FQPCR技术与儿科感染性疾病.pptx
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1、FQ-PCR技术与技术与儿科感染性疾病儿科感染性疾病中山大学达安基因股份有限公司中山大学达安基因股份有限公司市场部市场部 裴媛媛裴媛媛达达达达 生生生生 命命命命 之之之之 源源源源 安安安安 健健健健 康康康康 之之之之 本本本本主要内容主要内容1、聚合酶链式反应(、聚合酶链式反应(PCR)的)的发展发展2、实时荧光定量、实时荧光定量PCR(FQ-PCR)的原理)的原理3、FQ-PCR与与儿科儿科感染性感染性疾病疾病(研究进展)(研究进展)4、达安公司儿科、达安公司儿科FQ-PCR相关产品相关产品PCRPCR的发明人的发明人加理加理 莫理斯(莫理斯(Kary B.Mullis Kary B.
2、Mullis)达达达达 生生生生 命命命命 之之之之 源源源源 安安安安 健健健健 康康康康 之之之之 本本本本http:/ PCRPCR(polymerase chain reactionpolymerase chain reaction)达达达达 生生生生 命命命命 之之之之 源源源源 安安安安 健健健健 康康康康 之之之之 本本本本达达达达 生生生生 命命命命 之之之之 源源源源 安安安安 健健健健 康康康康 之之之之 本本本本PCR PCR 动力学原理动力学原理 指数扩增指数扩增达达达达 生生生生 命命命命 之之之之 源源源源 安安安安 健健健健 康康康康 之之之之 本本本本发发射射光
3、光实时荧光定量实时荧光定量 PCR PCR(Fluorescence Quantitative PCR,(Fluorescence Quantitative PCR,FQ-PCRFQ-PCR)实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR是指在是指在PCRPCR反应体系中加入反应体系中加入荧光基团荧光基团,利用荧光信号的积累利用荧光信号的积累实时监测实时监测整个整个PCRPCR进程,最后进程,最后 通过软件标准曲线对起始模板进行通过软件标准曲线对起始模板进行定量分析定量分析的方法。的方法。FQ-PCRFQ-PCR原理简化图原理简化图(simplified picture of FQ-PCR simpli
4、fied picture of FQ-PCR)达达达达 生生生生 命命命命 之之之之 源源源源 安安安安 健健健健 康康康康 之之之之 本本本本FQ-PCR FQ-PCR 递增的荧光信号强度递增的荧光信号强度检测范围广检测范围广 (10(101 1-10-101010 拷贝数拷贝数/毫升毫升)实时实时数据数据监测荧光曲线监测荧光曲线高灵敏度、高特异性、高稳定性高灵敏度、高特异性、高稳定性高准确性定量分析高准确性定量分析FQ-PCR FQ-PCR 特点特点达达达达 生生生生 命命命命 之之之之 源源源源 安安安安 健健健健 康康康康 之之之之 本本本本荧光阈值荧光阈值&循环阈值(循环阈值(CtC
5、t值)值)达达达达 生生生生 命命命命 之之之之 源源源源 安安安安 健健健健 康康康康 之之之之 本本本本FQ-PCRFQ-PCR扩增的理论模式扩增的理论模式l 理想PCR反应:X=X0*2nl 非理想PCR反应:X=X0(1+Ex)n 在扩增产物达到阈值线时在扩增产物达到阈值线时:X XCtCt=X=X0 0(1+Ex)(1+Ex)CtCt=M (1)=M (1)log M=log X log M=log X0 0(1+Ex)(1+Ex)Ct Ct (2)(2)log X log X0 0=-log(1+Ex)*=-log(1+Ex)*Ct+log M (3)Ct+log M (3)数学原
6、理推导过程数学原理推导过程达达达达 生生生生 命命命命 之之之之 源源源源 安安安安 健健健健 康康康康 之之之之 本本本本FQ-PCRFQ-PCR定量原理图定量原理图达达达达 生生生生 命命命命 之之之之 源源源源 安安安安 健健健健 康康康康 之之之之 本本本本FQ-PCR FQ-PCR 扩增曲线函数关系扩增曲线函数关系(1 1)起始模板量越多,达到荧光阈值的)起始模板量越多,达到荧光阈值的循环数就越少,即循环数就越少,即CtCt值越小。值越小。(2 2)各模板起始拷贝数的对数()各模板起始拷贝数的对数(LogLog浓度)与浓度)与CtCt值值呈线性反比关系,呈线性反比关系,即即起始模板量
7、越多,起始模板量越多,CtCt值越小。值越小。(3 3)通过已知起始拷贝数的标准品作出标准曲线,)通过已知起始拷贝数的标准品作出标准曲线,根据未知样品根据未知样品CtCt值,就可值,就可以以计算出该样品中所含的计算出该样品中所含的起始模板量。起始模板量。达达达达 生生生生 命命命命 之之之之 源源源源 安安安安 健健健健 康康康康 之之之之 本本本本FQ-PCR FQ-PCR 在儿科感染性疾病中的应用在儿科感染性疾病中的应用肺炎支原体肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)人巨细
8、胞病毒人巨细胞病毒(human cytomegalo virus,HCMV)EB病毒病毒(epstein-barr virus,EBv)肠道病毒肠道病毒(enterovirus 71,EV71&coxsackievirus,CoxA16)达达达达 生生生生 命命命命 之之之之 源源源源 安安安安 健健健健 康康康康 之之之之 本本本本研究进展达达达达 生生生生 命命命命 之之之之 源源源源 安安安安 健健健健 康康康康 之之之之 本本本本肺炎支原体肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,mycoplasma pneumoniae,MPMP)CLINICAL MICROBIOLO
9、GY REVIEWS,Oct.2004,p.697728达达达达 生生生生 命命命命 之之之之 源源源源 安安安安 健健健健 康康康康 之之之之 本本本本Science.2009 Nov 27;326(5957):1235-40.Science.2009 Nov 27;326(5957):1235-40.肺炎支原体(肺炎支原体(MPMP)蛋白质图谱绘制完成)蛋白质图谱绘制完成达达达达 生生生生 命命命命 之之之之 源源源源 安安安安 健健健健 康康康康 之之之之 本本本本ScienceScience:呼吸道合胞病毒三维图像:呼吸道合胞病毒三维图像(respiratory syncytial v
10、irusrespiratory syncytial virus,RSVRSV)Three-dimensional (3D)crystal structure of a decameric,annular ribonucleoprotein complex of the RSV nucleoprotein(N)bound to RNA.The variable region is in orange,with the-hairpin highlighted and labeled with the RSV604 resistance mutation sites.Science.2009 Nov
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