DB43∕T 2339-2022 辣椒花药开放式培养技术规程(湖南省).pdf
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1、Technical regulation for anther of pepper in open culture辣椒花药开放式培养技术规程发 布湖南省市场监督管理局2022 -05发布- 0643湖南省地方标准ICSCCS 67.080B 31DB43/T 23392022 2022 - 08实施-06DB43/T 23392022 I 目 次 前言 1 范围 1 2 术语和定义 1 3 试剂和设备 1 4 培养基配制 1 5 花蕾处理 2 6 花药接种 2 7 胚状体诱导 2 8 胚状体分化成苗 2 9 单倍体植株炼苗与移栽 2 10 单倍体植株加倍 3 附录 A(资料性) 辣椒花药开放式
2、培养所需试剂 4 附录 B(资料性) 辣椒花药开放式培养所需仪器 5 附录 C(资料性) 辣椒花药开放式培养培养基配方 6 DB43/T 23392022 II DB43/T 23392022 III 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由湖南农业农村厅提出。 本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。 本文件主要起草单位:湖南农业大学、湖南省蔬菜研究所。 本文件主要起草人:杨博智、周书栋、肖佳林、郑井元、刘周斌、欧立军、戴雄泽、邹学校。
3、 DB43/T 23392022 IV DB43/T 23392022 1 辣椒花药开放式培养技术规程 1 范围 本文件规定了辣椒花药开放式培养的术语和定义、 试剂和设备、 培养基配制、 花蕾处理、 花药接种、胚状体诱导、胚状体分化成苗、单倍体植株炼苗与移栽、单倍体植株加倍等内容。 本文件适用于辣椒花药开放式培养。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 花药开放式培养 Anther open cultivation 指通过往培养基中添加杀菌剂,在脱离无菌环境条件下,剥取辣椒离体花蕾中花药,并将花药接种至培养基中进行培养的一种组织培养方式。 2.2 胚状体 Embryoid 指辣
4、椒花药离体培养过程中,花药中小孢子经过胚胎发生和发育过程,形成与合子胚相似的结构。胚状体进一步培养可形成单倍体植株。 2.3 单倍体植株 Haploid plant 由辣椒花药小孢子发育获得,具有配子染色体的再生植株。 2.4 双单倍体植株 Double haploid plant 对辣椒单倍体植株生长点进行秋水仙素加倍处理后获得的二倍体植株。 3 试剂和设备 3.1 试剂 所有试剂等级均为分析纯,见附录 A。 3.2 仪器设备 所需仪器设备见附录 B。 4 培养基配制 4.1 培养基类型 培养基包括胚状体诱导培养基、胚状体分化成苗培养基两种,其配方见附录 C。 DB43/T 23392022
5、 2 4.2 消毒 培养基配制后调 pH 值为 5.86.0, 然后置于高压灭菌锅中 121 , 1.05 kg/cm2条件下灭菌 15 min。植物生长调节剂及杀菌剂在培养基经高温灭菌,冷却至 60 左右再加入。 5 花蕾处理 5.1 花蕾采集和低温预处理 现蕾期选择生长势好、无病虫害的辣椒植株,采集花萼与花瓣齐平或花瓣微露出花萼的花蕾,放入自封口袋或离心管中,置于冰箱中 4 低温预处理 48 h。 5.2 花蕾消毒 取花蕾,左手捏住花蕾底部花柄,右手用尖头镊子绕离花蕾顶端约 3/4 处轻轻划圈,剥去花蕾顶部的花萼,露出青绿色花瓣。将花蕾置于 5的次氯酸钠溶液中消毒 10 min 后,无菌水
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