV类水质要求。 4.3 生产车间 4.3.1 原料库 原料库要求水电方便,平坦干燥、通风良好,光照充足、空旷宽阔,远离火源,注意防火设施的建设。 4.3.2 接种室 接种室必须设缓冲间,通风和保温性能良好,并具有防尘换气性能,墙内壁和屋顶光滑,必须做好杀菌消毒工作,确保接种室环境的相对无菌。 4.3.3 培养室 培养室内壁和屋顶光滑,便于清洗与消毒,有条件的单位可以建设半地下室的培养室,或者将培养室
5、墙壁加厚,有利于培养室的控温。 4.3.4 检验室 检验室宜留出便于检验仪器设备安装的场所,同时水电布局要求合理,建立车间环境卫生制度,定期对生产设备和环境消毒的。 5 生产流程 5.1 技术环节 木霉固态菌种主要包括木霉高密度液体发酵、 固体基质准备、 接种木霉液体菌种、 固体发酵的控制、固态菌种后处理、产品包装、质量检测及出厂等技术环节。具体工艺流程见附录A。 5.2 菌种要求 5.2.1 原种 原种是生产用菌种的母种,对原种有如下要求: 原种应有菌种鉴定报告。 原种应有菌种的企业编号、来源信息等。 5.2.2 菌种保管 采用固体曲保藏和冻干管保藏的方法保藏木霉固体孢子,确保无杂菌污染,菌
6、种不退化。分类纯化并定期检查,建立菌种档案。 DB32/T 36282019 3 5.2.3 菌种质量控制 在进行生产之前,应对所使用的菌种进行检查,并确认其纯度和性能没有发生退化,如出现污染或者退化情况,该菌种不能作为生产用菌种,应该按照标准NY/T 883执行。 5.3 液体发酵增殖 木霉菌种的液体发酵增殖,按照NY/T 883执行。具体的培养基见附录B。 木霉菌丝体采用棉兰染色法观察:在载玻片中央滴加一滴无菌水,并将菌丝体均匀分布其中,盖上盖玻片,尽量不留气泡,从一侧滴加少量的棉兰染色液染色5 min,染色结束后用无菌水慢慢冲洗染色液,表面风干后在显微镜下观察,染色液配方具体见附录C。菌
7、丝清晰可见,生长良好,没有出现杂菌污染,可以作为菌种继续使用;如果菌丝细小并呈不规则分布或者有杂菌污染,应按标准NY/T 883处理。 5.4 固体培养基制备 5.4.1 培养基要求 发酵培养基要求接种后木霉菌丝体生长旺盛,在保证有一定的生物量(菌丝体)的前提下兼顾分生孢子及有效代谢产物的产生。 原料要求来源充足、价格合理、营养成分充足,宜采用农作物秸秆及农用氨基酸作为主要原料。 5.4.2 制备过程 5.4.2.1 秸秆前处理 以农作物秸秆作为发酵基质,使用前晾干(含水率约15%,含有机质约65%)并用粉碎机将其粉碎成0.3 cm0.4 cm长的片段。 5.4.2.2 氨基酸添加 往上述秸秆
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